15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv1.2、Kv3.4表达的影响

目的从细胞分子水平研究电压门控型钾通道亚型Kv1.2、Kv3.4在15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetretraenoic acid,15-KETE)致大鼠肺动脉收缩过程中的作用。方法通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth cells,PASMCs),使用RT-PCR和Western blot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上Kv1.2、Kv3.4通道表达的影响。结果 (1)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv1.2通道mRNA及蛋白质的表达;(2)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv3.4通道mRNA及蛋白质的表达。结论 Kv1.2、Kv3.4通道参与由15-KETE引起的缺氧肺动脉收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)。

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv1.5、Kv2.1表达的影响

目的从细胞分子水平研究电压门控型钾通道亚型Kv1.5、Kv2.1在15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetretraenoic acid,15-KETE)致大鼠肺动脉收缩过程中的作用。方法通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth cells,PASMCs),使用RT-PCR和Western blot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上Kv1.5、Kv2.1通道表达的影响。结果 (1)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv1.5通道mRNA及蛋白质的表达;(2)15-KETE下调大鼠PASMCs膜上Kv2.1通道mRNA及蛋白质的表达。结论 Kv1.5、Kv2.1通道参与由15-KETE引起的缺氧肺动脉收缩(hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)。

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

目的探讨15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞内Ca2+的作用及其来源。方法以酶法(胶原酶Ⅰ型和弹性酶)分离培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞,将细胞稀释所需密度(2×105个/mL),加样于6孔板中的盖玻片上,放入37℃孵箱中培养12 h,细胞贴壁后,取出6孔板中的盖玻片,放入特制的小槽内,D-Hanks液冲洗细胞3次,加入1×10-5mol/L的Flou-3/AM,置37℃孵箱中避光孵育约30 min,用D-Hanks液洗去细胞外残留染料,应用激光扫描共聚焦显微镜技术,测定了15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞游离钙离子浓度的影响。结果 1)15-KETE(1×10-8—1×10-6)mol/L可依赖性引起肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)增加;2)1×10-6mol/L维拉帕米(L-型钙离子通道阻断剂)和无钙离子细胞外液显著阻抑了1×10-6mol/L 15-KETE引起肺动脉平滑肌[Ca2+]i增加。结论 15-KETE可引起大鼠肺动脉平滑肌[Ca2+]i增加,并且此钙来源于细胞外液钙离子。