血管组织工程中单根主动脉培养的内皮细胞和平滑肌细胞形态学和生长增殖

目的:探索体外培养及扩增同一来源内皮细胞和平滑肌细胞的有效方法,为研究内皮细胞和平滑肌细胞相互关系和体外构建组织工程血管提供理论和实践基础。方法:在体外用酶消化法和组织块贴壁法分别建立内皮细胞和平滑肌细胞的原代,并应用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸钠传代培养。应用光镜、透射电镜和细胞计数对内皮细胞和平附肌细胞的形态和增殖进行研究。结果:酶消化法和植块培养法可以有效的建立起内皮细胞和平滑肌细胞的原代。讨论:内皮细胞和平滑肌细胞作为血管构成的基本细胞,对于它们的形态学、体外培养和扩增以及相互关系的研究具有重要的意义。

纤维蛋白胶塑形、异体微粒软骨脱细胞基质支架的人工软骨研究

目的:利用软骨微粒脱细胞基质这种新型支架材料及纤维蛋白胶,体外构建可塑形及具有良好生物相容性的组织工程化软骨。方法:制备绵羊关节软骨微粒脱细胞基质并与体外扩增的异体关节软骨细胞及纤维蛋白胶混合,塑成圆柱形,体外培养。结果:软骨微粒脱细胞基质及纤维蛋白胶与异体软骨细胞有良好的生物相容性,软骨细胞生长和分泌功能良好,塑成的复合物具有一定的硬度和弹性。结论:塑成的圆柱形软骨细胞-异体软骨微粒脱细胞基质-纤维蛋白胶复合物可于体外形成软骨样组织,可进一步应用于体内修复关节软骨缺损。

带血管蒂甲状腺甲状旁腺胸腺联合移植术

目的探讨联合移植甲状腺甲状旁腺及胸腺治疗甲状腺癌根治术后甲状旁腺功能低下症及预防甲状腺癌复发。方法将带血管蒂甲状腺甲状旁腺及胸腺整块移植给甲状腺癌根治术后继发甲状旁腺功能低下症的患者,观察移植物存活、临床效果及T细胞亚群变化。结果移植后患者的钙剂用量有所减少,临床症状有所改善。移植物血流良好。血钙及甲状旁腺素水平有所变化,但未恢复正常。CD3,CD4/CD8比值升高。结论带血管蒂甲状腺甲状旁腺胸腺联合移植近期可以改善甲状旁腺功能低下症患者的临床症状,远期疗效及抑制甲状腺癌复发的作用尚需长期观察。

软骨微粒脱细胞基质微载体的制备及其特性研究

目的制备以软骨微粒脱细胞基质为原料的微载体,为体外大量培养软骨细胞提供实验依据。方法利用胰蛋白酶等试剂制备直径为0.100～0.154mm的软骨微粒脱细胞基质并寻找胰蛋白酶的最佳含量及时间。取绵羊的新鲜膝、肘关节软骨600g,随机分为5组,每组8例,用不同含量的胰蛋白酶作用2～36h。标本进行大体观察,苏木精-伊红、胶原染色,光镜及扫描电镜观察,密度、含水量测定。结果微粒软骨脱细胞基质微载体无抗原性成分存在,主要含有胶原,氨基葡聚糖等混合细胞外基质成分。微粒呈不规则形,表面粗糙。软骨微粒脱细胞基质干重密度为0.6547g/mL,湿重密度为1.0627g/mL,含水量为72%。胰蛋白酶的最佳含量为0.25g/L,最适作用时间为(18.3±1.6)h。结论以软骨微粒为原料的微载体具有天然细胞外基质成分,是一种体外培养软骨细胞的良好载体。

