IL-24在口腔鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:研究白细胞介素-24(IL-24)在口腔鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织中的表达并探究其临床意义。方法:分别采用免疫组化和实时聚合酶链反应(Real-time PCR)技术的方法检测75例口腔鳞癌组织和30例正常口腔黏膜组织中IL-24的蛋白和基因表达。结果:免疫组化染色显示IL-24在口腔鳞癌组织中的阳性表达率45.33%(34/75)低于正常口腔黏膜组织中的阳性表达率70.00%(21/30)(P=0.022)。IL-24的表达与口腔鳞癌的组织分化程度(P=0.002),淋巴结转移(P=0.033),临床分期(P=0.035)有密切相关性,与患者的性别(P=0.917)、年龄(P=0.812)、吸烟史(P=0.720)、饮酒史(P=0.847)及肿瘤生长部位(P=0.959)无相关性。Realtime PCR检测IL-24在不同病理分化时期口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中的基因表达水平,其高、中、低分化各组的平均表达水平分别为0.688、0.302、0.153,均低于正常口腔黏膜组织中的平均表达水平1.000(P<0.001)。结论:IL-24在口腔鳞癌组织中呈低表达,该因子的表达情况与临床信息具有一定相关性,可初步认定为口腔鳞癌的候补抑癌基因。

TSA促进口腔鳞状细胞癌凋亡的实验研究

目的本实验探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(曲古抑菌素TSA)对口腔鳞状细胞癌(Tca-8113)生长抑制情况,以及促进凋亡的作用。方法采用0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mLTSA对口腔鳞状细胞癌细胞进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;MTT法检测细胞增殖活性;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪定量检测细胞凋亡。结果①倒置相差显微镜下观察到对照组细胞呈多边形,贴壁,生长活跃;经0.1、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mLTSA作用24小时后细胞形态变化不明显;经0.8、1.0μg/mL TSA作用72小时后,约80%细胞核固缩,细胞变小变圆,脱壁。②绘制细胞生长曲线示,随TSA浓度增加、作用时间延长,Tca-8113细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞生长抑制率与对照组相比,P<0.05,差别有统计学意义。③0.2μg/mLTSA作用24、48小时,0.8μg/mLTSA作用24小时后,其早期凋亡率分别为3.54±1.36,3.59±1.21%,6.59±1.67%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);各实验组细胞总凋亡率与对照组相比均有统计学意义(P<0.05)。结论TSA体外抑制口腔鳞状细胞癌生长,呈时间-剂量依赖性,并促进细胞凋亡。

病毒介导IL-24基因对口腔鳞癌耐药细胞株凋亡的影响

目的:研究杂合病毒介导的IL-24基因对口腔鳞状细胞癌耐药细胞的凋亡诱导作用,探讨其治疗耐药口腔癌的可能性。方法:通过MTT细胞活力测定鉴定口腔鳞状细胞癌细胞株KB和其耐药细胞株KBV。利用杂合病毒Ad LTR2EF1α搭载EGFP和IL-24转染KB细胞,确定最佳转染浓度,荧光倒置显微镜及RT-PCR鉴定EGFP或IL-24基因表达。以人永生化上皮细胞Ha Ca T细胞作为对照,使用Ad LTR2EF1α-IL-24转染KB、KBV及Ha Ca T细胞后,MMT法检测细胞活力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞凋亡形态。结果:KBV细胞对长春新碱的耐受性明显高于KB细胞。Ad LTR2EF1α-IL-24搭载的IL-24基因可以在KB及KBV细胞内过表达。IL-24基因在KB和KBV细胞中的过表达,有明显抑制细胞生长和促凋亡作用,而在Ha Ca T细胞中没有类似的作用。结论 :杂合病毒介导的IL-24对口腔鳞状细胞癌耐药细胞有较强的细胞毒性和诱导凋亡作用,并且对正常组织细胞没有影响。具有治疗耐药口腔癌的潜在价值。

人口腔黏膜鳞癌进展中胶原纤维变化的研究

目的探讨人口腔黏膜鳞癌发展过程中胶原纤维形态和含量与肿瘤进展的关系。方法采用HE和Masson三色染色分析80例人口腔黏膜鳞癌标本中胶原纤维的表达情况,并对胶原纤维的表达量及其与肿瘤分化的相关性进行统计学分析。结果与正常黏膜相比,重度不典型增生组织发生黏膜下沉积;胶原纤维形态与分布在侵袭性不同的浸润癌和高、中、低分化癌中呈减少的趋势。各组间胶原纤维面积百分比差异显著(P<0.05),肿瘤分化程度与肿瘤进展呈负相关(相关系数r=-0.800)。结论胶原纤维的形态分布与口腔黏膜癌的演进及分化程度密切相关。

