硫化氢吸入对心搏骤停复苏大鼠脑蛋白激酶C同工酶的影响

目的探讨吸入硫化氢对心搏骤停复苏大鼠脑蛋白激酶C(PKC)同工酶的影响。方法取清洁级健康SD雄性大鼠60只,采用数字表法,将其随机分为假手术组(10只)、对照组(25只)和硫化氢组(25只)。对照组和硫化氢组采用窒息性心搏骤停后心肺复苏模型,硫化氢组于自主循环恢复后立即吸入含有0.08‰硫化氢的30%氧气1 h。各组大鼠于假手术或自主循环恢复后24 h时,应用神经功能缺损评分(NDS)评价神经功能;于24 h监测PKC同工酶α、βⅠ、βⅡ、δ及ε的活性水平;于7 d计算存活率、计数海马CA1区存活神经细胞。结果 (1)假手术组大鼠全部存活,对照组和硫化氢组存活率分别为45.0%(9/20)和80.0%(16/20),与对照组相比,硫化氢组大鼠存活率明显增加,组间差异有统计学意义(χ2=8.087,P=0.018)。(2)自主循环恢复(ROSC)24 h,与假手术组相比,对照组和硫化氢组NDS评分均明显降低,组间中位数两两比较,差异均有统计学意义[46(43,52)、60(55,68)分比80(80,80),均P<0.05];与对照组比较,硫化氢组NDS评分升高,组间差异有统计学意义(P<0.05)。(3)ROSC后24 h,与假手术组比较,对照组PKC-α、PKC-βⅠ、PKC-βⅡ和PKC-δ活性水平明显升高,PKC-ε活性水平受到抑制,组间比较差异均有统计学意义[(1.63±0.14)比(1.00±0.02)、(2.00±0.08)比(1.00±0.04)、(1.51±0.10)比(1.00±0.01)、(2.02±0.12)比(1.00±0.02);均P<0.05];硫化氢组PKC-α、PKC-βⅠ、PKC-βⅡ、PKC-δ和PKC-ε活性水平的差异无统计学意义(均P>0.05);与对照组比较,硫化氢组PKC-α、PKC-βⅠ、PKC-βⅡ和PKC-δ活性水平[分别为(0.94±0.06)、(1.26±0.04)、(0.83±0.02)、(1.04±0.06)]明显下降,PKC-ε水平明显升高[(1.13±0.07)比(0.73±0.04)],组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。(4)ROSC后7 d,假手术组、对照组和硫化氢组海马CA1区存活神经细胞计数分别为(53±3)、(23±2)和(34±1)个,与假手术组相比,对照组和硫化氢组存活神经细胞计数均明显降低(均P<0.01);与对照组比较,硫化氢组存活神经细胞计数明显升高(P<0.01)。结论心搏骤停/心肺复苏后,早期吸入硫化氢可抑制PKC-α、PKC-βⅠ、PKC-βⅡ及PKC-δ激活,促进PKC-ε激活,改善大鼠神经功能和促进神经细胞存活。

吸入外源性硫化氢对心跳骤停复苏大鼠脑组织炎症反应及生存率的影响

目的 探讨外源性硫化氢（H2S）对心跳骤停复苏大鼠脑组织炎症反应及生存率的影响。方法 健康雄性SD大鼠90只,体重260-280g。按随机原则分为三组：对照组（Sham组,n=20）：吸入麻醉药物诱导,气管插管,动静脉置管,但不进行心跳骤停及复苏操作。其余大鼠经气管插管后进行窒息性心跳骤停并复苏,自主循环恢复（ROSC）后随机分为两组：心跳骤停复苏组（CA组,n=35）、H2S组（n=35）。H2S组大鼠复苏恢复自主循环（ROSC）后立即吸入80ppm H2S 60min。每组取15只大鼠,于ROSC后（sham组麻醉后）3、24和72h时断头取脑组织,测定脑组织中白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及髓过氧化物酶（MPO）的含量。采用胶带移除实验评估大鼠ROSC后第14d的神经功能。记录ROSC后14d内3组大鼠的存活数量,随后断头取脑,计数海马CA1区存活神经元个数。结果 ROSC后3h时H2S组IL-10表达量明显高于Sham和CA组（P〈0.05）;CA和H2S组在ROSC后24h时脑组织IL-1β表达量,ROSC后3、24h时脑组织TNF-α表达量明显高于Sham组,且CA组明显高于H2S组（P〈0.05）;ROSC后72h时CA组MPO活性明显高于Sham组和H2S组（P〈0.05）。CA组及H2S组存活神经元数量明显少于Sham组,且CA组明显少于H2S组（P〈0.05）。ROSC后14dSham和H2S组存活率明显高于CA组（P〈0.05）。结论 大鼠心跳骤停复苏后早期吸入外源性80ppm H2S可提高心肺复苏后14d生存率,其机制可能与抑制脑组织炎症反应,改善海马CA1区神经元存活有关。

吸入外源性硫化氢对大鼠脑缺血-再灌注后脑水肿的影响及机制

目的：评价吸入外源性硫化氢对大鼠脑缺血-再灌注后脑水肿的作用,并探讨其机制。方法：健康雄性SD大鼠72只,体质量220-250 g,采用随机数字表法,将其分为6组（n=12）：假手术组（Sham）、脑缺血-再灌组（I/R）、硫化氢40 ppm组（H2S（40））、硫化氢80 ppm组（H2S（80））、脑室内注射PBS组（IC（PBS））和脑室内注射磷酸激酶C（PKC）抑制剂组（IC（PKCi））。H2S（40）和H2S（80）组在再灌注开始时分别吸入40和80 ppm硫化氢3 h。IC（PBS）和IC（PKCi）组预先经脑室内注射5μL的PBS或PKC抑制剂Go6983,再灌注时吸入40 ppm硫化氢3 h。再灌注24 h进行神经功能学评分,脑水肿程度和梗死面积测定,并采用Western法测定水通道蛋白4（AOP4）的表达。结果：与Sham组相比,I/R组Garcia评分明显降低,剔除胶带所需时间明显延长：脑肿胀和梗死面积明显增加,AOP4蛋白表达上调（P〈0.05）。与I/R组相比,吸入硫化氢组显著改善神经功能评分,减轻脑肿胀和梗死,下调AOP4的表达（P〈0.05）。IC（PKCi）可减弱硫化氢对脑的保护作用。结论：吸入40或80 ppm的硫化氢减轻大鼠脑缺血-再灌注引起的神经功能障碍,减少梗死面积,减轻脑水肿,其机制可能与硫化氢通过调节PKC下调AQP4的表达有关。