SLC6A9对结直肠癌细胞生长和对5-FU药物敏感性的影响

目的:研究溶质载体家族6成员9(solute carrier family 6 member 9,SLC6A9)表达对结直肠癌细胞增殖、迁移和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)药物敏感性的影响。方法:TCGA数据库分析、实时荧光定量PCR和Western blot分析检测SLC6A9在结肠癌组织、正常结肠细胞系(NCM460)和结直肠癌细胞系(SW620、HCT116、HT29、Lovo和SW480)中的表达。将SCL6A9过表达质粒及阴性对照(SLC6A9 OE、Vector)转染HT29细胞,将SCL6A9小干扰RNA及阴性对照(SLC6A9 siRNA1#、siRNA2#和Scramble)转染SW620细胞。划痕愈合实验和Transwell实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力。Western blot和细胞免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达水平。利用CCK-8法和构建裸鼠移植瘤模型检测SLC6A9过表达对结直肠癌细胞5-FU药物敏感性的影响。结果:与正常结肠组织和NCM460细胞相比,SLC6A9在结肠癌组织和结直肠癌细胞系中低表达(均P<0.05)。SLC6A9过表达引起E-cadherin蛋白表达增加,Vimentin蛋白水平降低,抑制结直肠癌细胞的迁移、侵袭(P<0.05)。SLC6A9低表达引起E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin蛋白水平增加,促进结直肠癌细胞的迁移、侵袭能力(P<0.05)。SLC6A9过表达提高了5-FU的药物敏感性,并使肿瘤生长缓慢,质量减轻(P<0.05)。而SLC6A9低表达降低了5-FU的药物敏感性(P<0.05)。结论:SLC6A9过表达能够抑制结直肠癌细胞的迁移、侵袭和EMT进程,并增强5-FU对结直肠癌细胞的药物敏感性。

生物样本库建设在临床专业学位研究生人才培养中的作用

当前,我国临床专业学位硕士研究生培养与住院医师规范化培训全面接轨的“双轨合一”模式已在全国范围内广泛开展。新模式明显提升了专业学位硕士研究生的临床能力,但“重临床、轻科研”的现象普遍存在,以致专业学位硕士研究生的科研能力及科研思维明显不足。生物样本库作为临床科研转化医学研究的关键平台,对科学研究、转化应用及人才培养具有重要的支撑作用。在生物样本库的建设过程中,可培养具有创新意识和实践能力的高素质复合型医学人才。文章重点介绍了我国临床医学研究生培养现状、生物样本库发展现状、生物样本库在医学研究生培养过程中的作用、成效以及设想,以期在新时代背景下构建专业学位研究生人才培养新模式。

雷公藤红素诱导人胰腺癌PANC-1细胞铁死亡的机制研究

目的:探讨雷公藤红素(Cel)诱导的人胰腺癌PANC-1细胞铁死亡的分子机制。方法:体外培养PANC-1细胞,MTT法检测PANC-1细胞活力,分析数据并分组,根据药物对细胞活力抑制的计算结果,选择细胞存活率为50%的Cel剂量,以及高于细胞活力50%的Cel剂量进行后续实验;EdU及克隆形成实验检测Cel对细胞增殖的影响。流式细胞仪及荧光显微镜检测并观察细胞中脂质活性氧(ROS)水平的变化;丙二醛(MDA)试剂盒,谷胱甘肽(GSH)试剂盒以及亚铁离子检测试剂盒分别检测细胞中MDA,GSH以及Fe2+水平;Western blot法检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达;免疫共沉淀法检测GPX4蛋白的泛素化。结果:与对照组比较,随着Cel药物浓度增大,PANC-1细胞活力,EdU阳性率及克隆形成数量逐渐降低(P<0.05,P<0.01);细胞中单独加入Cel后,细胞变圆,细胞活力降低,而细胞中联合加入铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)对细胞形态和活力没有显著影响,同时用Cel和Fer-1共处理对细胞形态和活力也没有显著影响;利用BODIPYTM 581/591 C11对细胞中脂质ROS染色后于荧光显微镜下观察荧光变化,并利用流式细胞仪检测细胞中脂质ROS变化,结果显示与对照组相比,PANC-1细胞中加入Cel作用后,细胞中绿色氧化态的脂质ROS荧光明显增加且脂质ROS水平明显增加,而细胞中同时加入Cel和Fer-1后,绿色荧光降低,脂质ROS水平明显降低。与对照组相比,细胞中加入Cel后,MDA及Fe2+水平增加,GSH水平降低;而在细胞中同时加入Cel和Fer-1之后细胞中MDA,Fe2+以及GSH水平恢复到对照组水平几乎一致。结论:Cel通过促进GPX4降解及泛素化诱导胰腺癌细胞铁死亡,抑制胰腺癌细胞的恶性增殖。

