人白细胞介素-10 cDNA的克隆、测序和真核表达载体的构建(英文)

目的 克隆、测序人白细胞介素 10cDNA开放阅读框架 ,构建其真核表达载体。方法 刀豆蛋白A活化的人外周血单个核细胞培养后用于提取总RNA ,以随机引物行逆转录反应合成hIL 10cDNA第一链 ,并以hIL 10特异性引物行PCR扩增 ,将PCR产物克隆至pUC18中测序并构建真核表达载体pcDNA3.1hIL 10。结果 PCR扩出5 5 0bp特异性片段 ,经克隆至pUC18后测序表明序列同源性与GenBank报道完全一致 ,并克隆鉴定了真核表达载体pcDNA3.1hIL 10。结论 成功克隆了人白细胞介素 10cDNA开放阅读框架 ,序列分析证实与GenBank录入序列同源性达 10 0 % ,并成功构建了真核表达载体pcDNA3.1hIL 10。