肝素结合性表皮生长因子在生殖医学中的研究进展

肝素结合性表皮生长因子(heparin-binding epithelial growth factor,HB-EGF)是表皮生长因子家族中的一员,是一种跨膜蛋白膜固定型HB-EGF(pro HB-EGF)。proHB-EGF在特殊的金属蛋白酶作用下可水解产生可溶性HB-EGF(s HB-EGF)。proHB-EGF不仅是sHB-EGF的前体,而且本身也是生物活性分子。proHB-EGF与膜蛋白形成复合体,此复合体定位于细胞间连接区,暗示proHB-EGF可能是通过近分泌机制实现其在细胞间的信号传导功能。在一个试管模型中,proHB-EGF表达为生长抑制活性,而sHB-EGF表达为生长激活活性。这些特性指出pro HB-EGF和sHB-EGF是通过不同的通路发挥作用。proHB-EGF和sHB-EGF在人体内的功能尚不明确,但他们在许多生理过程中起重要作用,HB-EGF在生殖内分泌领域的研究受到极大关注,如黄体细胞的分裂与凋亡、卵泡发育、胚胎移植等。

巯基乙酸对孕酮诱导爪蟾卵母细胞体外成熟过程中MAPK和MPF激酶活性的影响

背景与目的:探讨巯基乙酸(TGA)对孕酮诱导爪蟾卵母细胞体外成熟过程中丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)和成熟促进因子(MPF)蛋白激酶活性的影响。材料与方法:用0、5、25和125μg/ml浓度的TGA分别处理经孕酮诱导的体外培养爪蟾卵母细胞,另设不含孕酮的阴性对照组,于处理4h和8h收集卵母细胞进行Western Blotting检测,观察p_Erk1/Erk1蛋白、p_RSK蛋白、Cdc2、p_Cdc2和Cyclin B1蛋白的表达情况。结果:TGA处理爪蟾卵母细胞4h后,Erk1蛋白的磷酸化水平(即MAPK的活性水平),较对照组明显增加(P<0.05);MAPK的活性底物p_RSK蛋白的表达也增加(P<0.05);同时伴随着p_Cdc2表达水平的下降和Cyclin B1蛋白表达的增强(P<0.05)。TGA处理8h后Erk1蛋白磷酸化水平和p_RSK蛋白含量与对照组相比无明显差异(P>0.05),但此时TGA组p_Cdc2水平明显增加(P<0.05),Cyclin B1蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:在孕酮诱导的爪蟾卵母细胞体外成熟早期,TGA可促进MPF和MAPK蛋白激酶及其底物p_RSK的活化;在成熟的晚期,TGA对MAPK活性无明显影响,但明显抑制MPF活性。TGA影响MPF活性的可能机制是降低CyclinB1蛋白水平。

巯基乙酸对小鼠成熟卵母细胞皮质颗粒分布和MAPK活性的影响

背景与目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对小鼠卵母细胞胞浆成熟和相关生化指标的影响。材料与方法:以不同浓度TGA(0.2、1.0、2.5mmol/L)体外培养小鼠卵母细胞,并设M16培养液对照组,培养16h后在体视显微镜下,观测卵母细胞生发泡破裂和第一极体排出情况,用免疫荧光染色方法对皮质颗粒(cortical granules,CGs)进行标记,采用western blot方法对p44/42MAPK进行检测。结果:各组生发泡破裂率均达到90%左右,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。随着TGA剂量的增加,第一极体排出率下降,各剂量组和对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。各剂量组均可观察到CGs在细胞膜下的线状排列,但随着TGA剂量的增加,质膜下CGs的密度降低,胞浆中CGs的密度有增加的趋势。对照组卵母细胞中有非常明显的无皮质颗粒区(cortical granules freedomain,CGFD)形成,0.2mmol/L组也形成了CGFD,但1.0mmol/L和2.5mmol/L两个剂量组未观察到CGFD。1.0mmol/L和2.5mmol/LTGA可抑制p44/42MAPK的活化。结论:TGA可影响小鼠卵母细胞细胞质成熟和MAPK的活性,具有一定的生殖毒性。