联合培养的内皮细胞对平滑肌细胞增殖和形态的影响

目的探索体外培养和扩增同一来源内皮细胞和平滑肌细胞的有效方法,研究联合培养的内皮细胞对平滑肌细胞形态和增殖的影响。为研究内皮细胞和平滑肌细胞相互关系和体外构建组织工程血管提供理论和实践基础。方法在体外用酶消化法和组织块贴壁法分别建立内皮细胞和平滑肌细胞的原代,并应用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸钠传代培养。应用光镜、透射电镜、细胞计数和MTT法对内皮细胞和平滑肌细胞的形态和代谢进行研究。模拟血管壁的内层结构及内皮细胞和平滑肌细胞间的相互影响途径,建立以聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜为介质的内皮细胞与平滑肌细胞联合培养模型。分3组:内皮细胞,平滑肌细胞、平滑肌细胞/平滑肌细胞和空白/平滑肌细胞,应用3H-TdR掺入法研究联合培养的内皮细胞对平滑肌细胞增殖的影响。结果酶消化法和植块培养法可以有效地建立起内皮细胞和平滑肌细胞的原代。内皮细胞对联合培养的平滑肌细胞早期增殖有促进作用,晚期则增殖缓慢。结论以PET膜为介炙联合培养同一来源的内皮细胞和平滑肌细胞的新模型是研究两者间相互影响的良好模型。内皮细胞和平滑肌细胞作为血管构成的基本细胞,对于它们的形态学、体外培养和扩增以及相互关系的研究具有重要的意义。

额部带蒂皮瓣全鼻再造术

目的探讨应用在额部扩张后带蒂皮瓣行全鼻再造术的效果。方法在前额部的软组织下埋入软组织扩张器，经过8周后将软组织用扩张器注水完成扩张，并持续4-6周。在前额上以一侧知名动脉为血管蒂设计三叶状的带蒂皮瓣，向下反转重建外鼻。结果7块额部扩张皮瓣转移后完全存活，1例岛状皮瓣转移的患者鼻翼边缘有少许坏死，余5例患者再造鼻的外形与鼻的通气功能均良好，随访9个月至4年8个月，皮瓣无回缩，额部供区无明显瘢痕。结论额部扩张后带蒂皮瓣为全鼻再造的理想治疗方案，带蒂转移的术式更安全可靠，是一种理想的手术方法。

预制作生物工程性肌骨瓣的实验研究

目的探索用羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)的支架材料与成骨细胞复合构成组织工程性肌骨瓣的方法,为修复骨缺损奠定基础。方法自2004年12月至2006年1月,将36只新西兰大耳白兔髂后上棘抽取骨髓基质干细胞并诱导分化为成骨细胞,与HA/TCP结合培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况。将复合物埋入兔的背阔肌下构成组织工程性肌骨瓣。术后6周进行大体解剖观察,HE染色,研究组织工程性肌骨瓣的生长情况。结果扫描电镜显示支架材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好的增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长,植入体内6周后取材见内植物有新骨形成,多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构。结论骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞,与HA/TCP结合构建出组织工程性肌骨瓣。

以骨间前动脉背侧支为蒂的桡骨瓣移位治疗月骨无菌性坏死

目的 探索治疗月骨无菌性坏死的有效方法。方法 对月骨无菌性坏死采用X线片等手段进行早期和晚期诊断 ,并设计以骨间前动脉背侧支为蒂的桡骨瓣移位术 ,替代坏死破裂的月骨。结果 临床应用 8例 ,术后随访 3～ 9个月 ,愈合时间 3～ 5个月 ,腕关节疼痛消失、功能基本恢复正常。结论 采用骨间前动脉背侧支为蒂的桡骨瓣移位术能够重建月骨血运 ,促使月骨自身恢复。该手术操作简便 。

一种简便可靠的胎鼠骨骼软骨染色方法

目的获得一种简便可靠、效果令人满意的适用于胎鼠肢体的骨骼软骨染色方法。方法Wistar胎鼠依次浸泡95%酒精、含有0.3%阿利辛蓝和0.1%茜素红的染色液、1%KOH及1%KOH/20%甘油透明液后,立体显微镜观察染色效果。结果能清晰观察胎鼠四肢骨骼软骨的结构。结论本方法简化和改进了复杂的染色过程,并取得了满意的染色效果。

曲拉通X-100对制备脱细胞血管基质影响的实验研究

目的 为将内皮细胞和平滑肌细胞种植于脱细胞血管基质 (ACTM)上形成组织工程化血管提供实验依据。方法 用曲拉通 (Triton)X 10 0等试剂制备猪胸主动脉ACTM ,并寻找曲拉通X 10 0的最佳浓度。取家猪的新鲜去除外膜胸主动脉 5 6根 ,随机分成 7组 ,每组分别浸入不同浓度的曲拉通X 10 0中作用 14 4～ 2 4 0h。标本作HE弹力纤维染色 ,大体、光镜及透射电镜观察。结果 经上述试剂处理后 ,光镜及透射电镜检查显示 ,制备出的猪胸主动脉脱细胞血管基质由胶原纤维、弹力纤维和某些不可溶的、变性细胞器构成。曲拉通X 10 0最佳浓度为 1%。时间为 176 2 5h± 5 5h。结论 本方法可成功制备猪胸主动脉ACTM ,1%曲拉通X 10

