积分法:一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流的方法(英文)

目的 评价一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流 (Ito)的积分方法。方法 Ito的失活相可被 2指数或 3指数方程拟合。原始电流曲线下面积 (AUC)可通过指数方程积分获得。以细胞膜电容标准化后的曲线下面积表示除极化时程中钾离子的净通量 ,作为比较指标。钙调磷酸酶过表达转基因鼠心肌细胞表现Ito下调 ,此数据用于验证Ito的积分分析方法的可靠性。结果 AUC可通过 3指数或2指数方程的积分公式获得 :AUC =A1τ1+A2 τ2 +A3τ3+A0 t -A1τ1e-t/τ1-A2 τ2 e-t/τ2 -A3τ3e-t/τ3或AUC =A1τ1+A2 τ2 +A0 t-A1τ1e-t/τ1-A2 τ2 e-t/τ2 。小鼠心室肌 5 0 %和 90 %动作电位时程分别约为 10ms和 30ms。将Ito0～ 10ms (AUC50 )和 0～ 30ms(AUC90 )的曲线下面积以细胞膜电容进行标准化。野生型鼠心肌细胞的AUC50 和AUC90 明显高于钙调磷酸酶过表达转基因鼠 ,此结果与转基因鼠心室肌细胞动作电位时程延长相一致 ,与前期发表结果一致 (钙调磷酸酶过表达转基因鼠心肌细胞Ito各成分下调 )。结论 积分法是药理学中一种简便准确的分析Ito的方法。

原钒酸钠的细胞毒理学实验研究

目的 探讨原钒酸钠 (SOV)对心肌细胞的毒性作用及其机制。方法 采用循环灌流的方法急性分离成年豚鼠心肌细胞 ,使其在原钒酸钠浓度为 1 ,1 0 ,1 0 0 μmol·L- 1 ,1mmol·L- 1 作用后 ,分别检测 30 ,60 ,1 2 0 ,1 80min 4个时相心肌细胞保存液中LDH、CK含量以及心肌细胞蛋白含量和Na+ ,K+ ATP酶活性 ,检测心肌细胞凋亡率和细胞活力 ;电镜下观察死亡和凋亡细胞的细胞器和细胞核形态学变化。结果 在原钒酸钠 1 0 0 μmol·L- 1 和 1mmol·L- 1 两个组的各时相保存液中LDH、CK以及心肌细胞中蛋白含量增加 ;心肌细胞中Na+ ,K+ ATP酶活性和细胞活力降低 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1 )。流式细胞仪显示 :在 1 80min时 1 0 0 μmol·L- 1 和 1mmol·L- 1 两组的细胞凋亡率与对照组相比增加 (P <0 0 5)。结论 在原钒酸钠浓度高于 1 0 0μmol·L- 1 且作用时间在 30min以上时 。

溶栓丸水浸液药理作用的初步研究

本文报道了溶栓丸水浸液对血块、纤维蛋白溶解作用及降压作用。

血糖安的细胞毒理学实验研究

目的 探讨血糖安 (XTA)对心肌细胞的毒性作用及其机制。方法 采用循环灌流的方法急性分离成年豚鼠心肌细胞 ,使其在血糖安浓度为 1μmo1 L、10 μmo1 L、10 0 μmo1 L、1mmo1 L作用后 ,分别检测 30、6 0、12 0、180min 4个时相心肌细胞保存液中LDH、CK含量 ,心肌细胞蛋白含量和Na+ K+ ATP酶活性 ;检测心肌细胞凋亡率和细胞活力 ;电镜下观察死亡和凋亡细胞的形态学变化。结果 在血糖安 10 0 μmo1 L和 1mmo1 L两个组的各时相保存液中 ,LDH、CK以及心肌细胞中蛋白含量明显增加 ;心肌细胞中Na+ K+ ATP酶活性和细胞活力明显降低 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 在血糖安浓度高于 10 0 μmo1 L且作用时间在 30min以上时 。