巯基乙酸对非洲蟾蜍和小鼠卵母细胞体外减数分裂成熟的影响

目的探索巯基乙酸(TGA)对非洲蟾蜍和小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法用0μg/ml、5μg/ml、25μg/ml和125μg/mlTGA处理非洲蟾蜍卵母细胞,体外培养,并观察生发泡破裂(GVBD)发生情况。用0μg/ml、5μg/ml和50μg/ml的TGA处理小鼠卵母细胞,体外培养,观察GVBD和第一极体(PB1)释放的情况。结果在非洲蟾蜍卵母细胞中,TGA处理2h、4h和6h后,各TGA处理组的GVBD率均高于对照组,但在8h时,TGA处理组与对照组GVBD率之间无统计学差异。在小鼠卵母细胞中,仅12h时5μg/ml组的GVBD率高于对照组,但在各时间点,TGA处理组的GVBD率都有增加趋势;在16h,5μg/ml和50μg/mlTGA处理可促进PB1释放,但与对照组相比,仅5μg/ml组有统计学意义。结论结果表明,TGA可促进非洲蟾蜍卵母细胞第1次减数分裂的启动。在小鼠中卵母细胞中,低剂量的TGA也可加速第1次减数分裂的启动。低剂量的TGA可增加小鼠卵母细胞的成熟率;但高剂量的TGA却没有明显的促进作用,推测TGA对小鼠卵母细胞成熟的影响可能存在双重性。

巯基乙酸对爪蟾卵母细胞体外核成熟的影响

背景与目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对孕酮诱导的爪蟾卵母细胞核成熟的影响。材料与方法:用不同浓度的TGA(5、25、125μg/ml)在体外预处理爪蟾卵母细胞2 h后,再用孕酮诱导成熟,实验并设不经TGA预处理的对照组。在培养过程中观察卵母细胞的外观和核形态,以判断生发泡破裂(GVBD)情况;在培养结束时(加入孕酮后8 h),收集卵母细胞进行荧光染色,观察染色体的状态。结果:经不同浓度TGA处理后卵母细胞的GVBD50明显缩短,与对照组比较均具有统计学意义(P均<0.05),说明TGA加快卵细胞GVBD的发生;荧光染色观察GV期卵母细胞未见凝集的染色体,第一次减数分裂中期细胞可见赤道板形成,第二次减数分裂中期细胞除染色体赤道板外,还可见第一极体(PB1)。经25 mg/ml和125 mg/ml浓度的TGA处理后,排出PB1的爪蟾卵母细胞比例明显降低(P<0.05),即抑制了MI--MII转变和第一极体的释放。结论:TGA可抑制孕酮诱导的爪蟾卵母细胞体外成熟。

叶酸对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

背景与目的:探讨叶酸(folicacid,FA)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。材料与方法:实验设次黄嘌呤(hypoxanthine,Hx)处理小鼠体外卵母细胞的卵母细胞成熟抑制模型组(Hx4mmol/L+M16培养液)、FA组(500μmol/L FA+4mmol/L Hx+M16培养液)和M16培养液组,各组卵母细胞培养24h后,在体视显微镜下观测卵母细胞生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体(thefirst polar body,PB1)排出情况,采用免疫荧光染色方法观察染色体和纺锤体的形态结构。结果:M16培养液组、Hx模型组和FA处理组的GVBD率分别为98%、22.2%、40.1%,其PB1排出率分别为77.7%、15.5%、27.6%,各组间的差异均具有统计学意义(P<0.05);次黄嘌呤和叶酸对染色体的形态没有影响,而次黄嘌呤使正常的纺锤体变长、变宽、面积变大,FA组较Hx模型组增大的纺锤体有所恢复,并接近于正常水平。结论:叶酸可促进小鼠卵母细胞体外减数分裂的重启和成熟。

