四川青川县大熊猫栖息地主要伴生哺乳动物调查

１９９９年１０月２５日～１１月１５日，在四川省青川县对大熊猫种群数量进行调查的同时，对主要的伴生哺乳动物也进行了调查。在调查样线遇见率最高的是牛羚，其次为野猪、黑熊、竹鼠等，其遇见率分别为６０．８％、１６．７％、１４．１％、１０．１％。动物种类及种群数量分布最多的是唐家河自然保护区，牛羚和野猪已在唐家河周边社区对农作物造成较大的危害。全县大熊猫栖息地内，除唐家河保护区保护较好外，其余地方的野生动物保护不容乐观，栖息地质量和动物多样性都在下降。

哺乳动物胚胎滞育及其调控机制研究进展

胚胎滞育(Embryonic diapause)是存在于部分哺乳动物中的一种生存策略和繁殖状态。其具体过程为:胚胎在着床前停止或减缓发育形成胚胎滞育期,滞育期结束后胚胎再次活化,且滞育过程不会对随后的胚胎发育产生任何不良影响。胚胎滞育主要分为两种类型:兼性滞育(Facultative diapause)和专性滞育(Obligate diapause)。兼性滞育受哺乳调控,专性滞育受季节性光周期调控。虽然滞育原理各不相同,但哺乳动物的滞育过程都是在催乳素、孕酮或者卵巢雌激素的共同调节下完成的。除激素调控机制外,胚胎滞育的分子调控机制研究也有了实质性进展,目前已发现了大量能够调节胚胎滞育的潜在候选因子,包括营养物质、蛋白酶、细胞因子、生长因子和转录因子等。本文对现有胚胎滞育研究做了归纳和整理,同时针对胚胎滞育研究现状提出几点建议,为以后胚胎滞育研究提供参考。

富含半胱氨酸的分泌蛋白(CRISPs)在哺乳动物授精过程中的作用

雌雄配子间的结合与融合是哺乳动物授精成功的关键步骤,哺乳动物富含半胱氨酸的分泌蛋白CRISPs家族是一个进化上高度保守的蛋白家族,参与了精卵结合与融合过程,并在其中扮演了多种角色。目前从雄性小鼠生殖道中分离出4个CRISPs家族成员:附睾的CRISP1、睾丸的CRISP2、分布广泛的CRISP3以及与人CRISP1同源的CRISP4,对CRISPs家族蛋白成员的晶体结构分析揭示出CRISP蛋白含有两个功能域,一个是位于N末端的结构保守的CAP结构域,另一个是位于C末端的CRISP蛋白家族特有的CRISP功能域。CAP功能域中含有CAP基序,CRISP功能域由一个短的铰链区和一个离子通道调节区组成,并通过铰链区与CAP结构域相连接。简要回顾了各种CRISP蛋白的发现和特性鉴别过程,希望能从CRISPs的角度对哺乳动物精卵识别、结合与融合的分子机制有更好的了解。

哺乳动物精卵相互作用的分子机制的研究进展

哺乳动物受精是由一系列有序步骤组成的复杂细胞相互作用过程组成,最终导致精卵质膜融合形成受精卵。近来运用基因组学和蛋白质组学技术在哺乳动物精子和卵子表面鉴定出若干可能参与精卵质膜粘附与融合过程的蛋白分子,并对其结构和生物学功能进行了研究,但精卵识别与融合的分子机理仍然不清楚。综述了与精卵识别和融合有关的蛋白的最新研究进展,为进一步研究精卵相互作用的分子机制提供参考。

哺乳动物着床前胚胎中细胞系的分化及调控机制

哺乳动物着床前发育是指精卵结合后胚胎在子宫着床之前的发育。这一阶段的发育时间短(小鼠为4.5 d),但是发生了一系列形态学和发育生物学上的变化。形态上,小鼠在着床前胚胎经历了3个重要变化:8细胞阶段的致密化和极性化、内细胞团和滋养层的分化及原始内胚层和外胚层的分离;在发育生物学方面,受精后会发生染色质重编程、母源因子降解、胚胎基因组激活等事件。本文以小鼠着床前胚胎为例,重点介绍了影响胚胎形态变化的调控机制及参与早期胚胎细胞分化的信号通路。对这些调控机制的理解有助于开发相关技术,从而提高动物繁殖效率或哺乳动物辅助生殖效率。

