基于精准教学的翻转课堂教学模式在神经外科临床实践教学中的设计应用

目的探讨基于精准教学的翻转课堂教学模式在神经外科临床实践教学中的应用效果。方法选取2018年9月至2019年9月哈尔滨医科大学附属第二医院2016级临床医学专业学生118人,采用随机数表将其分为实验组80人(基于精准教学的翻转课堂教学模式组,即A组,40人;单纯翻转课堂教学模式组,即B组,40人)和对照组(传统教学模式组,即C组,38人),学习周期为1周。按照各组教学方法进行临床实践教学,实习结束后比较各组学生理论课考试成绩、临床实践技能考核成绩并进行不同教学方法满意度调查问卷。结果A组与B组理论课考试成绩差异无显著性(P>0.05),但均优于C组(P<0.05);临床实践技能考核成绩A组优于B组与C组,B组优于C组,差异有显著性(P<0.05);A组学生满意度为95%,高于B组(83.3%)与C组(75%),差异有显著性(P<0.05)。结论基于精准教学的翻转课堂教学模式能够明显提高神经外科临床实践与操作能力,激发学生的学习兴趣,培养自主学习能力,学习效率得到显著提高。

3D打印技术在神经外科临床教学中的应用

3D打印技术是一类按照数字模型将材料叠加熔结在三维空间进而构造出实物的快速成型技术,目前已经在医学生物领域中得到广泛应用。神经外科临床教学内容复杂,难以在短时间内取得良好的教学效果。不断进展的影像学技术确保3D打印可应用于神经外科临床教学中,加深医学生对神经系统复杂解剖结构的理解,提供模拟神经外科手术练习,迅速掌握神经外科手术技巧,提高神经外科的教学效率,是培养优秀神经外科医生的重要途径。

神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤实验研究

目的探讨大鼠胚胎神经干细胞移植治疗局灶性脑缺血再灌注损伤的可行性。方法孕龄8～10d的大鼠神经干细胞在体外扩增后，用免疫组织化学方法分别检测神经干细胞及其分化后代的特异性标志蛋白nestin、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达。分别于缺血后不同时间窗将神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠模型的缺血半暗带和梗塞中心，移植4W后比较不同移植部位神经干细胞存活、增殖和迁移的差异。结果从胎鼠中成功培养出悬浮生长的可表达nestin的神经球，其在含血清条件下可分化为表达GFAP的胶质细胞和表达NSE的神经元。神经干细胞移植4W后可见所有移植动物的细胞都存活，梗塞中心移植的细胞存活、增殖水平明显低于半暗带移植的细胞。结论大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠梗塞中心和半暗带均可长期存活，其增殖能力与移植部位密切相关。

神经干细胞脑室内移植治疗大鼠脑缺血的实验研究

目的探讨大鼠胚胎神经干细胞移植治疗局灶性脑缺血再灌注损伤的可行性。方法取胎龄8～10d大鼠神经干细胞体外扩增,采用免疫组织化学方法检测神经干细胞及其分化后代的特异性标志巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。以Brdu表记神经干细胞,分别于缺血后24h和4周移植至局灶性脑缺血大鼠模型的脑室内和梗死中心,比较不同移植部位和不同移植时间神经干细胞的存活、增殖和迁移情况。结果移植后可见移植细胞存活至少8周以上,移植部位不同不影响细胞存活。脑室内移植细胞向脑缺血区域迁移,且以缺血后24h移植组较缺血后4周移植组迁移趋向性更强。结论大鼠胚胎神经干细胞移植至局灶性脑缺血大鼠脑室内和梗死中心均可长期存活并广泛迁移,其迁移趋化能力与缺血后移植时间有关。

神经干细胞移植治疗脑卒中后遗症50例临床效果分析

目的:观察应用神经干细胞移植治疗改善脑卒中患者功能独立性的临床疗效。方法:选择2004-01/2005-06哈尔滨医科大学附属第二医院和北京武装警察部队总医院收治的脑卒中患者50例。男31例,女19例;平均55岁;末次发病至接受神经干细胞移植时间平均为3.4年。其中基底节病变39例,脑干病变3例,其他部位(丘脑、大脑半球)8例,累计多部位的病变6例。所有患者腰椎穿刺蛛网膜下腔植入神经干细胞,1次/周,共计3次。采用美国功能独立性评测评分对患者术前,术后6月进行评定。主要评价6个方面的能力:生活自理能力,括约肌控制能力,活动能力,行动能力,理解交流能力,社会认识能力。分值高表示功能独立性好。结果:50例患者全部进入结果分析。脑卒中患者干细胞移植后6个月功能独立性评分显著高于移植前(99.86±7.61,95.84±7.51,P<0.01)。结论:神经干细胞移植可以一定程度地改善脑卒中患者的后遗症,提高患者生活质量。