经皮染毒巯基乙酸对昆明小鼠排卵及体内卵母细胞成熟的影响

背景与目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对昆明小鼠排卵以及卵母细胞体内成熟的影响。材料与方法:选取昆明小鼠12只,按体重随机分成4组,每组3只,分别为对照组和TGA高(151.25 mg/kg)、中(75.625 mg/kg)、低(37.812 5 mg/kg)3个剂量组。给小鼠皮肤染毒TGA的同时腹腔注射10 IU人绒毛膜促性腺激素(hCG),14 h后,处死小鼠收集卵母细胞进行小鼠排卵计数,采用免疫荧光染色法观察成熟卵母细胞内纺锤体与皮质颗粒(cortical germinal,CG)的分布。结果:TGA高、中剂量组排卵数明显低于对照组及低剂量组(P<0.01及P<0.05);对照组和低剂量组小鼠卵母细胞纺锤体呈双极状,中、高剂量组纺锤体逐渐呈桶状,形态发生了明显改变,且随着TGA剂量的增加,纺锤体的面积有增加趋势;TGA对CG的膜下分布以及无皮质颗粒区(cortical germinal freedomain,CGFD)的形成在形态上没有明显影响。结论:经皮肤给TGA能抑制小鼠排卵,并对卵母细胞成熟有一定影响。

巯基乙酸对爪蟾卵母细胞体外孤雌激活的影响及其机制研究

目的:探讨巯基乙酸(thioglycolic acid,TGA)对钙离子载体A23187诱导的非洲爪蟾卵母细胞体外孤雌激活的影响,探讨孤雌激活的机制。方法:体外孕酮诱导爪蟾卵母细胞成熟后,选取MII期细胞用不同浓度TGA(0、5、25、125μg/ml)处理2h,再用钙离子载体A23187诱导激活,在加入激活剂后不同时间(0、10、20、30、60min)记录激活的卵母细胞数量,计算其激活率;加入激活剂后60min收集卵母细胞,进行荧光染色观察原核形成情况;采用Western Blotting检测CyclinB2、Mos、p-ERK1/ERK1的表达。结果:不同浓度的TGA均降低非洲爪蟾卵母细胞的孤雌激活率,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);激活后对照组卵母细胞在动物极中央形成一个圆形的受精斑,而TGA125μg/ml处理后形成的受精斑形状不规则且周围毛糙不齐;荧光染色发现对照组细胞中有清晰的原核形成,而TGA处理组则未发现;WesternBlotting分析结果显示,经TGA处理可抑制CyclinB2、Mos、p-ERK1在孤雌激活时的降解。结论:TGA可以抑制钙离子载体A23187诱导的非洲爪蟾卵母细胞体外孤雌激活,其作用机制可能与干扰成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在孤雌激活时的正常降解有关。

卵母细胞成熟过程MPF的调控和MPF的作用底物

系统综述卵母细胞成熟过程中成熟促进因子的调控及其作用底物。研究表明,卵母细胞成熟过程中,成熟促进因子的活性受Cdc25、Myt1和Wee1蛋白以及泛素信号途径的调控,而成熟促进因子本身又可作用于下游的信号分子,如Aurora A蛋白、核纤层蛋白和组蛋白等,来发挥其在成熟过程中的中心调控作用。