溶栓灵药理作用的初步研究

采用家兔颈动脉血栓形成方法和体外纤维蛋白平板方法,观察溶栓灵对纤维蛋白平板的溶解面积及家兔颈动脉血栓湿重的影响,探讨了溶栓灵的药理作用。结果表明,溶栓灵可以溶解纤维蛋白;抑制血栓形成及溶解已形成的血栓。

药理学教学中以病例为中心教学方法的实践与探索

针对传统教学法中存在的学生自主学习意识差、对知识的综合运用能力不足的缺点,我们在药理学理论教学中,按照教学大纲的要求,与哈尔滨医科大学附属第二医院有关科室医生合作,精选临床典型病例,探索了以病例为中心的案例教学法(case-based learning,CBL),取得了良好的效果,并对该教学法中存在的问题进行了分析。

FGF19亚家族在冠心病中的研究进展

成纤维细胞生长因子(FGFs)是一类广泛存在于生物体内,与调节胆汁酸、糖代谢和脂代谢、维生素D及体内磷的平衡密切相关,以旁分泌或内分泌方式调节多种生理病理过程的生长因子,近些年来发现其中的FGF19亚家族,一类代谢调节因子,包括FGF21、FGF23、FGF19,参与调节胆汁酸、糖代谢和脂代谢、维生素D及体内磷的平衡,对于调控心血管疾病如冠心病发挥着重要的作用。这为冠心病的临床治疗提供了新的途径。

苦参碱对缺血性心室肌细胞快速延迟整流钾电流的作用

目的观察苦参碱对病理条件下(缺血、酸中毒)单个心室肌细胞快速延迟整流钾电流(rapid component of delayed rectifier potassium current,IKr)的作用,初步探讨苦参碱治疗缺血性心律失常的作用机制。方法冠状动脉左前降支结扎建立家兔心肌梗死模型,应用全细胞膜片钳技术记录酶解法分离的心肌梗死模型家兔苦参碱灌胃1mon后右心室心肌细胞IKr的变化。在pH=7·4和pH=6·5的条件下,应用全细胞膜片钳技术记录苦参碱对酶解法分离的豚鼠心室肌细胞IKr的作用。结果在正常细胞外液(pH=7·4)的条件下苦参碱(50μmol·L-1)降低IKr,在刺激电压为+60mV时,IKr电流密度由(12·15±0·70)pA/pF降低至(9·22±0·65)pA/pF(n=8,P<0·05)。在细胞外液酸化(pH=6·5)的条件下苦参碱(50μmol·L-1)仍表现抑制IKr电流的作用,在刺激电压为+60mV时,IKr电流密度由(7·05±0·41)pA/pF降低至(5·76±0·28)pA/pF(n=8,P<0·05)。家兔冠状动脉结扎1mon后,在刺激电压为+60mV时,心肌梗死组家兔心室肌细胞IKr电流密度为(1·17±0·12)pA/pF较正常组(1·70±0·11)pA/pF降低(n=12,P<0·05)。苦参碱组(8mg·kg-1·d-1)家兔心室肌细胞IKr电流密度为(0·86±0·25)pA/pF较心梗组降低(n=12,P<0·05)。结论苦参碱阻断心室肌细胞IKr,可能是其延长有效不应期,降低异位节律的发生率,治疗心律失常的机制之一。苦参碱对酸化条件及长期心肌缺血后心室肌细胞IKr仍表现出明显的抑制作用,表明其对心肌梗死后心律失常有效。

苦参碱、小檗胺与胺碘酮、RP58866抗心律失常作用的比较

目的 阐明苦参碱和小檗胺抗心律失常作用弱于胺碘酮和RP58866的分子机制。方法 采用冠脉结扎、电刺激和乌头碱诱导的心律失常模型观察药物的抗心律失常作用,采用全细胞膜片钳技术测定单个心室肌细胞的Ikl,Ikr,Iks和Ito。结果 苦参碱和小檗胺对冠脉结扎、乌头碱诱发的大鼠心律失常有明显对抗作用,对家兔电刺激致颤阈(VFT)有明显提高作用,但与胺碘酮和RP58866相比,抗心律失常作用明显低于前者。电生理结果显示:苦参碱和小檗胺对家兔Ikl,Ikr,Iks和犬Ito有抑制作用,但较胺碘酮和RP58866作用弱。结论 苦参碱和小檗胺的抗心律失常作用及对Ikl,Ikr,Iks和Ito的抑制作用弱于胺碘酮和RP58866。