PD-L1与MTA1在口腔鳞癌中的表达与临床意义

目的探讨程序性死亡配体1(Programmed death-Ligand1,PD-L1)与转移相关基因1(Metastasis associated gene1,MTA1)在口腔鳞癌组织以及正常口腔粘膜组织中的表达情况、分布状态,二者的相关性及临床意义。方法应用免疫组化方法检测PD-L1与MTA1在45例口腔鳞癌组织及20例正常口腔粘膜组织中的表达情况,分析二者表达的相关性及二者与口腔鳞癌组织临床病理学参数的关系。结果PD-L1在口腔鳞癌组织及正常口腔粘膜组织中的阳性表达率分别为75.56%和15.00%,MTA1在口腔鳞癌组织及正常口腔粘膜组织中的阳性表达率分别为66.67%和10.00%,口腔鳞癌组织及正常粘膜组织的相对表达量具有统计学意义差异(P<0.05)。PD-L1与MTA1的表达与口腔鳞癌的TNM分期有关(P<0.05),口腔鳞癌组织中PD-L1与MTA1的表达有相关性(φ=0.366,P=0.037)。结论PD-L1与MTA1可能在口腔鳞癌发生发展起到重要作用,可能成为潜在的新型联合靶点。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin对口腔鳞癌细胞Tca-8113凋亡的研究

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin对Tca-8113细胞增殖及细胞凋亡的影响。方法:倒置显微镜、荧光显微镜观察Apicidin对Tca-8113细胞的影响;CCK-8法观察24h、48h、72h不同浓度Apicidin对Tca-8113细胞增殖的影响;DNA ladder检测细胞凋亡;流式细胞术检测凋亡率。结果:不同浓度的Apicidin对Tca-8113细胞均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系;Apicidin能诱导Tca-8113细胞的凋亡且随着时间和剂量的延长越明显。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin能抑制人口腔鳞癌Tca-8113细胞增殖,诱导细胞凋亡。

口腔鳞状细胞癌的DNA定量分析及临床意义

目的运用ICM-DNA定量分析系统研究口腔鳞状细胞癌的DI值及倍体分布情况,评估其与口腔鳞状细胞癌的临床病理因素的关系。方法收集口腔鳞癌石蜡标本79例作为实验组,25例口腔正常黏膜组织和30例口腔黏膜异常增生作为对照组,经Feulgen染色后分组进行ICM-DNA定量分析。结果实验组79例口腔鳞状细胞癌中异倍体出现率为55.7%(44/79),均明显高于对照组正常组织的0.0%(0/25)和口腔黏膜异常增生的46.7%(14/30),P=0.000;口腔黏膜异常增生组轻、中、重度三组间比较,异倍体出现率分别为0%(0/2)、14.3%(1/7)、61.9%(13/21),P=0.036;口腔鳞癌组高及中低分化组间比较,高分化组异倍体出现率42.5%(20/47)低于中低分化组为75%(24/32),P=0.004;有淋巴结转移的有78.6%出现异倍体(22/28),高于无淋巴结转移的43.1%(22/51),P=0.002。结论口腔鳞状细胞癌中DNA异倍体出现率均高于正常组织和黏膜异常增生。ICM-DNA定量分析对于口腔鳞癌的诊断以及恶性程度的判断提供有价值的临床指标,有望用于口腔鳞癌的辅助性临床预测及诊断。

