高盐饮食加重脑缺血损伤机制

目的探讨高盐饮食加重脑缺血损伤机制。方法 (1)体内实验:高盐饮食14 d小鼠建立永久性大脑中动脉结扎(pMCAL)模型;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测小鼠脑组织损伤面积;伊文思蓝染色检测血脑屏障破坏程度;Western blot方法检测小鼠脑组织中微血管内皮细胞紧密连接蛋白claudin-5表达情况。(2)体外实验:Western blot方法检测高盐环境(80 mmol/L)及氧糖剥夺(OGD)+高盐(80 mmol/L)条件下b End.3小鼠脑微血管内皮细胞claudin-5表达情况。结果 (1)TTC染色显示高盐饮食组小鼠脑缺血面积明显高于正常饮食组(P<0.05);伊文思蓝染色显示高盐饮食组小鼠脑内伊文思蓝含量显著高于正常饮食组(P<0.01);Western blot结果显示高盐饮食组小鼠脑组织中claudin-5表达明显低于正常饮食组(P<0.05)。(2)体外实验Western blot结果显示,与正常培养组相比,高盐组脑内微血管内皮细胞claudin-5表达显著降低(P<0.01);与OGD组相比,OGD+高盐组,小鼠脑微血管内皮细胞claudin-5蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论高盐饮食加重脑缺血损伤;高盐饮食可下调脑血管内皮细胞紧密连接蛋白claudin-5的表达,破坏血脑屏障,加重脑损伤。

S100/RAGE在实验性自身免疫性重症肌无力中对T细胞的作用及其机制研究

目的:探讨RAGE及其配体S100B在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)中对T细胞的作用及其相关机制。方法:选取体重160-180g的Lewis大鼠,并将其随机分为EAMG模型组和CFA对照组。EAMG模型组大鼠通过尾根部注入200μL含有R-ACh R97-116肽段的免疫乳剂,并于初始免疫后的第30天尾根部追加免疫一次;CFA对照组大鼠为免疫乳剂中不含有R-ACh R97-116肽段。采用流式细胞术检测和比较两组大鼠CD4+T细胞上RAGE的表达情况;ELISA方法检测淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β、IL-6和S100B的表达水平;采用S100B体外干预淋巴细胞,进一步检测S100B对EAMG大鼠T细胞增殖、亚型分布、细胞因子分泌的影响。结果:在疾病发生的晚期时相(初次免疫后第45天),EAMG组淋巴细胞CD4+T细胞上RAGE的表达明显高于CFA组(P<0.001),血清中RAGE的配体S100B的表达也高于CFA组(P<0.001);体外加入S100B干预能促进T淋巴细胞的增殖,与未干预组相比较差异显著(P<0.05);S100B刺激后,Th1细胞和Th17细胞的百分比进一步增高,Th2细胞和Treg细胞百分比下降(PTh1<0.05,PTh17<0.05,PTh2>0.05,PTreg<0.05),IFN-γ和IL-17的表达上调(PIFN-γ<0.05,PIL-17<0.05),而IL-4和TGF-β表达下降(PTGF-β<0.01,PIL-4>0.05),Th17细胞的调控因子IL-6表达升高(PIL-6<0.05)。结论:RAGE及其配体S100B参与EAMG的发病过程,在晚期时相中表现出明显的致病性;RAGE与S100B相互作用可以上调T细胞的致病性作用,加重四种辅助性T细胞之间的网络失衡。

t-PA对EAE病理性淋巴细胞与血脑屏障粘附的影响

目的:研究组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠病理性淋巴细胞与血脑屏障粘附的影响。方法:用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠建立EAE动物模型,于发病高峰期取淋巴细胞用MOG35-55肽段进行刺激得到抗原特异性T淋巴细胞。通过尾静脉给予t-PA的方法对EAE小鼠进行干预,临床评分评价小鼠的发病情况。体外培养小鼠血脑屏障内皮细胞系b End.3,应用不同浓度的t-PA进行处理。用荧光标记MOG35-55特异性T细胞进行细胞粘附实验,用Transwell小室建立体外血脑屏障模型进行细胞迁移实验。用免疫荧光化学方法检测ICAM-1的表达情况。结果:t-PA处理可以使血脑屏障内皮细胞与T淋巴细胞粘附和迁移作用增强。在体外细胞培养模型中检测到t-PA诱导ICAM-1表达升高。经过t-PA处理的小鼠,其血管内皮表面ICAM-1的表达也有所上升。经t-PA处理的EAE小鼠发病高峰提前,症状加重。结论:t-PA处理可以使EAE病理性淋巴细胞与血脑屏障内皮的粘附性增加,浸润能力增强;t-PA所引起的粘附性增加可能与b End.3表面ICAM-1表达升高有关。

自然杀伤细胞参与脑缺血后损伤的作用机制

目的探讨自然杀伤细胞（NK）参与脑缺血后损伤的作用机制。方法①体内实验：免疫荧光检测永久性大脑中动脉栓塞（pMCAO）小鼠模型脑组织中NK细胞浸润情况以及干扰素（IFN）-γ表达情况；流式细胞术检测pMCAO小鼠模型脑中NK细胞浸润数目和IFN-γ表达；腹腔注射NK细胞中和抗体，流式细胞术检测pMCAO小鼠12h脑内NK细胞浸润情况。②体外实验：建立体外血脑屏障并加入NK细胞和荧光标识的牛血清白蛋白（BSA—FITC），氧糖剥夺（OGD）实验6h后荧光分光光度计检测血脑屏障通透性；将NK细胞与小鼠神经细胞共培养，并加入IFN-γ阻断剂，OGD6h后流式细胞术检测神经细胞凋亡。结果①体内实验示pMCAO小鼠脑中有NK细胞浸润和IFN-γ表达，与非缺血侧相比，缺血侧的NK细胞浸润显著增多并于12h达到高峰（P12h〈0．001）；脑缺血组织中浸润的NK细胞表达IFN-γ与非缺血侧相比增多（P12h〈0．001、P24h〈0．01、P96h〈0．05）；清除体内NK细胞后，pMCAO小鼠脑内NK细胞浸润显著减少（P〈0．001），脑内IFN-γ表达显著下降（P〈0．001）。②体外实验示OGD条件下，NK细胞组与对照组相比，BSA-FITC渗透显著增多（P〈0．01）；NK细胞可促进神经细胞死亡（P〈0．01）。结论NK细胞参与脑缺血损伤过程；NK细胞通分泌IFN-γ加重血脑屏障破坏和神经细胞损伤。

动脉粥样硬化中的T细胞和B细胞的研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是在动脉壁上形成的纤维脂肪病变,由它引起的心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是造成全世界范围内死亡的第一大病因。该疾病的主要特征是脂蛋白在内皮下的累积导致血管壁中持续发生的炎症反应,因此多种固有免疫细胞和适应性免疫细胞都参与了该疾病的发生和发展。自身抗原和非自身抗原可以通过触发T细胞和B细胞局部的应答导致血管炎症。大量临床和实验数据表明T细胞和B细胞都参与了AS的形成,并且不同的细胞亚群可能具有完全相反的作用。文章就AS中T细胞和B细胞调节机制进行了概述,以期为AS的预防和治疗提供新的思路。