循证护理对神经外科长期昏迷患者呼吸机相关性肺炎的影响

目的探讨循证护理在预防神经外科长期昏迷患者呼吸机相关性肺炎(VAP)中的应用效果。方法将80例采用循证护理的神经外科长期昏迷的患者设为观察组,80例采用常规护理的神经外科长期昏迷的患者设为对照组,比较2组患者的口腔卫生情况、排痰量、VAP情况、机械通气时间以及预后。结果观察组的口腔异味发生率、口腔溃疡发生率低于对照组,每日排痰量多于对照组,VAP时间长于对照组,VAP发生率及VAP病死率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组的机械通气时间短于对照组,预后情况好于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论循证护理能够有效预防神经外科长期昏迷的患者VAP的发生率,改善患者的预后,值得推广。

加速康复外科方案对胃癌患者术后机体应激反应的影响

目的探讨运用加速康复外科方案在胃癌患者围手术期中的临床效果。方法选取2015年6月至2016年6月医院普外科收治的胃癌患者53例,患者随机分为2组,其中试验组27例围手术期采用加速康复外科方案处理,对照组26例围手术期采用传统方案处理。根据术中探查情况排除部分病例,比较2组患者术后首次经口进食时间、排气时间、术后住院时间、术后并发症发生率,并比较患者术前、术后第1天、术后第3天及术后第5天清晨外周空腹血白细胞(WBC)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、血清淀粉样蛋白A(SAA)的水平。结果 2组患者术后首次经口进食时间、排气时间、术后住院时间比较,试验组均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2组患者术前WBC计数、CRP浓度、IL-6浓度、SAA浓度相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组患者术后第1天、第3天、第5天的WBC计数、CRP浓度、IL-6浓度、SAA浓度均低于对照组,2组相比差异有显著性(P<0.05)。2组患者术后并发症发生率相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论加速康复外科措施运用于胃癌患者能降低术后机体应激反应,加速患者术后康复,缩短术后住院时间,术后并发症没有明显增加,加速康复外科是安全有效的,值得临床进一步推广。

敲低结肠癌转移相关基因1促进RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)对RAS选择性致死化合物3(RSL3)诱导的结直肠癌细胞铁死亡的影响及其分子机制。方法体外培养结直肠癌细胞SW620,HCT116,LOVO及RKO细胞,Western blot实验检测细胞中MACC1表达;以SW620细胞为实验材料,MTT法检测不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol/L)铁死亡诱导剂RSL3以及不同浓度(0、5、10、20μmol/L)铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞存活率的影响,分析单独使用10μmol/L RLS3以及10μmol/L RLS3和10μmol/LFer-1联合作用对SW620细胞存活率的影响,并检测干扰MACC1后不同浓度RSL3对SW620细胞存活率的影响;实时定量RT-PCR和Western blot法检测不同浓度RSL3(0、2.5、5、10μmol/L)对MACC1在mRNA和蛋白水平的影响,并检测干扰MACC1后GPX4在mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞仪及激光共聚焦实验检测干扰MACC1后,SW620细胞中脂质过氧化Lipid ROS水平的变化。结果4种结直肠癌细胞中SW620细胞MACC1表达量最高;铁死亡诱导剂RSL3抑制SW620细胞的存活率,细胞存活率随RSL3浓度升高而降低,呈剂量依赖性;不同浓度的铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞的存活率没有影响;与对照Ctrl组细胞存活率相比,单独使用RSL3细胞存活率降低了50%(P<0.01),而联合使用RSL3与Fer-1处理SW620细胞,细胞的存活率得到恢复(P>0.05);不同浓度的RSL3作用于SW620细胞后,细胞中MACC1基因在mRNA和蛋白水平被显著抑制(P<0.01),具有一定的药物浓度依赖性。siRNA干扰MACC1基因表达后,增强RSL3对SW620细胞毒作用,并抑制细胞中GPX4的表达(P<0.01),增加细胞中Lipid ROS水平(P<0.05)。结论MACC1通过调控GPX4影响RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡。

