了哥王中西瑞香素的提取分离及抗肿瘤作用研究

研究西瑞香素(daphnoretin)的体外抗肿瘤作用。采用溶剂提取法、硅胶柱层析、重结晶法从中药了哥王中分离西瑞香素并用薄层色谱法和高效液相色谱法测定纯度。应用MTT法观察不同浓度的西瑞香素对体外培养的人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2的抑制作用。采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察细胞形态的变化并检测细胞内钙离子浓度。经紫外光谱、质谱和核磁共振光谱确定提取分离西瑞香素的结构,其纯度为99.75%。西瑞香素对体外培养的人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2均有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。其对上述三种肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50值分别为8·73、9.71和31.34μg/mL。激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测结果表明应用西瑞香素处理肿瘤细胞72h后,细胞内钙离子浓度显著升高(P<0.05)。西瑞香素体外对人肺腺癌细胞AGZY-83-a、人喉癌细胞Hep2和人肝癌细胞HepG2均有明显抑制作用,机制可能与细胞内钙超载有关。

复方中药喉咽清水蜜丸的研制及其体外溶出度的研究

目的研究喉咽清水蜜丸的制剂工艺及质量标准，并通过体外溶出度探讨自研样品处方和工艺的可行性。方法按照中药制剂方法研制水蜜丸，按照中国药典１９９５年版要求检测并测定溶出度，用二阶导数光谱法测橙皮甙含量来确定水蜜丸的溶出曲线。结果所制水蜜丸符合药典要求。结论喉咽清水蜜丸的处方和工艺是可行的。

苦参碱类生物碱的体外抑菌、抑病毒及诱生干扰素的实验研究

苦参碱类生物碱对G+球菌、G- 杆菌等 12种菌 (130株 )均有明显抑菌作用 ;对咽喉部常见病毒CB、Adv、RSV的抑病毒浓度最高达 1/40 96 0 g/ml,对流感、副流感病毒也有抑制作用 ;有诱生干扰素的作用 ,当试剂稀释为 4 - 2 、4 - 3时 ,诱生IFN效价为 10 2 4。

糖尿病大鼠冠状动脉超氧阴离子生成部位的研究

目的探讨糖尿病大鼠高血糖状态下冠状动脉超氧阴离子(O2-)生成部位。方法用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型后取冠状动脉和在高糖下培养大鼠冠状动脉24 h,免疫荧光组织化学染色及激光扫描共聚焦显微镜检测冠状动脉中O2-生成部位。结果糖尿病大鼠冠状动脉内皮组织、外膜组织和平滑肌组织O1-生成量均较对照组升高,二者比较差异有统计学意义(t内=24．719,P<0．01;t外=14．206,P<0．01;t平:11．784, P<0．01)。高糖培养24 h,大鼠冠状动脉内皮组织O2-生成量比对照组升高,二者比较差异有统计学意义(t内= 2．183,P<0．05);外膜组织和平滑肌组织O2-生成量与对照组比较,差异无统计学意义(t外=1.439,P>0．05;t平= 1．662,P>0．05)。结论糖尿病短期高血糖状态下,O2-只产生于内皮细胞,长期高血糖状态下,O2-由内皮细胞经跨细胞转移转运到平滑肌细胞。

清开灵注射液对大鼠CYP1A2和2D6的影响

目的:通过清开灵注射液的大鼠体内、外实验,观察清开灵注射液对大鼠CYP1A2亚型,CYP2D6亚型的影响。方法:通过HPLC法测定全血中咖啡因的代谢率,观测清开灵注射液对大鼠CYP1A2活性的影响;通过HPLC法测定大鼠肝微粒体重组系统非那西丁的代谢比率,确定清开灵注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2亚型的作用;测定大鼠肝微粒体重组系统右美沙芬的代谢比率,确定清开灵注射液对大鼠肝微粒体CYP2D6亚型的作用。结果:实验组中给予大鼠不同浓度的清开灵注射液(0.15,0.3,0.6 mL.kg-1),其咖啡因代谢率为(15.9±3.8)%,(14.5±1.8)%,(12.3±1.2)%,对照组为(16.8±5.9)%,各剂量组及对照组间均无显著性差异;肝微粒体体外重组系统中,实验组各浓度清开灵注射液对CYP2D6没有影响;高剂量组清开灵注射液对CYP1A2有抑制作用。结论:清开灵注射液对CYP1A2和CYP2D6的活性没有影响。

奥扎格雷钠对大鼠CYP2D6亚型酶的影响

目的通过奥扎格雷钠的大鼠体内、外实验,观察奥扎格雷钠对大鼠CYP2D6亚型酶的影响。方法对照组和奥扎格雷钠诱导组大鼠分别经口给予生理盐水和奥扎格雷钠1wk,HPLC法测定大鼠尿样及肝微粒体中CYP2D6的探针药物右美沙芬的代谢率,观察奥扎格雷钠对CYP2D6活性的影响。结果①大鼠给予奥扎格雷钠(37mg·kg-1),其尿样中右美沙芬的代谢率明显高于对照组(P<0·01);②奥扎格雷钠诱导组大鼠肝微粒体中加入右美沙芬(0·324mmol·L-1),其右美沙芬的代谢率明显高于对照组(P<0·01);③奥扎格雷钠与CYP2D6特异性抑制剂西米替丁可明显降低右美沙芬的代谢率(P<0·01),并且奥扎格雷钠组其右美沙芬的代谢率低于西米替丁组(P<0·05);④奥扎格雷钠IC50=26·5μmol·L-1,西咪替丁IC50=86·3μmol·L-1,奥扎格雷钠诱导组肝微粒体Km=0·67mmol·L-1,Vmax=2·13nmol·min-1·g-1protein;对照组肝微粒体Km=0·29mmol·L-1,Vmax=0·91nmol·min-1·g-1protein;⑤体内和体外相应实验数据具有很好的相关性(r=0·9811)。结论奥扎格雷钠可诱导CYP2D6酶的活性。