MTH1在口腔鳞癌中的表达及其对预后的影响

目的:研究MutT同源酶1(MTH1)在口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)组织中的表达及表达情况对患者预后的影响。方法:应用免疫组织化学方法对62例口腔鳞癌患者的石蜡切片进行检测,并对患者的预后情况进行随访,应用Kaplan-Meier法进行生存率分析,应用Cox回归进行多因素分析,应用蛋白质免疫印记实验对29例口腔鳞癌患者的新鲜组织进行检测。结果:免疫组化检测与蛋白质免疫印迹实验发现肿瘤组织中MTH1的的表达水平均高于正常组织,且伴随着口腔鳞癌组织的分化程度降低,MTH1的表达水平升高;MTH1的表达程度与患者的性别、年龄、吸烟史、饮酒史、患病部位均无明显关系(P>0.05),而与肿瘤浸润深度(P<0.000 1)、淋巴结转移情况(P=0.000 8)及肿瘤分化程度(P<0.000 1)有明显关系。MTH1高表达组患者5年总生存率及肿瘤特异性生存率均低于MTH1低表达组患者(P<0.000 1),且通过单因素及多因素Cox回归分析发现,肿瘤浸润深度(P=0.002 0),淋巴结转移情况(P=0.024 8),肿瘤分化程度(P=0.025 1)及MTH1表达情况(P≤0.000 1)均与患者的预后情况有密切联系,其中MTH1在口腔鳞癌中的表达可作为独立的影响因素(P=0.011)来判断患者的预后情况。结论:MTH1的表达情况从一定程度上反映了口腔鳞癌疾病的严重程度,并提示口腔鳞癌患者的预后情况,MTH1有望成为诊疗中对口腔鳞癌患者预后进行评估的新指标。

口腔鳞癌细胞EGFR的表达与顺铂敏感性关系的研究

目的:探讨口腔鳞癌细胞中EGFR表达水平与顺铂敏感性之间的关系。方法:设计并制备针对EGFR基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染口腔鳞癌CAL-27细胞株,采用RT-PCR法检测EGFR mRNA的表达水平,Western印迹法测定EGFR蛋白的表达。使用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)。结果:siRNA干扰后EGFR mRNA表达明显减弱(P<0.05),EGFR蛋白表达明显下调,顺铂敏感性比正常对照组提高了约2.2倍。结论:针对EGFR基因的siRNA能有效抑制口腔鳞癌细胞EGFR mRNA和蛋白的表达,并能恢复鳞癌细胞对顺铂的敏感性。

川陈皮素对口腔鳞状细胞癌细胞Cal-27增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究川陈皮素(nobiletin)在体外对口腔鳞状细胞癌Cal-27细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法用二甲基亚砜(DMSO)溶解不同浓度的川陈皮素作用于Cal-27细胞,进行MTT实验,检测该药对口腔鳞癌细胞Cal-27细胞增殖的抑制作用。通过划痕实验研究川陈皮素对Cal-27细胞迁移能力的影响。采用Transwell小室实验检测川陈皮素对Cal-27细胞侵袭能力的抑制作用。结果 MTT实验结果显示,川陈皮素可显著抑制口腔鳞癌细胞Cal-27的增殖;在划痕实验中,48 h后,对照组和实验组的差异有统计学意义(P<0.01),提示川陈皮素有效抑制Cal-27细胞的迁移;Transwell实验结果表明川陈皮素对Cal-27细胞的侵袭能力有一定的抑制作用。结论在体外条件下,相比对照组,川陈皮素对口腔鳞癌细胞的增殖、迁移、侵袭有良好的抑制作用。

二烯丙基二硫对口腔鳞癌CAL-27细胞增殖及凋亡的研究

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对口腔鳞癌CAL-27细胞的增殖抑制及促进凋亡的作用。方法体外培养口腔鳞癌CAL-27细胞,采用不同浓度二烯丙基二硫对CAL-27细胞进行干预,并设立对照组,采用倒置显微镜观察细胞的形态学改变,MTT法检测细胞的增殖情况,Hoechst33342染色法检测细胞凋亡,用比色法检测caspase-3活性的改变。结果倒置相差显微镜下观察对照组的细胞贴壁,形态呈多边形,生长活跃;实验组细胞形态改变,细胞脱壁,变小、变圆,细胞膜皱缩。MTT结果显示,随着浓度的增加,时间的延长,二烯丙基二硫对CAL-27细胞的生长及增殖有显著的抑制作用,并且各实验组相比及实验组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜下观察到经Hoechst33342染色的凋亡细胞。实验组caspase-3活性较正常对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二烯丙基二硫体外能抑制CAL-27的细胞增殖,呈一定的时间及剂量依赖性,并且诱导细胞凋亡,caspase-3可能参与了细胞凋亡的调控。

