牛冠状病毒S基因的序列分析及原核表达

为了解牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的S基因变异情况并建立ELISA检测方法,本研究对采自不同牛场的新生犊牛腹泻(CD)和成年牛冬痢(WD)腹泻样本提取总RNA,反转录合成cDNA,利用PCR扩增S全基因和S1基因。将S1基因目的片段连接表达载体pET-32a(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经PCR、双酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达。结果显示,CD与WD分离株S基因核苷酸为98.4%,CD和WD分离株与参考毒株BCoV-ENT株核苷酸同源性最高,分别为98.4%和98.5%,CD分离株与参考毒株SUN5株的同源性最低,为97.5%,WD分离株与FRA/EPI/Caen/2003/13同源性最低,为97.3%。通过比对可知,分离株与已知毒株之间存在较大差异,为疫苗候选毒株筛选提供依据。本试验同时构建了pET-32a-S1表达载体,在0.2mmol/L IPTG诱导5h时,重组菌能在大肠杆菌BL21感受态细胞中产生大量的S1融合蛋白,获得约58ku表达产物。本试验成功表达了S1蛋白,并对BCoV进行了核苷酸进化分析,为疫苗免疫效果评价方法的建立奠定了基础。

一起奶牛感染性流产的诊断及分析

为了对引起黑龙江省某奶牛场奶牛流产的病原进行诊断,采用病毒检测、细菌分离、PCR扩增等对2头流产胎儿进行检测,无菌采集流产胎儿的内脏器官和脑组织进行病原学鉴定。结果表明：牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和新孢子虫为阳性,其他能够引起奶牛流产的细菌、病毒和寄生虫检测结果均为阴性。通过流行情况、临床症状及实验室对病原的检测和分离,说明该牛场本次流产是由IBRV和新孢子虫混合感染引起的。