从进化论看外科原则的变迁——浅谈微创外科时代外科医生的思维方式

1859年11月24日，达尔文（CharlesRobertDarwin，1809—1882）发表《物种起源》一书，从而创立了生物进化论，否认了地球上人的特殊中心地位及“上帝造人”的观点，奠定了具有深刻意义的思想变革基础，成为现代生命科学的基石。150余年来，随着现代生命科学研究的深入，人类频繁震惊于生命体构造的“精妙”与“完美”，而每一新的科学发现也在令人类慨叹认识的局限性，诚然，在医学领域我们对生命体的认识亦仅是“冰山一角”。正基于此，在微创外科迅猛发展的今天，本文从进化论角度分析外科治疗原则的变迁，旨在探讨进化论思维模式对外科决策的指导意义。

腹部少见疝的外科治疗

随着诊断技术的进步，临床腹部少见疝的诊断率不断提高。但由于腹部少见疝的发病率低，临床认识相对不足，给治疗带来一定困难。本文就一些腹部少见疝外科治疗要点加以综述。

miR-7调控结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的机制研究

目的研究microRNA-7(miR-7)和5氟尿嘧啶(5-FU)联合对5-FU耐药结直肠癌(SW620/5-FU)细胞增殖、凋亡的影响,探讨miR-7表达对结直肠癌细胞5-FU敏感性的调控机制。方法收集2019年5月—2021年7月手术切除的结直肠癌组织和癌旁组织;培养结直肠癌细胞系(HCT116、SW1116、DLD1、SW620)和正常结肠上皮细胞(NCM460),培养SW620细胞并构建5-FU耐药结直肠癌细胞(SW620/5-FU)。用RT-qPCR检测细胞和组织中miR-7的表达量。对SW620细胞和SW620/5-FU细胞均瞬时转染miR-7 mimic、miR-7 inhibitor和vector,分为miR-7 vector组(空载体组)、miR-7 mimic组(过表达组)和miR-7 inhibitor组(抑制组),以及与5-FU联合处理的miR-7 mimic+5-FU组和control组(空细胞组)。采用CCK-8法检测细胞增殖和5-FU半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组的cleaved caspase-3、Bid、mTOR和p-mTOR蛋白表达变化。结果结直肠癌组织中miR-7的表达量明显低于癌旁组织(2.1±1.28 vs.8.40±2.49,P<0.05);结直肠癌细胞系中miR-7的表达量明显低于NCM460细胞(P<0.05)。SW620/5-FU细胞中的miR-7的表达量低于SW620细胞(0.43±0.13 vs.0.99±0.01,P<0.05)。转染48 h后,miR-7 mimic组miR-7的表达量高于空载体组(5.14±1.18 vs.0.96±0.04,P<0.05),抑制组的表达量低于空载体组(0.43±0.11 vs.0.96±0.04,P<0.05)。与空载体组相比,过表达组中SW620细胞的增殖能力明显降低,细胞凋亡率增加(n=3,t=15.301,P=0.001),而抑制组结果与之相反(n=3,t=17.610,P=0.002);过表达组SW620细胞中cleaved caspase-3和Bid的表达水平均高于空载体组(n=3,t=14.367,P=0.008),而抑制组cleaved caspase-3和Bid的表达水平均低于空载体组(n=3,t=13.245,P=0.003)。5-FU对SW620/5-FU细胞的IC_(50)高于SW620细胞(1210μg/mL vs.220.6μg/mL,P<0.05)。与空细胞组和过表达组相比,miR-7 mimic+5-FU组的SW620细胞和SW620/5-FU细胞增殖活力均显著下降(分别为36.33±3.85%vs.99.30±0.75%,P<0.05;55.43±4.65%vs.99.30±0.75%,P<0.05),凋亡率增加;miR-7 mimic+5FU组中SW620/5-FU细胞的p-mTOR蛋白水平下降(0.23±0.04 vs.0.82±0.05,P<0.05)。结论miR-7过表达可增加SW620/5-FU细胞对5-FU的药物敏感性,其机制可能与抑制p-mTOR相关。