黄芩素与黄芩苷联合用药对口腔鳞癌细胞增殖、迁移的影响

目的探讨黄芩素与黄芩苷联合用药在体外条件下对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)CAL-27细胞的增殖、迁移能力的影响。方法应用MTT法检测黄芩素、黄芩苷及联合用药时对CAL-27细胞增殖能力的影响;应用划痕实验检测黄芩素、黄芩苷及联合用药时对CAL-27细胞迁移能力的影响;应用免疫荧光实验检测上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的上皮标志物E钙粘蛋白(E-cadherin)与间充质标志物N钙粘蛋白(N-cadherin)的表达情况。结果MTT结果显示黄芩素与黄芩苷对CAL-27细胞的增殖均有抑制作用,随着浓度的增加,抑制率逐渐增强,而联合用药组对CAL-27细胞的抑制作用明显高于黄芩素及黄芩苷单药组(P=0.045,P=0.001),联合用药指数(Combination Index,CI)<1;划痕实验结果显示,24 h时,联合用药组和单药组的细胞愈合率均显著低于对照组(P=0.001,P=0.002,P=0.001),且联合用药组低于单药组(P=0.003,P=0.002);免疫荧光结果显示,黄芩素、黄芩苷及联合用药组与对照组相比,E-cadherin蛋白的表达升高,N-cadherin蛋白的表达降低,且联合用药组较单药组差异更为显著。结论黄芩素与黄芩苷均可抑制CAL-27细胞的增殖及迁移,且联合用药对CAL-27细胞增殖及迁移的抑制能力强于黄芩素与黄芩苷组,抑制作用可能与EMT的逆向表达有关。

曲古抑菌素A与5-杂氮脱氧胞苷联用抑制口腔鳞癌生长的体外研究

目的:探索曲古抑菌素A(TSA)与5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-2’)联用治疗口腔鳞癌的可能性。方法:采用MTT法研究TSA及5-aza-2’单独作用于口腔鳞癌细胞(Tca-8113)后,对其生长增殖的抑制作用;采用低剂量的TSA及5-aza-2’联用,运用MTT及克隆形成实验检测药物对口腔鳞癌细胞的毒性作用;采用TUNEL法检测低剂量的TSA与5-aza-2’配伍后是否能诱导口腔鳞癌细胞发生凋亡。结果:Tca-8113对TSA及5-aza-2’都呈现出较好的敏感性;与单独运用低剂量的两种药物比较,低剂量的TSA及5-aza-2’联用可以使两种药物的细胞毒性作用显著增强,并明显诱导口腔鳞癌细胞发生凋亡。结论:5-aza-2’可以有效增强口腔鳞癌细胞对低剂量TSA的敏感性,在体外实验中呈现了较好的抗癌效应,TSA与5-aza-2’的配伍可能成为口腔鳞癌治疗领域的新策略。

丙戊酸钠抑制口腔鳞状细胞癌生长的实验研究

目的:本实验探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对口腔鳞状细胞癌(Tca-8113)生长抑制情况以及促进凋亡的作用。方法:采用0、0.1、2.5、5、10、12.5、25、50、100mmol/L丙戊酸钠对口腔鳞状细胞癌进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态改变;CCK-8法检测细胞增殖活性;ELISA方法及Annexin-V-FITC/PI双染法检测对细胞凋亡的作用。结果:倒置相差显微镜下观察到对照组细胞呈多边形,贴壁,生长活跃;实验组细胞形态改变明显,大部分细胞核固缩,细胞变小、变圆、脱壁。细胞生长曲线显示,随丙戊酸钠浓度增加、时间延长,Tca-8113细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞存活率与对照组相比(P<0.05),差别有统计学意义。2.5、10mmol/L丙戊酸钠作用24h,细胞总凋亡率分别为9.2%和26.7%,与对照组3.6%相比,差别均有统计学意义。结论:丙戊酸钠体外抑制口腔鳞状细胞癌生长,呈时间-剂量依赖性,并诱导细胞凋亡。