尼扎替丁对大鼠CYP1A2亚型的影响

目的通过尼扎替丁的大鼠体内、外实验,观察尼扎替丁对大鼠CYP1A2亚型的影响。方法通过HPLC法测定全血中咖啡因的代谢率,观测尼扎替丁对大鼠CYP1A2活性的影响;通过W estern b lot法测定尼扎替丁对大鼠肝微粒体CYP1A2蛋白表达的调控;通过HPLC法测定肝微粒体重组系统对乙酰氨基酚的含量,确定尼扎替丁对大鼠肝微粒体CYP1A2亚型的作用。结果实验组中给予大鼠不同浓度的尼扎替丁(14、27、54 mg.kg-1),其咖啡因代谢率为29.6%±12.5%、32.4%±13.4%、37.5%±15.0%,对照组为26.9%±11.9%,各剂量组及对照组间差异均无显著性(P>0.05);实验各剂量组与对照组的CYP1A2蛋白表达差异无显著性;肝微粒体体外重组系统中,实验组各浓度尼扎替丁对CYP1A2没有抑制作用,CYP1A2的活性>100%;对照组α-萘黄酮有明显的抑制作用,IC50=0.0306μmol.L-1。结论体内、外实验结果均表明尼扎替丁对大鼠CYP1A2没有抑制作用。

糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞体外培养方法的探讨

目的探讨糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞体外培养方法，建立糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞模型，为糖尿病性冠心病的研究奠定基础。方法建立糖尿病大鼠模型，用酶消化法体外培养冠状动脉血管平滑肌细胞。结果糖尿病大鼠造模成功后分离冠状动脉，用酶消化法培养糖尿病大鼠血管平滑肌细胞，24h更换培养液液，培养7～10d细胞重叠生长达多层，高低起伏呈“峰-谷”状。细胞α-actin免疫组织化学染色鉴定为平滑肌细胞。结论糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖速度快，培养条件要求严格，在形态学上与正常大鼠平滑肌细胞相同。

大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞体外培养方法的建立及鉴定

目的 建立分离大鼠肠系膜淋巴管的技术及其内皮细胞的培养方法并证实体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞具有合成一氧化氮及第Ⅷ因子相关抗原的能力。方法 利用手术显微镜及显微手术器械分离大鼠肠系膜淋巴管,采用植块培养法进行内皮细胞原代培养并传代培养。用免疫组织化学的方法鉴定第Ⅷ因子相关抗原及一氧化氮合酶在体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞中的表达。测定一氧化氮代谢产物的含量。结果 体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞呈梭形或多角形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列。第Ⅷ因子相关抗原的免疫过氧化氢酶染色反应阳性,阳性率 98%。一氧化氮合酶表达阳性率为83%,阳性反应产物在细胞核周围呈棕黄色。一氧化氮代谢产物含量(10 26±2 17)mol·L-1 (n=7 )。结论 本实验采用培养方法可行性强,简单可靠,保持了内皮细胞的结构和功能。并证实了体外培养的大鼠肠系膜淋巴管内皮细胞能表达一氧化氮合酶及第Ⅷ因子相关抗原。

糖尿病大鼠冠状小动脉超氧阴离子产生量的观察

目的探讨糖尿病大鼠高糖状态下冠状小动脉超氧阴离子(O2-)产生量,阐明高糖状态对O2-产生的影响。方法用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型,通过手术显微镜及显微手术器械分离大鼠冠状动脉,冷冻切片制备部分标本,用免疫荧光技术测定糖尿病及正常大鼠冠状动脉O2-产生量。结果糖尿病模型组大鼠冠状动脉O2-产生量与正常对照组大鼠及模型组预先加入自由基清除剂组相比明显增加;冷冻切片冠状动脉横切面荧光染色结果表明糖尿病大鼠高糖状态下血管平滑肌与内皮O2-产生均增多。结论高糖能刺激冠状小动脉产生过量的O2-,参与糖尿病状态下的氧化应激,可能与糖尿病微血管并发症密切联系。

甲硝唑琥珀酸酯在兔体内的药动学

目的 研究甲硝唑前体药物甲硝唑琥珀酸酯在兔体内的药动学特性。方法 用HPLC测定甲硝唑琥珀酸酯在生物样品 中的浓度。结果 血浆中内源性杂质不干扰甲硝唑的测定,血浆中回收率为98.63％,日内和日间RSD分别为2.6％和3.7％, 最低检出浓度为0.1μg·mL-1。结论 甲硝唑琥珀酸酯在兔体内能迅速水解,且不改变甲硝唑原有的药动学特性。