低浓度β-甘油磷酸钠培养牙髓干细胞向成牙本质细胞分化及相关因子的表达

背景:以往研究用来诱导成牙本质细胞分化的培养基普遍借鉴成骨细胞的诱导浓度,其他浓度的诱导情况尚无相关研究。目的:观察在低浓度β-甘油磷酸钠条件培养下,牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中,牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白和细胞外基质磷酸糖蛋白的表达情况。方法:分离培养人牙髓干细胞,用不同浓度的诱导液诱导牙髓干细胞分别向脂肪细胞,成骨细胞分化,证实其多向分化能力。用5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养牙髓干细胞向牙本质细胞分化,分别在培养第7,14,21,28天提取各组细胞RNA,反转录PCR检测牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白和细胞外基质磷酸糖蛋白的表达情况;诱导牙髓干细胞向成牙本质细胞分化形成的矿化结节用Alizarin Red S法检测。结果与结论:人牙髓干细胞经过诱导可证实其成功分化为脂肪细胞和成骨细胞;反转录PCR结果显示,5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠培养牙髓干细胞在培养7,14,21 d,各组细胞牙本质基质蛋白1、牙本质涎蛋白的mR NA表达增加,伴随细胞外基质磷酸糖蛋白表达下调;培养至28 d,行矿化结节检测发现牙髓干细胞向成牙本质细胞成功矿化,可见红染的矿化结节。结果证实,5 mmol/Lβ-甘油磷酸钠诱导培养的牙髓干细胞可成功分化为成牙本质细胞,并下调细胞外基质磷酸糖蛋白mR NA的表达,同时上调牙本质基质蛋白1及牙本质涎蛋白mR NA的表达。

细胞外基质磷酸糖蛋白在牙发生及骨形成上的研究进展

细胞外基质磷酸糖蛋白（matrix extracelluar phospho-glycoprotein,MEPE），最初由Rowe等Ⅲ从肿瘤相关性骨软化症（ oncogenic hypophosphatemic osteomalacia, OHO）患者肿瘤细胞的cDNA文库中克隆而得，随后L．Argiro等在骨组织中发现MEPE与矿化密切相关。牙和骨组织均为矿化的组织，在细胞外基质中的蛋白组成以及形成机制上是相似的。目前MEPE在成骨细胞、骨细胞和成牙本质细胞上均表达，其在牙形成及骨发生方面作用已成为研究热点。本文现就MEPE在骨及牙这两个矿化组织中的研究进展进行综述。

辛伐他汀对人牙髓干细胞增殖和分化的影响

目的:研究辛伐他汀对人牙髓干细胞(dental pulpstem cells,DPSCs)增殖和成骨分化的影响。方法:将第3代人DPSCs在矿化培养液中诱导培养,同时加入不同浓度的辛伐他汀(1×10-5mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L),噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,茜素红染色鉴定成骨分化。结果:各浓度辛伐他汀均抑制人DPSCs增值,辛伐他汀浓度为1×10-5mol/L时,抑制作用最明显。适宜浓度辛伐他汀(1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L)促进人DPSCs向成骨细胞分化,其中,1×10-7mol/L的辛伐他汀促进ALP活性的作用最明显。结论:辛伐他汀抑制人DPSCs的增值,适宜浓度的辛伐他汀可有效促进人DPSCs的成骨分化。

内皮细胞及内皮素1在牙发生和骨形成中的作用研究

内皮细胞(Endothelialcell,ECs)位于血液与血管组织之间,它不仅能完成血液和组织液的代谢交换,并且能合成和分泌多种生物活性物质,如内皮素1(Endothelin-1,ET-1)和胰岛素样生长因子(Insulin-like Growth Factor,sIGFs)等。ET-1最早在主动脉血管内皮中提取,是一种由21个氨基酸残基组成的活性多肽,也是是一种内源性长效血管收缩调节因子,可影响骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)的增殖和分化。牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)与骨髓间充质干细胞有相似的细胞形态、免疫表型及形成矿化结节的能力,在体外诱导条件下可分化为牙体组织及骨组织。了解ECs及ET-1对DPSCs和BMSCs的作用机制对牙发生和骨形成具有重要作用。

成骨细胞与矿化液诱导牙髓干细胞向成骨细胞分化的对比研究

目的比较成骨细胞和矿化液对牙髓干细胞（dental pulp stem cells，DPSC）向成骨细胞分化的作用，选择理想的诱导方法。方法利用插入式小室将成骨细胞与DPSC共培养作为共培养组，矿化液培养DPSC作为矿化液组。在光学显微镜和透射电镜下观察DPSC形态学变化；应用茜素红染色法检测矿化结节；采用反转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-RCR）分别检测DPSC骨涎蛋白、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、I型胶原等骨源性基因表达情况。结果茜素红染色显示培养28d后共培养组DPSC矿化结节明显多于矿化液组。培养15d后共培养组骨涎蛋白和I型胶原基因阳性表达水平（分别为9．807±1．135和2．913±0．310）显著高于矿化液组（分别为6．478±0．781和1．703±0．184，P〈0．05）。结论成骨细胞分泌大量细胞因子或可溶性蛋白，对DPSC的诱导作用较矿化液明显。

牙髓干细胞在牙齿再生医学中的应用

干细胞（Stem Cells）是已分化细胞的来源,它可以在发育过程中再生组织,也可以在后天疾病或损伤时再生组织。近年来,关于干细胞的研究越来越多,人们已经认识到干细胞治疗在一定条件下可以提高患者的生活质量,这些患者有的患有阿尔茨海默病、有的患有心肌缺血、有的患有骨或牙齿丧失。