myPKFiT®软件辅助血友病A伴抑制物患者免疫耐受诱导治疗的病例报告

免疫耐受诱导(ITI)治疗是清除血友病A患者体内抑制物的一线治疗方案,应用注射用重组人凝血因子Ⅷ(rFⅧ)开启ITI治疗后的疗效评估及剂量调整是个性化治疗的重要组成部分。FⅧ的药代动力学(PK)参数可用于评估患者ITI治疗是否达到完全耐受,对抑制物滴度进行有效的监测。myPKFiT®软件是中国首个支持血友病PK指导的管理软件,也是目前国家药品监督管理局唯一批准的FⅧ个体化剂量指导软件,本病例报告中的两例血友病A伴抑制物患者,探索性采用myPKFiT®软件对其ITI治疗方案进行疗效评估和剂量调整,提示了PK指导在ITI治疗中的积极意义。

基于CiteSpace的近十五年我国生物样本库文献计量学分析

生物样本库,又称生物银行(Biobank),根据国际经济与合作组织的定义,主要指标准化收集、处理、储存和应用健康或疾病生物体的生物大分子、细胞、组织和器官等样本,以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其质量控制、信息管理与应用的系统[1]。CiteSpace在关键词、作者和机构等知识图谱绘制上有着其他可视化软件不可比拟的优势,能够更为清晰地呈现学科热点、前沿分析以及学科动态演化历程等[2]。本文运用可视化分析软件CiteSpace对我国生物样本库建设现状、前沿、热点和主要研究机构等相关内容进行可视化分析,以呈现我国生物样本库领域的进展情况。

硫酸镁辅助治疗重症急性胰腺炎效果的Meta分析

目的系统评价常规治疗基础上联合应用硫酸镁辅助治疗重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)的有效性。方法通过检索平台PubMed、Web of Science、中国知网(CNKI)及万方数据知识服务平台,纳入对比常规治疗与常规治疗联合硫酸镁治疗SAP疗效差异的随机对照试验(randomized controlled trial,RCT),检索时间限定为建库至2022年7月1日。通过Review Manager 5.4软件进行Meta分析以对患者预后进行评价。结果与常规治疗(禁食禁水、胃肠减压、补液、抗生素治疗、抑制胰酶分泌、维持水、电解质及酸碱平衡)比较,硫酸镁辅助治疗可降低SAP患者相关病死率及并发症发生率,可缩短住院时间、腹痛缓解时间及发热时间。结论常规治疗基础上加用硫酸镁辅助治疗在改善SAP患者病死率、并发症发生率、住院时间、腹痛缓解时间、发热时间方面均优于单纯常规治疗。

微小染色体维持蛋白6在消化系统恶性肿瘤中的研究进展

微小染色体维持蛋白(minichromsome maintenance protein,MCM)家族是一组负责真核生物DNA合成的蛋白质。MCM6作为家族成员之一,具有调节细胞周期和促进DNA复制等功能,在维持基因组正常复制中扮演着关键的角色。在消化系统恶性肿瘤中,MCM6的表达水平异常增高,且与部分疾病的不良预后密切相关。其作为肿瘤诊疗的生物标志物具有极大的潜力。因此,深入探讨MCM6在消化系统恶性肿瘤中的作用和功能对其诊断和治疗具有重要意义。本文总结MCM6在消化系统恶性肿瘤中的最新研究结果,并归纳MCM6在此类肿瘤中的作用机制。

成人巨结肠的治疗进展

成人巨结肠虽然临床少见,但可严重威胁患者的身心健康和生命安全,其最常见的临床表现是腹胀和便秘。成人巨结肠按照病因可分为成人先天性巨结肠、神经节细胞缺乏症、特发性巨结肠、中毒性巨结肠、医源性巨结肠以及急性假性结肠梗阻综合征等类型。由于早期临床症状不典型以及人们对该病认识的不足,部分患者在确诊时已错失最佳治疗时机。手术是成人巨结肠最有效的治疗措施,本文结合国内外文献对成人巨结肠的外科诊疗现状进行总结,以期为本病的临床诊疗提供参考。

贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的效果验证

背景:骨髓中的间充质干细胞含量不高,且随着年龄增加或体质衰弱,骨髓间充质干细胞的数量会逐渐减少。目的:验证贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的效果。方法:大鼠麻醉后取双侧股骨和胫骨,剪去骨骺端,暴露骨髓腔,用含小牛血清的DMEM培养基冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞,反复吹打制成单细胞悬液,接种后置于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱内孵育,24h后全量换液,以后每周全量换液1次,筛选易贴壁但贴壁不牢的细胞进行传代培养。观察细胞形态,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪及免疫细胞化学染色鉴定骨髓间充质干细胞表面标志的表达。结果与结论:培养24h后细胞能够贴壁生长,呈梭形或三角形;第二三天贴壁细胞迅速增殖;培养15d左右出现致密的贴壁细胞层,呈漩涡状生长或成簇生长。细胞在接种后2d进入对数生长期,12d左右进入平台期,约15d细胞可铺满瓶底。分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞CD90和CD54均呈阳性表达。结果验证了采用贴壁法可在体外成功分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,操作简单,造成污染的环节和机会较少,不需离心,可以更好的保持细胞活性。

直肠癌结肠造口患者生活质量调查及分析

Miles术治疗直肠癌效果良好,但结肠造口术永久改变了患者原来的排便方式,影响患者生活治疗的同时可导致患者出现心理上的改变[1]。目前中国国内关于直肠癌结肠造口患者生活质量的研究[2-4]较多,但得出的结果差异较大,且大多使用的是自行编制的量表,其信效度有待于进一步考察。为了给制定直肠癌结肠造口患者合理有效的护理干预措施提供一定的理论依据。

左氧氟沙星预防与治疗急性阑尾炎围手术期感染的临床观察

目的评价左氧氟沙星(LVX)和头孢曲松(CRO)预防与治疗阑尾炎围手术期感染的疗效。方法采用随机对照、多中心试验方法,对60例急性阑尾炎患者分别使用LVX和CRO预防与治疗阑尾炎围手术期感染。结果两组临床疗效与不良反应发生率差异均无统计学意义(P>0.05);两组共分离出病原菌36株,病原菌对抗菌药物总体敏感性,LVX与CRO比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用LVX预防与治疗急性阑尾炎围手术期感染具有较好的临床疗效。

八种抗精神病药物治疗女性精神分裂症患者的疗效及不良反应分析

目的观察八种抗精神病药对女性精神分裂症患者的疗效及不良反应。方法共纳入685例女性精神分裂症患者,分别接受奥氮平（10~30 mg/天）、喹硫平（500~750 mg/天）、利培酮（2~5.5 mg/天）、阿立哌唑（15~30 mg/天）、氟哌啶醇（10～30 mg/天）、氯氮平（150～450 mg/天）、舒必利（0.6～1.2/天）、齐拉西酮（80～160 mg/天）治疗,观察疗效和不良反应。结果八种抗精神病药对女性精神分裂症患者的疗效无显著性差异,对女性患者代谢的影响从大到小依次为氯氮平、奥氮平、喹硫平、氟哌啶醇、利培酮、齐拉西酮、舒必利、阿立哌唑;对女性患者内分泌影响最明显的是利培酮和舒必利;药源性焦虑以利培酮出现的比率最高;导致女性患者排尿困难最常见于阿立哌唑。结论应根据患者的不同年龄、对药物的疗效及不良反应出现的个体差异,做到用药个体化。

护理程序在脑肿瘤手术患者术后护理中的应用

脑肿瘤又称颅内肿瘤,是神经外科常见病,常发生于20~50岁人群,致残率和致死率较高。常规开颅手术治疗脑肿瘤的风险性较大,而且创伤较大,不利于患者的术后康复。近年来,脑肿瘤的神经外科治疗方法逐步向着微创化发展,但仍存在发生术后并发症（如脑水肿、脑血管痉挛、脑梗死等）的风险,而脑肿瘤患者术后的康复问题一直都是神经外科医护人员关注的焦点。

完全腹腔镜腹主动脉瘤切除术1例报告

完全腹腔镜腹主动脉瘤切除术最早于2001年Dion等[1]报道,因创伤小、恢复快受到外科医生的关注,但由于腹腔镜血管手术学习曲线长,技术操作难度大等问题,尚未在临床广泛应用。我院2010年10月27日完成1例完全腹腔镜腹主动脉瘤切除人工血管置换手术,术后效果良好,现报道如下。