大鼠局灶性脑缺血后神经前体细胞增殖迁移的研究

目的研究成年大鼠内源性神经前体细胞在局灶性脑缺血后不同时间窗的增殖分化情况。方法用Longa线栓法制作大鼠脑缺血模型,用免疫组化的方法检测大鼠内源性神经前体细胞最佳增殖时间及最大增殖效果。结果脑缺血半球室管膜下区、嗅球和头端迁徙渠道(rostralmigratorystream,RMS)Brdu阳性细胞数在脑缺血后1d明显增多,3～7d达高峰,14d后开始下降;Brdu阳性细胞数在脑缺血半球室管膜下区和嗅球成正相关;脑缺血侧海马齿状回未见Brdu阳性细胞数明显增多;Brdu阳性细胞在脑缺血后第3周数量最大,从第4周开始下降。结论成年大鼠局灶性脑缺血后3～7d内源性神经前体细胞增殖达高峰,在该期进行外源性细胞移植治疗可能更有效。

PKC在孤啡肽抑制大鼠皮层神经元瞬时外向钾离子电流中的作用

目的研究蛋白激酶C(PKC)对孤啡肽(N/OFQ)抑制大鼠皮层神经元瞬时外向钾电流(IA)的影响,初步探讨N/OFQ抑制IA的PKC信号途径。方法采用全细胞膜片钳技术,观察PKC特异性抑制剂chelerythrine对N/OFQ抑制大鼠皮层神经IA的影响。结果①与0.1μmol/L N/OFQ单独作用时,对IA的抑制作用相比,在cherythrine预处理的大鼠皮层神经元,在-40～-15 mV电压范围内,N/OFQ使IA的I-V曲线升高,而在-15～+60 mV电压范围内使IA的I-V曲线明显降低(n=10,P<0.05);②在指令电压+60 mV时,给予N/OFQ使IA的电流值由(1778.51±239.50)pA降至(1175.1±257.03)pA(n=10,P<0.05),抑制百分率为(33.93±6.62)%,与N/OFQ单独作用引起的(23.20±2.17)%的抑制率相比,具有显著性差异(n=10,P<0.05)。结论在不同电压下,chelerythrine对N/OFQ抑制大鼠皮层神经IA的影响不同,说明PKC在N/OFQ抑制IA中的作用因不同电压而具有双向性。

神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血:移植部位与移植时间的比较

目的:观察大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠脑室内的迁移和分化。方法:实验于2003-05/2004-12在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。孕龄8～10dWistar大鼠仔鼠神经干细胞体外扩增后,用免疫组织化学的方法分别检测神经干细胞及其分化后代的特异性标志蛋白巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达,健康Wistar大鼠40只大脑中动脉闭塞后随机分成梗塞后24h脑室内移植神经干细胞组、闭塞后24h梗死中心移植神经干细胞组、闭塞后4周脑室内移植神经干细胞组、闭塞后4周梗死中心移植神经干细胞组,各实验组均有仅移植生理盐水的空白对照。比较不同移植部位和不同移植时间神经干细胞存活、增殖和迁移的差异。结果:实验大鼠40只均进入结果分析。从胎鼠中成功培养出悬浮生长的可表达巢蛋白的神经球,含血清条件下可分化为表达胶质纤维酸性蛋白的胶质细胞和神经元特异性烯醇化酶的神经元,移植后可见移植细胞存活至少8周以上,①闭塞后24h脑室内移植神经干细胞组可见移植细胞大量存活,穿过室管膜向脑组织迁移,特别是向缺血周边区迁移;②闭塞后24h梗死中心移植神经干细胞组细胞主要聚集在梗死中心移植区域,也有大量细胞存活,充填梗死区,少量细胞可穿过胼胝体向健侧迁移;③闭塞后4周脑室内移植神经干细胞组仅见少量Brdu阳性细胞存活,但细胞增殖分裂较闭塞后24h脑室内移植神经干细胞组不明显,且存活细胞主要仍在移植部位;④闭塞后4周梗死中心移植神经干细胞组存活移植细胞也较闭塞后24h梗死中心移植神经干细胞组明显减少。结论:大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠脑室内可长期存活并广泛迁移,不同移植部位不影响细胞存活,脑室内移植细胞向脑缺血区域迁移,缺血后24h移植较缺血后4周移植其迁移趋向性更强。

大鼠脑损伤后经枕大池及立体定向脑内移植神经干细胞的对比研究

目的探讨大鼠脑损伤后,将神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)经枕大池移植到蛛网膜下腔及立体定向移植到脑内,观察神经功能恢复情况。方法体外培养的NSCs取自胎鼠皮层,采用Feeney自由落体脑创伤模型制成大鼠脑损伤模型,伤后24小时将NSCs经枕大池移植到蛛网膜下腔及经立体定向移植到脑内。伤前24小时、伤后24小时及1、2周行动物运动神经功能评分。结果接受NSCs移植的两组大鼠神经运动功能评分均较损伤对照组明显提高(P<0.05),两移植组大鼠神经运动功能评分无明显差别。结论经枕大池移植的NSCs具有远距离迁移能力,并能像脑内移植一样明显有助于大鼠神经运动功能的恢复。