红花黄素对豚鼠单个心室肌细胞动作电位和钙电流的影响

目的 观察红花黄素对豚鼠单个心室肌细胞动作电位和钙电流的影响。方法 采用膜片钳全细胞式记录技术。结果 红花黄素（３３ μｇ· Ｌ－ １） 能延长单个心室肌细胞动作电位时程，由（３５９３３ ±２７１８） ｍｓ 延长至（４１３３３ ±６１８８）ｍｓ（ Ｐ＜ ００５ ，ｎ ＝ ６） 。同时增加内向 Ｌ型钙电流的峰值，由（ － １０２１ ±７４） ｐ Ａ 至（ － １４３６ ±２１２） ｐ Ａ（ Ｐ＜ ００５ ，ｎ ＝ ７） 。结论 由于红花黄素具有上述电生理作用。

氧化苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞胞浆[Ca^(2+)]_i的影响

目的 观察氧化苦参碱对急性分离的豚鼠单个心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。方法 采用酶解法分离豚鼠单个心肌细胞,用钙敏感的荧光指示剂Fluo-3/AM染色,以荧光强度(FI)来代表[Ca2+]i,应用激光扫描共聚焦显微技术动态监测FI的变化。结果 在静息状态下,10μmol·L-1氧化苦参碱对[Ca2+]i无明显影响;但10 μmol·L-1氧化苦参碱对60mmol·L-1KCl介导的外钙内流却有明显抑制作用(P<0.05)。结论 氧化苦参碱对电压依赖性钙通道(VDC)具有明显抑制作用,这可能是其抗心律失常作用机制之一。

一种筛选抗心律失常药物新模型的建立

目的 建立一种细胞水平的心律失常模型 ,以用于抗心律失常药物的筛选和评价。方法 酶解法分离单个大鼠心室肌细胞 ,在细胞水平给予传统诱发心律失常药物乌头碱 ,应用膜片钳技术观察记录应用乌头碱后心肌动作电位时程 (APD)、钠电流 (INa)、L 型钙电流 (ICa L)、内向整流钾电流(IK1)及瞬时外向钾电流 (Ito)的变化。结果 应用乌头碱 1μmol·L-1使大鼠单个心室肌细胞 90 %复极化动作电位时程(APD90 )从给药前的 ( 15 0 2 3± 7 0 2 )ms延长至 ( 2 3 6 0 3±2 3 2 2 )ms(n =8,P <0 0 1)。应用奎尼丁 10 μmol·L-1后动作电位时程延长与乌头碱组比较 ,APD90 进一步延长 (n =6,P <0 0 5 ) ,但应用维拉帕米 10 μmol·L-1后被乌头碱延长的APD恢复近于正常 ,在乌头碱的作用下 ,除极电压为 0mV时ICa L从 ( 72 7 9± 178 0 ) pA增加至 ( 10 82 1± 2 2 2 2 ) pA(n =6,P <0 0 1) ;钠电流 (INa)在 - 5 0mV刺激电压下从( 2 5 4± 5 5 3 ) pA增加至 ( 45 3 0 2± 475 1) pA(n =4,P <0 0 5 ) ;IK1在 - 12 0mV的刺激电压下 ,Ik1的内向成分从( 2 0 0 7 1± 3 5 9 3 ) pA增加至 ( 2 3 17 7± 40 1 8)pA(n =10 ,P <0 0 1) ;奎尼丁、维拉帕米对乌头碱诱发的钠电流和钙电流增加有抑制的作用。结论 乌头碱使?

