青蒿琥酯上调血红素氧合酶-1对脓毒症小鼠急性肺损伤的作用研究

目的 探讨青蒿琥酯（artesunate,AS）能否上调血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）对脓毒症小鼠急性肺损伤（ALI）起到保护作用.方法 本实验于哈尔滨医科大学附属第一医院外科中心实验室完成.60只雄性昆明小白鼠,随机（随机数字法）分为假手术组（Sham组,n=15）、模型组（CLP组,n=15）、青蒿琥酯干预组（AS＋CLP组,n=15）和HO-1抑制剂组（AS＋ ZnPP＋CLP组,n=15）.采用改良盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型,青蒿琥酯干预组,造模前2h经腹腔注射青蒿琥酯（15 mg/kg）,HO-1抑制剂ZnPP（40μmol/kg）则在给予青蒿琥酯1h后经腹腔注射,其余各组小鼠给予等体积生理盐水.于术后24h处死小鼠,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清炎症介质（TNF-α、IL-6）变化情况.通过测定肺脏湿/干（W/D）质量比检测肺水肿情况,采用HE染色观察肺组织病理损伤情况.采用蛋白印迹以及免疫组化法检测肺组织HO-1的表达情况,并且通过蛋白印迹法检测HO-1的上游调节转录因子核因子E2相关因子2（Nrf-2）的表达情况.组间多重比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q（Student-Newman-Keuls）法,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 与Sham组比较,CLP组血清炎症介质TNF-α （pg/mL）（54.37±15.59 vs.627.45±117.03,P＜0.05）、IL-6 （pg/mL） （81.53±26.89vs.898.52±222.78,P＜0.05）释放增加,蛋白渗出明显,肺水肿（肺脏W/D比值：4.27±0.22vs.6.78±0.73,P＜0.05）和肺脏病理损伤（肺损伤评分：2.20±0.2 vs.13.25±2.67,P＜0.05）均加重.肺组织中HO-1、Nrf-2蛋白表达含量增加（P＜0.05）.给予AS干预后,与CLP组比较,血清炎症介质TNF-α（pg/mL）（627.45±117.03 vs.307.88±72.33,P＜0.05）、IL-6 （pg/mL）（898.52±222.78 vs.413.47±115.14,P＜0.05）释放减少,蛋白渗出减少,肺水肿减轻（肺脏W/D比值：6.78±0.73vs.5.05±0.61,P＜0.05）,肺脏病理损伤减轻（肺损伤评分：13.25±2.67vs.4.95±1.46,P＜0.05）.肺组织HO-1、Nrf-2蛋白表达含量明显增加（P＜0.05）,而AS对于脓毒症小鼠肺组织的上述保护作用被HO-1抑制剂ZnPP所逆转,HO-1抑制剂组肺脏损伤情况与CLP组相当（肺损伤评分：12.15±2.95vs.13.25±2.67,P＞0.05;肺W/D比值：6.78±0.73 vs.6.29±0.82,P＞0.05）.结论 AS对脓毒症诱发的ALI小鼠具有保护作用,其作用通路可能与上调HO-1减轻肺组织炎症反应,继而减轻肺损伤有关.