无溶剂体系脂肪酶催化制阿魏酸双油酸甘油酯

在无溶剂体系中以分散在硅藻土上的褶皱假丝酵母脂肪酶为催化剂,以阿魏酸乙酯与油酸甘油酯为原料,一步合成阿魏酸双油酸甘油酯。通过质谱和红外光谱对薄层层析分离纯化后的产物结构进行了表征。定量分析表明,当反应温度为50℃,n(阿魏酸乙酯)/n(油酸甘油酯)=1时,阿魏酸双油酸甘油酯的质量占生成物总质量分数较高。在1 mmoL阿魏酸乙酯,1 mmoL油酸甘油酯和70 mg脂肪酶组成的无溶剂反应体系中,50℃空气浴振荡120 h,总产率可达63.32%,其中阿魏酸双油酸甘油酯质量占生成物总质量的63.37%。

利用杀配子染色体2C诱导中国春-长穗偃麦草1E二体附加系染色体畸变的研究

偃麦草属具有许多优良的遗传性状,利用杀配子染色体诱导小麦-偃麦草的染色体易位,是创建小麦异源易位系、丰富小麦遗传资源的一个有效途径。杀配子染色体2C在单体附加时,可高效率地诱导染色体畸变,得到易位、缺失等畸变类型。本研究利用含有杀配子染色体的中国春-柱穗山羊草2C(Ae.Cylindrical2n=28CCDD)二体附加系与中国春-长穗偃麦草(E.elongate2n=14EE)1E二体附加系杂交。观察F1花粉母细胞减数分裂情况,发现存在到量的染色体异常行为。单价体数超过理论值,棒状二价体数明显增加,并出现一定频率的三价体和四价体,及大量的染色体断片、染色体桥和落后染色体、微核,并伴随发生多极分裂现象。经C-分带与荧光原位分子杂交鉴定83株杂交F2,共检测到5株易位、6株缺失。易位频率为6.02%,缺失率为7.22%,染色体畸变的总频率为13.24%。并对杀配子染色体的诱变机制及引起杂交后代结实率降低的原因进行了讨论。

大豆异黄酮抑制胃癌细胞生长作用的研究

本实验以人胃癌SGC-7901细胞为体外实验模型,通过MTT实验,分裂指数法和集落形成实验,筛选具有较强抑制胃癌细胞生长作用的大豆异黄酮单体成分。结果表明游离形式的金雀异黄素的抑癌效果最为显著,其他形式的金雀异黄素苷和黄豆苷体外抑制细胞生长作用不明显。金雀异黄素代谢前体物鸡豆苷素亦有较显著的抑制效果,但作用迟缓。苷元形式的大豆异黄酮抑制肿瘤细胞生长作用明显强于苷类形式的大豆异黄酮,三羟异黄酮金雀异黄素是大豆异黄酮发挥生物学作用的最有效单体成分。

菜豆几丁质酶基因的克隆、序列分析及其表达

根据GenBank中收录的菜豆几丁质酶基因mRNA序列设计一对引物,以菜豆品种五常油豆总DNA为模板,通过PCR扩增获得一个约1.1kb的DNA片段Bchi,将其克隆入pUC18载体。测序和序列分析结果表明,该序列全长1088bp,含有一个981bp的完整开放读码框,无内含子,编码327个氨基酸,编码产物在结构上具有Class Ia几丁质酶的结构特征:N-端具有一个26个氨基酸的信号肽,其后是富含8个半胱氨酸、长41个氨基酸的几丁质结合区和由249个氨基酸组成的高度保守的催化区,C-端为由11个氨基酸组成的液泡定位多肽。序列与结构上的同源性分析表明Bchi基因是菜豆Class Ia几丁质酶基因。此序列已在GenBank中注册,登录号为AY357300。以pQE-30为原核表达载体,构建成pQE-Bchi重组表达载体,转化表达受体菌E.coliM15,经IPTG诱导后表达出一个约35kD的蛋白,与推测的Bchi基因编码产物的大小一致,表明Bchi基因在大肠杆菌中能够表达,是一个具有表达功能的基因。

Ri质粒介导的几丁质酶基因转化小麦的研究

采用L9(34)的正交试验,以带有pMLH7133-Chi质粒的发根农杆菌为介导,对栽培品种春小麦东农7742、龙麦9814和H ite的幼胚愈伤组织进行了遗传转化研究。结果表明:基因型为东农7742、菌液浓度OD600=0.8、共培养时间2 d、乙酰丁香酮(As)浓度为100μm是最佳的试验组合;各影响因素的主次顺序是:基因型>乙酰丁香酮的浓度>菌液浓度>共培养时间。共获得138株Hyg抗性植株,经PCR及PCR-Southern检测初步证明,外源几丁质酶基因已整合到其中5株的基因组中,又对3株阳性植株进行了RT-PCR扩增和几丁质酶活力测定,证明外源几丁质酶基因已在小麦基因组中稳定表达。

FSCLZLY-B型腹水超滤治疗仪的研制与临床应用研究

目的:研制腹水超滤治疗仪并进行临床治疗顽固性腹水应用研究。方法:采用腹腔对腹腔腹水回输方法,研制出FSCLZLY-B型腹水超滤治疗仪,对647例顽固性腹水患者进行了1892例次腹水超滤浓缩回输腹腔治疗观察。结果:随访5年以上、资料完整的1892例次治疗结果为:显著604例次,占31.9%;有效746例次,占39.4%;无效542例次,占28.64%;总有效率为71.35%。结论:FSCLZLY-B型腹水超滤治疗仪使用效果满意,具有操作简便、适应证广,操作简便、效率高、无需输蛋白,治疗成本低、能迅速减轻患者痛苦等优点。