检测双次血β-HCG及其倍数对胚胎移植后妊娠结局的预测价值

目的:探讨胚胎移植后14天与16天检测双次血人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)及其倍数增长情况对妊娠结局的预测价值。方法:分析体外受精-胚胎移植助孕治疗的452例患者的临床资料,将妊娠妇女分为正常妊娠组(320例)、异常妊娠组(32例)、生化妊娠组(100例)。正常妊娠组包括单胎妊娠、双胎妊娠和三胎妊娠;异常妊娠组包括单胎停育和异位妊娠。比较胚胎移植后14天与16天血β-HCG浓度(简写HCG14d和HCG16d)的中位数水平及其倍数增长(简写HCG16d:14d)情况。结果:HCG14d与HCG16d的中位数水平从异常妊娠至正常妊娠逐渐增加。正常妊娠组的HCG14d、HCG16d及HCG16d:14d均明显高于异常妊娠组,差异有高度统计学意义(P=0.000),界值分别为380.59U/L、807.26U/L和2.10时均有中等预测价值;多胎妊娠组的HCG14d、HCG16d高于单胎妊娠组,差异有高度统计学意义(P=0.000),界值分别为1231.73U/L、3053.49U/L时有中等预测价值,其HCG16d:14d略高于单胎妊娠组,差异无统计学意义(P=0.857),界值为2.48时有较少预测价值;单胎停育组的HCG14d、HCG16d及HCG16d:14d均低于单胎妊娠组,差异均有统计学意义(P=0.034,P=0.001,P=0.000),界值分别为192.30U/L、366.46U/L和1.94时,分别有较少、中等、较高的预测价值;异位妊娠组的HCG14d、HCG16d及HCG16d:14d均低于单胎妊娠组,差异均有高度统计学意义(P=0.000,P=0.000,P=0.001),界值分别为110.36U/L、264.23U/L和1.97时分别有较高、较高、中等的预测价值。结论:胚胎移植后HCG14d、HCG16d定量检测结合其HCG16d:14d倍数增长可以预测正常妊娠、胚胎停育和异位妊娠。

卵巢子宫内膜异位囊肿及其手术对体外受精-胚胎移植的影响

目的：探讨卵巢子宫内膜异位囊肿及其手术对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）过程及结局的影响。方法回顾性分析238例 IVF 治疗的新鲜周期患者，分为非手术组、手术组、输卵管因素不孕组。比较3组的一般情况、基础卵巢内分泌状态、Gn 天数及用量、获卵数、MII 卵数、受精数、2PN、hCG 日激素、优质胚胎数及临床妊娠情况。结果手术组月经第3天基础激素 FSH 水平明显高于输卵管组和非手术组，差异有统计学意义；非手术组与输卵管组比较，差异无统计学意义。3组 Gn 天数、Gn 用量、hCG 日激素、移植日内膜厚度比较，差异均无统计学意义。非手术组及手术组的获卵数、MII 卵数、受精数、优质胚胎数低于输卵管组，差异有统计学意义；手术组与非手术组比较，差异无统计学意义。输卵管组婴儿安全出生比率明显高于非手术组（37.9％），差异有统计学意义。输卵管组临床妊娠比率明显高于非手术组（39.4％），差异有统计学意义。非手术组单侧巧克力囊肿患者54例，非巧克力囊肿侧的平均获卵数（4.1±2.8），明显高于巧克力囊肿侧（3.1±2.3），差异有统计学意义。手术组单侧巧克力囊肿剥除手术患者28例，非手术侧的平均获卵数（5.1±4.0），明显高于手术侧（3.1±2.4），差异有统计学意义。结论子宫内膜异位囊肿本身影响 IVF 过程和结局。手术剥除囊肿不能改善 IVF 的治疗结局。

短方案降调节hCG注射日前后血清雌孕激素水平变化及其比值对IVF/ICSI结局的影响

目的：探讨体外受精一胚胎移植（IVF-ET）中hCG注射日前后血清雌孕激素水平变化及其比值对妊娠结局的影响。方法：选取行短方案治疗的137例不孕症患者的临床资料，根据hCG注射日每成熟卵泡（B超下直径≥14mm的卵泡）的E2水平分为3组，A1组E2水平〈450pg／ml，A2组E2水平450-600pg／ml，A3组E2水平〉600pg／ml；据hCG注射日较前一日E2增幅程度不同亦分为3组，B1组增幅程度〈20％，B2组增幅程度20％q0％，B3组增幅程度〉30％；另外为探讨hCG注射日雌、孕激素比值对妊娠结局的影响，按hCG注射E2/E／P值不同亦分为3组，C1组E2，P〈3，C2组E2／P=3-5，C3组EYP〉5；对上述3组的临床资料进行回顾性分析。结果：A2组的临床妊娠率高于A3组，A1和A2组的胚胎种植率亦高于A3组，差异均有统计学意义（P〈O．05）；B1组的临床妊娠率明显高于B2和B3组，B1组的胚胎种植率亦高于B3组，差异均有统计学意义（氏0．05）；C3组的临床妊娠率高于C1组，差异有统计学意义（P〈0．05）；C2、c3组的胚胎种植率明显高于C1组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：行ⅣF—ET患者的hCG注射目前后适合水平的血清雌、孕激素及其比值（E2水平在450-600pg／ml。