自体肋间神经联合酸性成纤维细胞生长因子移植治疗高位脊髓损伤

背景:酸性成纤维细胞生长因子具有调节细胞增殖、移行、分化和生存的作用,也可以下调已知轴突再生的抑制因子如蛋白聚糖等,帮助轴突克服这些抑制因子,对神经纤维再生有重要作用。目的:观察酸性成纤维细胞生长因子联合周围神经移植治疗大鼠高位脊髓损伤的可行性及效果。方法:健康成年雌性SD大鼠108只随机抽签法分为自体神经组、自体神经联合生长因子组、高位脊髓横断组。咬除大鼠T8～10棘突、椎板,显露硬膜囊,水平切断高位脊髓并切除3mm,显微镜下确认无神经纤维相连。自体神经组、自体神经联合生长因子组取双侧第8～10对肋间神经各2cm,将肋间神经交叉移植入高位脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),分别以纤维蛋白凝胶、含有酸性成纤维细胞生长因子的纤维蛋白凝胶固定植入的肋间神经,缝合硬膜。高位脊髓横断组断端间旷置。术后90d,行体感诱发电位及运动诱发电位检测观察神经电生理恢复情况。术后76d,生物素葡聚糖胺顺行神经示踪观察运动传导束恢复情况。术后60d,后肢BBB运动功能评分观察肢体运动恢复情况。结果与结论:高位脊髓横断组大鼠均未引出体感及运动诱发电位波形。自体神经组、自体神经联合生长因子组均可引出体感及运动诱发电位,自体神经联合生长因子组体感诱发电位及运动诱发电位的平均潜伏期和波幅、BBB评分均明显优自体神经组(P<0.01)。自体神经组和自体神经联合生长因子组在损伤区有较多生物素葡聚糖胺标记阳性神经纤维通过,明显多于高位脊髓横断组(P<0.01),自体神经联合生长因子组多于自体神经组(P<0.01)。提示自体周围神经移植酸性成纤维细胞生长因子能更好地恢复高位脊髓损伤后大鼠肢体运动功能。

CNTF对神经干细胞体外增殖的影响

目的探讨睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对神经干细胞体外增殖的影响。方法原代培养新生SD大鼠的室下区神经干细胞并鉴定,经传代纯化后,用不同浓度CNTF(0.1、0.5、1、5、10、20、30 ng/ml)处理5～7 d,MTT实验检测神经干细胞增殖活性。不完全培养5～7 d,免疫荧光技术检测神经干细胞GFAP、NSE表达。结果 MTT结果显示:CNTF浓度为30 ng/ml时对神经干细胞增殖的促进作用最明显(P<0.01);免疫荧光结果显示:神经干细胞Nestin标记阳性,不完全培养后,NSE及GFAP均表达阳性。结论 CNTF对体外培养神经干细胞有促进增殖作用,并且呈剂量依赖性。

医院组织创新气氛与护士对优质护理评价的相关性研究

目的探讨现阶段医院组织创新气氛与优质护理的相关性,为提高优质护理水平提供参考。方法运用医院组织创新气氛评估量表和护士优质护理观点测评表对280名注册护士进行问卷调查。结果护士对医院组织创新气氛的总体评分为2.85分,护士认为所提供的护理服务为4.29分。组织创新气氛与护士提供的优质护理呈正相关(P<0.01)。结论护士对医院组织创新气氛的总体测评情况比较乐观,护士认为所提供的护理服务处在较高的水平。和谐的组织创新气氛有利于激发创造性的思考,提高组织绩效,使护士能够更好地履行护理职责,提供优质护理。

人工周围神经种子细胞的研究进展

修复组织和器官缺损一直是研究热点。组织工程学的应用使这项研究增加了新的内容。在修复周围神经的研究过程中,人工神经是一种新兴的组织工程学技术。这项技术不仅要选择合适的框架,更关键的是要选择合适的种子细胞。这类种子细胞不仅要分泌促神经再生的因子,更要通过分泌细胞外基质及与再生轴索间的相互作用实现促进神经再生的作用。雪旺细胞,骨髓间充质干细胞和神经干细胞是研究较多的三类细胞。现就这三类细胞在周围神经再生中的应用作一综述。