金雀异黄素诱导人乳腺癌细胞凋亡作用机制研究

目的探讨金雀异黄素对体外培养的人乳腺癌MCF7细胞凋亡的影响及作用机制。方法采用MMT法、凋亡细胞的荧光显微镜、电镜观察和流式细胞仪的检测,观察了不同剂量的金雀异黄素诱导细胞凋亡。同时采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bax和癌基因erbB2蛋白的表达。结果通过荧光显微镜和电镜技术观察到凋亡的MCF7细胞。流式细胞仪也检测到了金雀异黄素诱导MCF7细胞产生凋亡,并随着金雀异黄素浓度的增加,细胞凋亡率显著增加。蛋白水平检测表明金雀异黄素促进MCF7细胞Bax表达升高,抑制erbB2表达。结论金雀异黄素可诱导MCF7细胞凋亡,并主要是通过调节Bax和erbB2蛋白表达实现的。

观察长穗偃麦草(Thinopyron elongatum)体细胞染色体制片的好方法

观察二倍体长穗偃麦草的染色体一直是个难题,以二倍体长穗偃麦草种子（Thinopyron elongatum=E.elongata,2n=14EE）为实验材料,对实验方法进行了改进,发芽前浸种处理24h,将发芽时间和促芽生长时间分别延长至90～96h,并对第一轮未萌发的种子进行二次萌发,使种子萌发率达到97%以上。取上述萌发处理后的种子进行根尖染色体制片,结果表明染色体中期分裂相多,染色体分散良好,形态特征清晰,显然,这是一种开展长穗偃麦草细胞学研究的有效方法。

Rb基因在染料木黄酮抑制人乳腺癌细胞生长中的作用

目的:研究Rb基因在染料木黄酮(genistein,Gen)抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖中的作用。方法:采用MTT实验和集落形成实验观察Gen对人乳腺癌细胞增殖影响,Westernblotting检测Rb基因、细胞周期素cyclinE蛋白表达情况,RT-PCR检测Rb基因mRNA的表达。结果:Gen显著抑制MCF-7细胞生长,促进细胞Rb基因在蛋白及mRNA水平的表达,抑制cyclinE蛋白的表达。结论:Gen抑制人乳腺癌细胞增殖,其机制可能通过上调Rb基因表达,下调cyclinE蛋白表达。

非水相脂肪酶催化阿魏酸双甘酯的合成

在有机相和无溶剂反应体系中进行不同来源的脂肪酶催化阿魏酸与油酸甘油酯转酯反应的比较研究。通过筛选发现固定化脂肪酶Novozym435因其独特的催化专一性减少了副产物,提高了目标产物的产率。同时研究了不同反应介质对转酯反应的影响,结果表明在无溶剂反应体系中,Novozym435脂肪酶催化阿魏酸乙酯与油酸甘油酯的转酯反应目标产物得率较高,与甲苯作为反应介质的体系相比酶的操作稳定性得到了明显提高。

金雀异黄素对乳腺癌细胞iNOS表达影响

目的 研究金雀异黄素 (Genistein ,Gen)对人乳腺癌细胞MCF - 7增殖和诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达的影响以及两者之间的关系。方法 采用MTT试验和3 H -TdR掺入法观察Gen抑制乳腺癌细胞的生长 ,免疫组化及RT -PCR方法检测iNOS的表达。结果 Gen显著抑制MCF - 7细胞的增殖 ,细胞上清液中NO水平有升高的趋势 ,并显著增加iNOS的蛋白表达 ,对iNOSmRNA的表达无显著影响。结论 Gen抑制乳腺癌细胞增殖的机制之一可能与其上调iNOS基因表达有关。

无蒸煮无糖化一步发酵法生产燃料酒精

论述了无蒸煮无糖化一步发酵法生产燃料酒精的意义、研究概况、技术特点、基本原理、生产工艺及建厂的基本技术参数。利用该技术已建成年产 5

与逆境胁迫相关的rd29A启动子和CBF2基因的克隆及其表达载体构建

以拟南芥为材料,通过PCR扩增成功地克隆了逆境诱导型启动子rd29A和CBF2转录因子。序列分析表明,951bp的rd29A序列包含完整的DRE、ABRE等4种保守顺式作用元件;651 bp的CBF2基因包含了完整的AP2 DNA结合域以及特异的氨基酸序列PKKPA-GRKKFRETRHP和FADSAWR。同时,构建了由rd29A启动子调控的CBF2基因的植物表达载体。

脂肪酶在功能性亲水化合物改性中的应用现状

概述了近年来脂肪酶在功能性亲水化合物(包括亲水性有机酸、糖醇、糖、维生素、类黄酮等)改性中的研究进展,并对此类化合物及其衍生物的功能性进行了简要介绍。

NF-κB和Caspase-3在金雀异黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用研究

采用MTT法、形态学观察和琼脂糖凝胶电泳法检测了金雀异黄素(genistein,Gen)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的生长和凋亡诱导作用,并采用免疫组化法和WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞NF-κB、Caspase-3蛋白的表达情况。结果显示:Gen可抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡,抑制NF-κB蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达。结果提示:Gen抑制NF-κB蛋白表达、增加Caspase-3蛋白表达,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一。