青蒿素对克隆的内向整流钾通道的抑制作用(英文)

采用双电极电压钳技术观测了青蒿素对表达于非洲蛙卵的克隆内向整流钾通道（Ｋｉｒ２．１）的影响． 当蛙卵注射Ｋｉｒ２．１ ｃＲＮＡ 后灌注不同浓度青蒿素时， 青蒿素呈浓度依赖关系降低Ｋｉｒ２．１钾通道在非洲蛙卵细胞膜的功能表达． 青蒿素阻断Ｋｉｒ２．１钾通道亦呈电压依赖性．当指令电压为－ １４０，－ １３０和－ １２０ ｍ Ｖ 时， ５ 和５０ μｍ ｏｌ·Ｌ－ １ 的青蒿素可使Ｋｉｒ２．１钾通道的内向电流分别下降１４．２％ ， ３４．５％ ；１２．０％ ，２４．６％ ；４．３％ ，１９．１％ ．当指令电压为－ ５０， － ４０ 和－ ３０ ｍ Ｖ 时， ５ 和５０ μｍ ｏｌ·Ｌ－ １的青蒿素则使Ｋｉｒ２．１钾通道的外向电流分别增加２２．２％ ，７２．２％ ； ２８．０％ ， ８０．０％ ； ２４．１％ ， ６９．０％ ． 青蒿素对Ｋｉｒ２．１通道的阻断作用在用正常灌注液冲洗后可恢复． 青蒿素的抗心律失常作用与它阻断Ｋｉｒ２．１通道电流有关．

冬虫夏草水提液对单个心室肌细胞钾通道的影响

目的 观察冬虫夏草水提液对豚鼠及大鼠心室肌细胞钾通道的作用 ,探讨冬虫夏草的抗心律失常作用机制。方法 应用全细胞膜片钳技术记录冬虫夏草水提物对豚鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流 (IK1)、延迟整流钾电流 (IK)及大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流 (Ito)的影响。结果 应用 0 1g·L-1(生药浓度 )冬虫夏草水提液使豚鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流在实验电压 - 12 0mV时从给药前(- 36 37± 5 15 ) pA/pF减少到 (- 2 9 70± 5 90 ) pA/ pF(n=5 ,P <0 0 5 ) ;延迟整流钾电流在实验电压 +70mV时 ,从给药前 (9 2 1± 2 4 2 ) pA/ pF增加至 (11 5 4± 2 98)pA/ pF(n =6 ,P <0 0 1) ;使大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流 (Ito)在实验电压 +5 0mV时 ,从给药前 (13 36± 0 88) pA/ pF增加至 (16 4 8± 1 0 9) (n =4 ,P <0 0 1)。结论 冬虫夏草抗心律失常作用与它对心肌细胞钾通道的作用有关。它增加IK,Ito的同时抑制IK1。

Wistar大鼠2型糖尿病动物模型的建立

目的 建立 2型糖尿病的动物模型。方法 ①给Wistar大鼠灌胃脂肪乳 10d ,记录饮食、饮水、体重变化 ,用毛细血管法和正糖钳技术判定胰岛素抗性。同时测定血清中空腹血糖、丙二醛 (MDA)和游离脂肪酸 (FFA) ;②采用不同的给药方式给灌胃脂肪乳大鼠腹腔注射四氧嘧啶 ,将 72h后血糖值≥ 16 7mmol·L-1者定为 2型糖尿病大鼠。结果 ①与正常对照组比较 ,灌胃脂肪乳大鼠的体重、饮食、饮水及内脏脂肪重量均明显增高 (P <0 0 5 ) ;②灌胃脂肪乳后 ,大鼠KITT值由正常对照组 6 8± 1 5下降为 4 5± 0 9(P <0 0 5 )。正糖钳实验结果表明高脂组大鼠葡萄糖输注速率(GIR)较正常大鼠葡萄糖输注速率明显下降 ;③四氧嘧啶给药剂量为第一天 12 0mg·kg-1,第二天 10 0mg·kg-1时 ,糖尿病动物模型成模率可达 90 %。结论 通过灌胃脂肪乳建立了伴有胰岛素抵抗的Wistar大鼠 2型糖尿病的动物模型。