黄芪多糖对体外培养多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞雄激素分泌异常的影响

目的 探索多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵巢颗粒细胞雄激素分泌的变化及黄芪多糖对其雄激素分泌变化的影响.方法 收集行IVF/ICSI-ET 17例PCOS患者的卵巢颗粒细胞进行体外培养,用浓度为50、100、200、500、1000 μg/ml的黄芪多糖分别作用于体外培养的PCOS患者卵巢颗粒细胞,检测其培养液中雌激素（E2）、孕激素（P）、雄激素（T）水平的变化.结果 PCOS患者卵巢颗粒细胞分泌T水平[（0.4716±0.03）nmol/L]明显高于对照组[（0.23 ±0.0162） nmol/L,P＜0.05],两组E2、P水平比较差异均无统计学意义（P＞0.05）.给予不同浓度黄芪多糖处理后,PCOS组患者颗粒细胞培养液中T水平明显降低（P＜0.01）.黄芪多糖浓度分别为1000、500、200、100及50μg/ml的T水平与0μg/ml相比,其差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 黄芪多糖能抑制PCOS患者卵巢颗粒细胞体外培养中的睾酮分泌,降低睾酮分泌水平,可成为治疗PCOS患者的新途径.

卵泡中肝素结合表皮生长因子的表达与卵泡发育及雌孕激素水平的关系

目的检测体外受精-胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）患者不同大小卵泡中肝素结合表皮生长因子（Heparin-binding epidermal growth factor,HB-EGF）的表达水平,探讨HBEGF与相应卵泡液中雌二醇（estraadid,E2）、孕激素（progesterone,P）及E2/P比值之间的相关性及其意义。方法选取2014年4~9月哈尔滨医科大学第一临床医院生殖中心因男方因素或者输卵管因素行辅助生殖治疗的58例不孕患者的临床资料,采用酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）检测因输卵管因素或者男方因素行辅助生殖治疗患者卵泡液中HB-EGF的表达情况,电化学发光法（electrochemiluminescence,ECLIA）检测该卵泡液中雌孕激素水平。大卵泡组（32例）和小卵泡组（26例）互为对照组。结果 ELISA法检测发现HB-EGF在卵泡液中有表达;卵泡液中HB-EGF、E2和E2/P与卵泡大小呈正相关性关系,HB-EGF、E2和E2/P在大卵泡组水平显著高于小卵泡组（P〈0.05）,但P与卵泡大小无相关性（P=0.226）。大卵泡组中,HE-EGF与E2和E2/P具有正相关性,相关系数为0.562和0.487,即HB-EGF越大,E2和E2/P越大,与P不具有相关性（P=0.335）。在小卵泡组中,HE-EGF与E2和E2/P具有正相关性,相关系数为0.454和0.728,与P不具有相关性（P=0.068）。结论 HB-EGF在卵泡液中有表达,且与卵泡大小和卵泡液中E2水平、E2/P比值呈正相关性,与P水平无相关性。HB-EGF可能促进卵泡的生长发育,从而对卵母细胞的生长发育有一定的作用,通过检测卵泡液中HB-EGF可以对卵母细胞质量进行初步的评估。

