6His-hVEGF165融合基因真核表达载体的构建和鉴定

目的:本实验拟构建hVEGF165基因的真核表达载体,为其应用于治疗大鼠缺血皮瓣的研究奠定基础。方法:设计引物P1和P2,在每一个引物的两端分别添加BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点。从人外周血中提取总RNA,用RT-PCR方法得到hVEGF165的cDNA。随后再将得到的cDNA连入中间载体pMD19-T,得到pMD19-T-hVEGF165,双酶切鉴定并测定序列。将hVEGF165的cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA6/HisA中,构建hVEGF165真核表达载体pcDNA6-hVEGF165。结果:对pMD19-T-hVEGF165的测序结果表明,本研究成功地从人外周血中扩增到hVEGF165的cDNA。将hVEGF165定向克隆入真核表达载体pcDNA6/HisA,经双酶切及PCR鉴定,将阳性克隆测序,经测序证实序列正确。结论:本研究成功地构建了VEGF165真核表达载体pcDNA6-hVEGF165,并且目的基因上游融合有His标签。