转化生长因子β诱导的基因抑制恶性间皮瘤细胞增殖的体外研究

目的研究转化生长因子β诱导的基因(transforming growth factor-βinduced gene,TGFBI)在体外是否能抑制恶性间皮瘤细胞NCI-H28的增殖。方法将外源性TGFBI稳定性转染到恶性间皮瘤细胞NCI-H28中,绘制生长曲线图,测定其细胞增殖、接种效率和软琼脂克隆形成,并进行细胞周期的分析。结果外源性TGFBI在恶性间皮瘤细胞NCI-H28中能够稳定地高表达;当外源性的TGFBI转入到肿瘤细胞NCI-H28后,TGFBI高表达的细胞倍增时间增加了4.38倍;与转染空载体的肿瘤细胞相比:NCI-H28的相对接种效率降低了69.68%,外源性TGFBI表达的T28细胞形成了较小的软琼脂克隆;TGFBI可以使肿瘤细胞阻滞在G1期,并延缓肿瘤细胞进入S期的时间。结论 TGFBI可以抑制恶性间皮瘤细胞的体外增殖。

α粒子照射诱发细胞基因突变的旁效应及机理研究

对α粒子照射诱发人类11号染色体(Hchr11)基因突变的旁效应及其可能的机理进行研究。用包含单条Hchr11的人?中国仓鼠卵巢细胞杂交细胞系(AL)为靶细胞,经CD59表面抗原抗体在补体存在下筛选突变细胞克隆,测定Hchr11基因突变率;;在α粒子照射源与受照射细胞间插入网格,定比例照射细胞,观察α粒子照射的细胞对周围未受照射细胞基因突变的影响,即旁效应;;通过观察自由基清除剂二甲基亚砜(DMSO)和细胞间通讯阻断剂高丙体六六六(Lindane)对α粒子照射诱发Hchr11基因突变旁效应的抑制作用探讨其可能的机理。单纯α子照射细胞诱发的基因突变率与照射剂量存在明确的剂量效应关系;;用α粒子加网照射的实验模型,仅15%的细胞受到照射时,群体细胞的基因突变率明显高于受照射细胞的预期基因突变率,表明未受照射的细胞中也发生了基因突变;;DMSO能显著减少α粒子照射细胞诱发的基因突变,但对其诱发的基因突变旁效应无明显抑制作用;;与此相反,Lindane对单纯α粒子照射细胞诱发的基因突变无明显影响,但能显著降低α粒子照射细胞诱发的基因突变旁效应。α粒子照射细胞诱发的基因突变存在旁效应;;细胞间通讯在α粒子照射诱发细胞基因突变旁效应中起重要作用。

外源性TGFBI抑制乳腺癌细胞生长的体内外实验

目的研究转化生长因子β诱导基因(transforming growth factor-βinduced gene,TGFBI)是否能抑制人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)的体内外增生。方法将外源性TGFBI稳定转染到人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)中,测定细胞增殖率、细胞周期、软琼脂克隆形成率及P21、P53蛋白表达变化,检测乳腺癌细胞的致瘤性。结果外源性TGFBI在人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)中能够稳定地高表达;外源性TGFBI可以明显地抑制乳腺癌细胞因血清生长因子刺激的增生;与转染空质粒的对照组细胞V23101比较,外源性TGFBI相对软琼脂克隆形成数减少了90.89%;TGFBI可以使人乳腺癌细胞阻滞在G1期,延缓其进入S期的时间。外源性TGFBI可以延长裸鼠肿瘤发生的潜伏期,并降低肿瘤发生率。结论 TGFBI能够抑制人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)的体内外增生。

电离辐射后不同杂合基因在肿瘤发生中的作用及分子机理

目的检验基因杂合导致的染色单体功能不全在肿瘤发生中的作用。方法将ATM杂合鼠与BRCA1杂合鼠杂交获得四种基因型的同胎小鼠或胚胎成纤维细胞(野生型、ATM单杂合型、BRCA1单杂合型和ATM/BRCA1双杂合型),经γ-射线照射后,通过形态特征识别转化细胞克隆、流式细胞法测定胸腺细胞亚群分布和成纤维细胞周期变化、细胞松弛素B阻断法分析微核形成、免疫荧光染色法统计γH2AX foci数。结果相同剂量的射线照射后,四种基因型细胞反应不同;野生型细胞转化率最低、凋亡水平最高。相反,ATM/BRCA1双杂合型细胞转化率最高、凋亡水平最低;两种单杂合型细胞的细胞转化率和凋亡水平居中。四种细胞的微核诱导都与剂量呈线性相关,但线性拟合得到的直线斜率不同,野生型细胞的斜率最小,单杂合型细胞次之,双杂合型细胞最大。四种基因型细胞的细胞周期在辐照后都呈现G_2期阻滞,但与野生型细胞相比,ATM单杂合细胞延迟逾越周期阻滞,BRCA1单杂合细胞则提前逾越,双杂合型细胞的周期变化曲线与野生型细胞一致。0.5Gyγ射线辐照在种细胞中诱导的γH2AX foci数一样,但0.2Gyγ射线辐照诱导的γH2AX foci数则不相同,野生型细胞中最多,两种单杂合型细胞次之,双杂合型细胞中最少。结论基因杂合与肿瘤发生存在相关性,其导致细胞在外源刺激条件下基因表达量不足,从而影响损伤识别、细胞凋亡、周期调控等,致使相对较多的损伤未经修复即传递给子细胞,最终导致细胞转化、肿瘤发生。