Grb10基因在小鼠胚期特异性表达分析

生长因子受体结合蛋白10(Growth factor receptor-bound protein 10,Grb10)是一个存在于小鼠11号染色体和人7号染色体的母本表达的印记基因。文章利用原位杂交技术和定量RT-PCR方法对不同发育阶段的小鼠胚胎Grb10基因进行时空表达谱的分析,以确定该基因在胚胎发育中其表达与组织发育的关系。定量RT-PCR数据结果表明,Grb10在E8.5-E13.5(Embryonic days8.5-13.5),表达水平逐渐增高,在E13.5达到高峰,后期表达量回落。在胚胎发育的中后期脑、心、肺组织的表达水平呈递减趋势。肝脏组织中Grb10表达水平较为恒定,在E18.5出现高峰。原位杂交数据验证了定量RT-PCR的结果,并且说明了Grb10在其他如骨、肾和肌肉等组织器官的高表达水平。研究结果表明Grb10基因是小鼠胚期发育的一个重要的基因。

与小鼠胚胎发育相关新基因0610038D11Rik的研究

目的:初步分析与小鼠胚胎发育相关的新基因0610038D11Rik表达模式及生物学功能。方法:采用RT-PCR,全胚胎原位杂交和Northern Blotting技术对该基因进行表达谱分析;细胞免疫染色对其进行细胞结构定位。结果:全胚胎原位杂交结果显示0610038D11Rik在胚胎E9.5的端脑、间脑、菱脑和听泡处有较强的信号。随着神经管逐渐关闭,胚胎E10.5在背部神经嵴,神经管区也出现表达信号。E11.5时除了在上述部位表达外,心脏部位也检测到较弱的信号。RT-PCR和Northern Blot实验发现该基因在小鼠胚胎发育直至出生后均有持续性分布,并且在发育中后期的脑、心脏、肺、肾、肝脏,肌肉和舌等多种重要脏器广泛表达。细胞定位表明其主要集中在核内和细胞质中。结论:0610038D11Rik基因在小鼠的脑神经系统和多器官表达,提示该新基因可能在这些组织的发育过程中发挥重要的作用。

2810025M15Rik基因在小鼠胚胎期的表达及调控

对与小鼠胚胎发育相关的新基因2810025M15Rik表达模式及调控方式做了初步分析.采用实时定量RT-PCR(Real-time quantitative RT-PCR)和原位杂交对该基因进行表达谱分析;亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite Sequencing)对启动子区CpG岛的甲基化状态的分析探究其表达调控方式.Real-time quantitative RT-PCR结果显示这一基因在小鼠的胚胎期有着广泛持续的表达,并在E12.5的小鼠胚胎中处于一个相对较高的转录水平;E15.5时,这一基因在肺中表达最强,脑及肾脏中次之,肝脏最弱;E18.5这一阶段,基因的表达水平发生了显著的变化,在各个主要脏器中均呈现降低的趋势,这一时期在肺中表达最强,肝脏中的转录水平最低.原位杂交结果显示E10.5的小鼠胚胎中这一基因的表达信号集中在端脑、中脑、后脑、腮弓、前肢芽以及尾芽,E11.5时在菱脑和后肢芽也出现了表达信号,E13.5的切片原位杂交中这一基因的表达信号在前脑、中脑、第三脑室的大脑皮层以及肝脏极为显著.对基因启动子区CpG岛的甲基化状况分析后发现待测位点呈现部分甲基化或非甲基化状态2810025M15Rik基因在小鼠胚胎发育期有着持续广泛的表达,可能对胚胎的正常发育起着重要的调控作用.

对与小鼠胚胎发育相关的印记基因Mcts2的研究

目的:对与小鼠胚胎发育相关的印记基因Mcts2表达模式及生物学功能做初步的分析。方法:采用切片原位杂交,全胚胎原位杂交,Northern blot和real-time PCR对该基因进行了表达谱的分析。结果:切片原位杂交结果显示Mcts2基因在E13.5和E15.5胚胎中的脑、舌、心脏、肺脏、肝脏、肾脏等重要脏器中都有普遍表达。全胚胎原位杂交结果显示Mcts2基因在E10.5胚胎中的前脑、前肢、尾芽中出现较强的信号,其他部位信号较弱。Northern和Real-time PCR实验分析了Mcts2基因在E12.5,E15.5,E18.5胚胎和新生小鼠的脑、心脏、肺脏、肝脏和肾脏中的表达谱,发现Mcts2基因在这几个主要发育时期都有普遍表达,在E15.5胚胎中表达信号最为强烈。结论:Mcts2基因在小鼠胚胎的发育的各主要时期的重要脏器中都有普遍的表达,提示该基因在小鼠胚胎发育过程中起到了重要的作用。