植物丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶研究进展

在植物、动物、微生物的细胞内普遍存在丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶,在高等植物中此酶是过氧化物酶体中的标志性酶,在植物的整个生命活动中起着重要的作用。对植物中丝氨酸:乙醛酸氨基转移酶的研究进展进行了综述。

解脂酵母中POX3基因的敲除研究

对耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)中编码与γ-癸内酯合成相关的乙酰辅酶A氧化酶基因(POX1-POX5)中的POX3基因用Cre/loxP同源重组系统进行敲除。设计含有60个核苷酸与POX3基因的ORF两侧序列同源的长引物,以pUG6为模板构建带有loxP-KanMX-loxP系统的敲除组件,之后转化耶氏酵母,通过PCR确定阳性克隆子。将质粒pSH65转入阳性克隆子,半乳糖诱导表达Cre酶以切除KanMX基因。最后在YPD培养基中传代丢失pSH65质粒,获得POX3缺陷型菌株。由于在解脂酵母中表达生产γ-癸内酯直接牵扯到若干个需要抑制的基因,单独缺失其中的一个基因理论上可能实现不了产量的极大值。本研究为进一步构建组合敲除准备了条件。

耶氏酵母菌POX5基因的敲除

对于耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)中编码与γ–癸内酯合成相关的乙酰辅酶A氧化酶基因(POX1-POX5)中的POX5基因用Cre/loxP同源重组系统进行敲除。设计含有60个核苷酸与POX5基因的ORF两侧序列同源的长引物,以pUG6为模板构建带有Cre/loxP系统的敲除组件,之后转化耶氏酵母YL(Yarrowia lipolytica),通过PCR确定阳性克隆子。将质粒pSH65转入阳性克隆子,半乳糖诱导表达Cre酶以切除KanMX基因并经过PCR确认。最后在YPD培养基中连续传代培养丢失pSH65质粒,成功获得POX5缺陷型菌株。