软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质体外相容性的研究

目的探索以异体软骨微粒脱细胞基质为支架构建组织工程化软骨。方法多步骤酶法将绵羊关节软骨制成微粒脱细胞基质,行大体、光镜(苏木素伊红、胶原、甲苯胺蓝染色)、扫描电镜观察,同时测定微粒的胶原、氨基葡聚糖、DNA含量。异体绵羊关节软骨细胞分离、体外扩增,并与软骨微粒脱细胞基质混合体外培养0～35d,倒置显微镜及扫描、透射电镜观察,同时测定羟脯氨酸,氨基葡聚糖,DNA含量及细胞黏附率。结果软骨微粒脱细胞基质只含有基质成分,直径0.100～0.154mm,胶原,氨基葡聚糖及DNA含量分别为204.4±3.1μg/mg,18.3±2.0μg/mg和0.042±0.013μg/mg。异体软骨细胞紧紧围绕于异体软骨微粒脱细胞基质四周,二者形成的复合物中胶原、氨基葡聚糖及DNA含量于第7d与0d相比具有统计学意义(P<0.05),分别与14d(胶原、DNA)和21d(氨基葡聚糖)达高峰,随后维持在高水平。细胞黏附率为92%。结论软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质有良好的生物相容性,为组织工程方法再造软骨提供又一支架材料。

应用离心管技术以异体微粒软骨脱细胞基质为支架体外构建组织工程软骨

目的将软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质相结合,构建组织工程软骨.方法分别利用氯化钾、胰蛋白酶和乙二胺四乙酸钠对绵羊关节软骨进行脱细胞,并制成直径0.100～0.154 mm的微粒.先分离异体关节软骨细胞并进行体外扩增,再将异体软骨细胞与软骨微粒脱细胞基质混合培养,离心后应用离心管体外培养.结果本脱细胞方法可以使关节软骨细胞完全脱落,且软骨细胞紧紧围绕于异体软骨微粒脱细胞基质四周,生长和分泌功能良好.结论软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质有良好的生物相容性,可于体外形成软骨样组织.

脂质体携前列腺素E_1对皮瓣缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨脂质体携载前列腺素E1 (PGE1 )对大鼠皮瓣缺血 再灌注损伤的保护机制。方法 制成大鼠下腹部岛状皮瓣缺血 再灌注损伤模型 ,将 32只大鼠随机分为 4组 ,用测量、称重以及组织化学、放射免疫和原子吸光度的方法进行观察。结果 脂质体携载PGE1 治疗明显减轻缺血 再灌组织及细胞线粒体的钙超载 (P <0 .0 1) ,抑制缺血 再灌注引起的血浆乳酸脱氢酶和组织蛋白酶D活性增加 (P <0 .0 1) ,降低血浆脂过氧化物丙二醛含量和血浆内皮素含量 (P <0 .0 5 )。脂质体携载PGE1 的治疗作用明显优于相同剂量的游离PGE1 的作用。结论 脂质体携载PGE1 对皮瓣缺血 再灌注损伤具有潜在临床治疗价值。

颞筋膜蒂乳突发际皮瓣修复前额发际皮肤缺损

目的探讨额颞部发际内外皮肤缺损的修复方法。方法近十年间，应用耳后发际颞筋膜蒂岛状皮瓣转移修复前额颞部发际皮肤缺损5例。结果皮瓣全部成活，5～7d可见头发生长，发际内外界限清楚，额颞部形态佳。结论应用耳后发际颞筋膜蒂岛状皮瓣转移修复颞额部发际皮肤缺损是一种可行的方法。

脐旁岛状皮瓣修复阴茎、阴囊皮肤完全撕脱伤一例

本例阴茎、阴囊皮肤完全撕脱伤采用脐旁岛状皮瓣修复获得成功。以皮瓣修复阴囊无可非议 ,但用同一块皮瓣如何设计剪裁兼用于修复阴茎、阴囊 ,文中未做详细说明。由图 1,2所见 :阴茎整体尚被盖有皮下组织 ,表面有血管走行分布 ,并似有包皮过长 ,若能选用将包皮内板翻转覆盖部分创面 ,所余创面移植全厚或厚的中厚皮片的手术方法 ,则其外形不致有与阴茎再造相似之臃肿 ,且功能更有保证 ,手术也简单易行。故本例选择以皮瓣修复阴茎的适应证值得商榷。