冻融后损伤胚胎发育潜能对临床结局的影响

目的探讨冻融后部分损伤胚胎发育潜能对临床结局的影响。方法回顾性分析2013年7月至2014年10月哈尔滨医科大学附属第一医院生殖中心310个出现部分损伤的冻融胚胎移植周期,根据过夜培养后胚胎继续发育情况分为两组,胚胎解冻第二天未继续发育的41个周期为A组,解冻第二天至少有1枚胚胎继续发育的269个周期为B组。比较两组的种植率及临床妊娠率。结果 B组的种植率及妊娠率[17.83%(110/617)、32.34%(87/269)]均高于A组[7.69%(7/91)、14.63%(6/41)](P<0.05)。结论冻融后部分损伤胚胎,过夜培养后未继续发育者种植率及妊娠率低,发育潜能是影响临床结局的重要因素。

基础睾酮水平与不同卵巢储备患者体外受精周期卵巢反应的关系

目的探讨基础睾酮(testosterone,T)水平与不同卵巢储备能力患者体外受精周期(in vitro fertilization,IVF)卵巢反应的相关性。方法对248例首次行IVF的患者行回顾性分析,先按基础日FSH/LH及FSH值大小分成卵巢储备能力正常组(A组164例)和卵巢储备能力低下组(B组84例)分别进行研究,取总体样本248例患者的T值均数为截点,将A、B组分别分为组1(T<0.5ng/ml)和组2(T≥0.5ng/ml),比较组1和组2间卵巢反应参数均值差异;用Pearson相关性分析分别分析A、B两组中T值与卵巢反应参数的相关性;运用多元回归寻找影响获卵数的独立因素;运用受试者工作(receiver operating curve,ROC)曲线分别评价各指标在A、B组患者中预测卵巢反应的价值。结果 (1)A组:①A1组卵巢反应参数低于A2组,差异有统计学意义。②基础T值与卵巢反应参数明显正相关(P<0.05)。③T值是影响获卵数的独立因素之一,且在该组中对获卵数影响最大(P<0.01)。④根据ROC曲线结果当T值为0.500ng/ml的时候,其诊断卵巢低反应的敏感度为86.5%特异度为76.2%。(2)B组中:①B1组部分卵巢反应参数高于B2组,差异有统计学意义。②基础T值与部分卵巢反应参数负相关(P<0.05)。③T值是影响获卵数的独立因素之一,但影响是负面的。④ROC曲线显示该组中基础窦卵泡数(AFC)较T值对卵巢反应具有更高的预测价值。结论在卵巢储备能力低下的组,血清基础睾酮值与体外受精周期卵巢反应参数正相关,对卵巢低反应具有较强的预测价值;卵巢储备能力尚好的组,血清基础睾酮值与部分卵巢反应参数负相关,不具备明显的预测卵巢反应的价值。

多囊卵巢综合征：一种古老的疾病

在对古代医学文献的研究中，笔者发现多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）可能是一种远古时代的疾病。因为PCOS妇女从中获益，使PCOS在人类的进化史中可以一直存在。同时笔者还发现与PCOS有关的基因变异在种族间相似的可能性也将提高。PCOS是一种在远古时期就存在的疾病，还是在现代社会中由于肥胖人口数量的增加使代谢压力变大，

两种多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗大鼠模型的比较研究

目的分别采用胰岛素(INS)联合绒毛膜促性腺激素(HCG)法、来曲唑(LE)法建立大鼠PCOS动物模型,探讨其生殖和代谢异常的特征并加以比较。方法将实验大鼠随机分为3组:A组(对照组)、B组(INS+HCG组)、C组(LE组)。观察动情周期及体质量变化;造模后取血检测性激素及糖脂代谢指标;卵巢组织切片HE染色观察局部形态学改变。结果 B组和C组体质量和卵巢质量增加(P<0.05);A组有规律动情周期,B组及C组动情周期紊乱;A组卵巢局部形态基本正常,B组和C组均出现卵巢多囊样改变;B组T、LH、LH/FSH、FPG、FINS、HOMA-IR和TG均显著增高(P<0.05),C组T、FINS、HOMA-IR增高(P<0.05);B组FPG、FINS、HOMA-IR均高于C组(P<0.05)。结论 INS+HCG法和LE法均可成功诱导大鼠PCOS胰岛素抵抗模型,INS+HCG法诱导的大鼠模型其生殖及代谢指标的变化较LE更具优势。