抑制p53通路促进移植神经干细胞在脑缺血区的存活

目的探讨一种提高移植神经干细胞(neural stem cells,NSC)在脑缺血区存活的方法。方法原代培养胚胎NSC并鉴定。采用改良Longa线栓法成功制作60只大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为3组:对照组(n=12)、NSC移植组(n=24)和NSC+P53抑制剂(pifithrin-α,PFT-α)移植组(n=24)。以上3组在脑梗死模型建立24 h后,分别于脑内特定部位注射等量DMEM/F12培养液、NSC悬液和NSC+PFT-α悬液。细胞移植12 h、24 h和7 d后行免疫荧光染色,检测P53蛋白表达和移植NSC的存活情况。结果移植后12 h,NSC移植组P53蛋白主要表达在移植细胞的细胞核,而NSC+PFT-α移植组P53蛋白的表达主要位于移植细胞的细胞质。移植后7 d,NSC+PFT-α移植组NSC的存活数为(18.20±2.69)/高倍镜视野,NSC移植组为(13.06±3.20)/高倍镜视野,两组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 NSC移植联合PFT-α对提高移植细胞的存活率有重要意义。

立体定向移植神经干细胞治疗局灶性大鼠脑缺血损伤的研究

目的 观察大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠脑室内的迁移和分化。方法 实验于2003年5月～2004年10月在哈尔滨医科大学附属二院动物实验中心完成。孕龄8～10d Wistar大鼠仔鼠神经干细胞体外扩增后用免疫组织化学的方法分别检测神经干细胞及其分化后代的特异性标志蛋白-巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达，健康Wistar大鼠大脑中动脉闭塞后40只随机分成A、B、C、D四组，A组为梗塞后24小时脑室内移植神经干细胞组，B组为梗塞后24小时梗塞中心移植神经干细胞组，C组为梗塞后4周脑室内移植神经干细胞组，D组为梗塞后4周梗塞中心移植神经干细胞组，各实验组均有仅移植生理盐水的空白对照。比较神经干细胞不同移植部位和不同移植时间神经干细胞存活、增殖和迁移的差异。结果 实验大鼠40只均进入结果分析。从胎鼠中成功培养出悬浮生长的可表达巢蛋白的神经球，含血清条件下可分化为表达胶质纤维酸性蛋白的胶质细胞和神经元特异性烯醇化酶的神经元，移植后可见移植细胞存活至少8周以上，A组可见移植细胞大量存活，穿过室管膜向脑组织迁移，特别是向缺血周边区迁移；B组细胞主要聚集在梗塞中心移植区域，也有大量细胞存活，充填梗塞区，少量细胞可穿过胼胝体向健侧迁移；C组仅见少量Brdu阳性细胞存活，但细胞增殖分裂较A组不明显，且存活细胞主要仍在移植部位；D组存活移植细胞也较B组明显减少。结论 大鼠胚胎神经干细胞移植到局灶性脑缺血大鼠脑室内可长期存活并广泛迁移，不同移植部位不影响细胞存活，脑室内移植细胞向脑缺血区域迁移，缺血后24小时移植较缺血后4周移植其迁移趋向性更强。

慢病毒介导CD-TK融合基因转染对神经干细胞体外增殖的影响

目的探讨慢病毒介导胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)及胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase,TK)融合基因转染对神经干细胞体外增殖的影响。方法原代培养新生Wistar大鼠室下区神经干细胞并鉴定,经传代纯化后,用CD-TK基因包装的慢病毒处理3～5 d。MTT实验检测神经干细胞增殖活性,免疫荧光技术检测转染后神经干细胞GFAP、NSE表达。结果 MTT结果显示CD-TK融合基因转染对神经干细胞增殖无影响(P>0.05)。免疫荧光结果显示:神经干细胞Nestin标记阳性;CD-TK融合基因转染后,神经干细胞NSE及GFAP均表达阳性。结论 CD-TK融合基因转染对神经干细胞增殖无影响。

缺血缺氧性脑损伤治疗的新方法——神经干细胞移植

神经干细胞(NSC)是一群较原始的、能自我更新并具有多种分化潜能的细胞,可分化成神经元、少突胶质细胞和星形细胞。在生理条件下,体内的NSC通常保持静息状态;神经损伤后,内源性NSC可因微环境的改变而被激活、迁移和分化,以替代损伤的细胞和重建神经环路;遗传修饰后,外源性NSC移植显示了很大的治疗潜力,为今后缺血缺氧性脑损伤的治疗提供了新的手段。

显微外科手术治疗鞍结节脑膜瘤的临床观察

目的探讨鞍结节脑膜瘤手术入路选择、手术技巧及临床效果。方法对31例鞍结节脑膜瘤患者的临床资料进行回顾性分析,观察分析肿瘤切除程度、术后并发症、远期疗效。结果肿瘤全切除16例,次全切除9例,部分切除6例。术后21例视力得以改善并恢复正常生活。结论肿瘤性状及生长方向是影响肿瘤切除的主要因素,应按肿瘤的大小及生长方向确定手术入路。