碳酸酐酶Ⅻ在口腔鳞癌中的表达及意义

目的探讨碳酸酐酶Ⅻ(carbonic anhydraseⅫ,CAⅫ)在口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学的方法检测CAⅫ在60例OSCC组织及20例正常口腔黏膜组织中的表达,酶联免疫法(ELISA)检测CAⅫ在30例OSCC患者及10例健康人血清中的表达,观察其与OSCC的相关性。结果 60例OSCC组织中有43例CAⅫ呈阳性表达,阳性率为71%,明显比正常口腔黏膜组织高(10%)(P <0. 05); CAⅫ的组织表达水平和OSCC的临床分期以及肿瘤直径显著相关(P <0. 05),但是和患者的年龄、性别、淋巴结转移以及OSCC的分化程度无关(P> 0. 05)。OSCC患者血清中CAⅫ的表达量显著高于健康对照者(Z=4. 685,P=0. 00),但在OSCC的各项临床病理特征之间差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 CAⅫ可能在OSCC的生长、侵袭中发挥着重要作用;定量检测血清CAⅫ在OSCC的诊疗中具有一定的应用价值。

FOXQ1与E-cadherin蛋白在口腔鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)和上皮钙黏蛋白(epitheia cadherin,E-cadherin)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达情况及其临床意义。方法应用免疫组化法检测69例口腔鳞癌组织和32例正常口腔黏膜组织中FOXQ1与E-cadherin的表达情况,并分析二者与口腔鳞癌临床病理参数的关系及二者的相关性。结果口腔鳞癌组织中FOXQ1的阳性表达率高于正常口腔黏膜组织(P<0.05),E-cadherin的阳性表达率低于正常口腔黏膜组织(P<0.05);FOXQ1和E-cadherin的表达水平与肿瘤的分化程度及临床分期密切相关,而与患者的年龄、性别、吸烟史及肿瘤直径无明显相关性;口腔鳞癌组织中FOXQ1与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.250,P<0.01)。结论FOXQ1与E-cadherin在口腔鳞癌发展过程中起作用,联合检测二者对口腔鳞癌的早期诊断及预后有一定的临床参考价值。

89例正颌外科手术患者围手术期的护理

目的:探讨正颌外科患者术前术后的最佳护理措施。方法:回顾性分析了89例正颌外科患者术前术后护理的过程。在这个护理过程中部分病例采取了实用护理学,护理心理学或护理诊断学技术。注重术后口腔卫生,保持术后呼吸道通畅并采取术区冷敷的方法以减轻肿胀,强调了心理护理在正颌手术患者中应用的重要性。结果:全部89例经过正颌外科手术的患者在应用了此护理方法后,术后均恢复良好,无一例患者因为护理出现不良症状影响手术效果。结论:综合应用实用护理学,护理心理学,护理诊断学在正颌外科患者的治疗和康复过程中具有关键的作用。

以问题为基础学习教学方法在口腔颌面外科学门诊实习教学中的应用

目的探讨五年制口腔医学专业学生口腔颌面外科学门诊实习教学中以问题为基础学习教学方法的应用及其效果分析。方法以哈尔滨医科大学附属口腔医院口腔颌面外科实习的五年制口腔医学专业25名学生为研究对象，引入以问题为基础学习教学方法，将学生分成4组，每组5人～7人，在教师的指导下，组织学生结合具体患者和典型病例进行分析讨论，提出诊断及治疗计划，并通过对患者的随访评价学生的能力。结果以问题为基础学习教学方法活跃了课堂气氛，充分发挥了学生的主观能动性，学生在教师的引导下学习正确分析病例、作出正确的诊断和治疗计划，提高了实习教学的效果。结论以问题为基础学习教学方法增强了学生学习的动力，提高了学生学习的兴趣和解决实际问题的能力，通过理论知识与实践的结合培养了学生的临床思维，为医学生成为一名合格的医生奠定了基础。

1171例舌癌的治疗与预后分析

目的：探讨和分析舌癌的治疗方法及其预后的影响因素。方法对2001～2007年在中南大学口腔医学院和哈尔滨医科大学附属口腔医学院住院的1171例舌癌患者进行回顾性研究，对其年龄、性别、癌变部位、临床分期、病理分级、治疗方法等进行分析，探讨影响舌癌预后的因素。结果舌体癌患者生存率明显高于舌根癌；临床分期高、细胞分化程度低者其术后生存率较低；手术切缘阳性者、淋巴结转移者、骨受侵犯者其预后差；下颌骨的切除与否与预后无相关性（P＞0．05），术后即刻行皮瓣修复与否对生存率影响差异无统计学意义（P＞0．05）。结论切缘状况与临床分期是影响舌癌预后的独立因素，早期发现，早期诊断及治疗对提高舌癌患者的生存率有显著意义。