二氢杨梅素诱导人肺腺癌细胞系AGZY-83-a凋亡的实验研究

目的研究二氢杨梅素(dihydromyricetin)对人肺腺癌细胞系AGZY-83-a凋亡的影响及其相关机制。方法采用MTT法检测二氢杨梅素对人肺腺癌细胞AGZY-83-a存活率的影响,应用TUNEL法和Caspase-3活性检测观察二氢杨梅素对AGZY-83-a凋亡的作用,并通过共聚焦显微镜观察二氢杨梅素对肺腺癌细胞内钙的影响。结果MTT结果显示,二氢杨梅素50μmol·L-1对AGZY-83-a的增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖关系;TUNEL实验结果显示二氢杨梅素可以引起AGZY-83-a发生凋亡,且具有剂量依赖性;Caspase-3活性检测结果显示二氢杨梅素可增加肺腺癌细胞Caspase-3活性,说明二氢杨梅素可以诱导AGZY-83-a凋亡;二氢杨梅素可升高肺腺癌细胞内钙,平均荧光强度FI可增加20多倍。结论二氢杨梅素可通过增加细胞内钙诱导AGZY-83-a细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。

三氧化二砷通过升高细胞内钙离子浓度介导肺癌细胞凋亡

目的 研究三氧化二砷 (As2 O3 )对人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的抑制作用 ,探讨As2 O3 诱导人肺腺癌细胞株凋亡的机制。方法 采用MTT法、透射电镜、激光扫描共聚焦仪及流式细胞术等方法观察三氧化二砷对人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的影响。结果 ①As2 O3 能抑制人肺腺癌细胞株AGZY 83 a的生长 ,呈剂量依赖关系 (P <0 0 1) ,IC50 =1 6 1mg·L-1;②在光学显微镜及电镜下 ,可见As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a呈现凋亡中、早期的变化特征 :表面绒毛脱失 ,染色质块状散于核内 ;③流式细胞术显示 :As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞凋亡百分率与药物剂量呈依赖关系 ;④LSCM显示 :As2 O3 作用后的人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞内钙浓度 ([Ca2 + ]i)升高 (P <0 0 1) ,呈剂量时间依赖关系。结论 As2 O3 能明显抑制人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞的生长 ,并诱导人肺腺癌细胞株AGZY 83 a细胞凋亡 ,细胞内 [Ca2 + ]升高可能是诱导细胞凋亡的机制之一。

槲皮素对阿霉素致小鼠心肌损伤的保护作用及其机制

观察槲皮素对阿霉素致小鼠心肌损伤的保护作用并初步探讨其机制。腹腔注射阿霉素(20 mg.kg-1)复制小鼠心肌损伤模型,检测心电图、心肌超微结构,血清NO含量和iNOS活性,心肌组织LDH、SOD、MDA的水平和p53蛋白表达。并观察槲皮素(50,100及200 mg.kg-1)对上述指标的影响。阿霉素可导致小鼠心律失常和心肌超微结构损伤;使NO、iNOS、MDA和LDH的水平升高,SOD的水平降低;p53蛋白表达增强。槲皮素(50,100及200mg.kg-1)可拮抗阿霉素所致的上述变化。槲皮素对阿霉素性小鼠心肌损伤具有保护作用,其机制与增强SOD活力、降低iNOS活性、抑制p53蛋白表达等有关。

延胡索乙素对豚鼠单个心室肌细胞钾离子通道的影响

目的研究延胡索乙素(dltetrahydropalmatine,THP)对正常豚鼠心室肌细胞钾电流的影响,旨在探讨延胡索乙素抗心律失常作用机制。方法酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录延胡索乙素对豚鼠单个心室肌细胞钾电流的影响。结果延胡索乙素可明显抑制延迟整流钾电流(IK)和内向整流钾电流(IK1),并呈剂量依赖性。结论延胡索乙素抗心律失常作用机制可能与它对心肌细胞钾通道作用有关,THP可抑制IK和IK1,使动作电位时程(APD)和有效不应期(ERP)延长从而发挥其抗心律失常作用。