海洋哺乳动物体内新污染物生理毒代动力学模型研究进展

新污染物治理是国家重大需求,海洋是新污染物重要的汇。新污染物进入海洋环境后,威胁海洋生物的生存,尤其对食物链顶端的海洋哺乳动物存在较大风险。生理毒代动力学(physiologically based toxicokinetic,PBTK)模型可以关联新污染物环境浓度与生物体内浓度,定量描述新污染物在海洋哺乳动物体内的吸收、分布、代谢、排泄(ADME)过程,预测靶器官中新污染物的积累趋势,有助于对海洋生态系统进行风险评估。本文概述了PBTK模型的构建方法和海洋哺乳动物体内新污染物PBTK模型的研究进展,并对未来PBTK模型的发展和应用进行了展望。

哺乳动物睾丸中c-kit基因表达对生精细胞发育的影响

c-kit和SCF信号传递系统的特性已被广泛报道。但是哺乳动物c-kit基因的结构、功能、时空表达和c-kit突变动物模型相关的研究不多。由于研究方法的精度有差别,造成有些结果不清晰,有些结论还存在争议。该文对哺乳动物c-kit受体的结构和功能进行了阐述,并着重介绍了c-kit在模式动物和家畜生精过程中的表达形式及c-kit突变个体的相关研究进展。最终深入探讨了c-kit在生精细胞增殖、分化及受精过程中所起的作用。通过系统性介绍,明确c-kit在生精过程中起到的重要作用,为生精细胞的增殖、分化及迁移等机理的进一步研究提供了参考。

哺乳动物精原干细胞的研究进展

精原干细胞是雄性体内可以永久维持的成体干细胞,它具有自我更新和分化的能力,保证了雄性个体生命过程中精子发生的持续进行,从而实现将遗传信息传递给下一代。精原干细胞不仅可在体外实现长期培养或诱导分化为各级生精细胞,并且可在特定条件下将其诱导去分化成为多能性干细胞。同样,这种多能性干细胞如同胚胎干细胞,可被诱导形成造血细胞、神经元细胞、肌细胞等多种类型细胞。鉴于其独具的生物学特性,精原干细胞在揭示精子的发生机制、治疗雄性不育和转基因动物等研究中具有重要价值。该文对精原干细胞在生物学特性、纯化培养、移植、体外诱导分化及其相关调控方面的各项研究进行了小结,综述了近年来的研究历程和最新研究成果。

当地生态知识在海洋哺乳动物研究中的应用与展望

当地生态知识(local ecological knowledge,LEK)是指人们在长期的生活体验和生产实践中,获得的有关周边环境、生物资源及其相互关系的经验和知识。近几十年来,LEK在海洋哺乳动物研究中得到了广泛的应用和发展,尤其是在基础相对薄弱的发展中国家或地区,LEK作为一种低成本、短周期且适合大范围调查的手段,日益成为研究人员获取目标物种生态信息的重要渠道。LEK与野外实地调查等获得的数据可以互补,从而为评估海洋哺乳动物的生存状况和环境变化提供多维度的信息来源;该方法还往往是了解目标物种生存状况历史变动的有效手段,回答传统方法很难甚至无法回答的科学问题,如目标物种在较长时间尺度上的生态信息历史变化趋势等。本文介绍了LEK的定义及特征、海洋哺乳动物及其传统生态调查方法、LEK在海洋哺乳动物中的研究进展、应用LEK开展海洋哺乳动物研究的步骤,还讨论了LEK在我国海洋哺乳动物研究中的应用前景和推广价值,旨在为今后相关研究提供参考资料。

“克隆动物牧食生态学”研究初报

这是世界上首次报道无性繁殖来源的哺乳动物,即克隆哺乳动物的野外生态适应性研究,我们将其称之为克隆动物生态学(Cloned Animal Ecology).分别将体细胞克隆羊和克隆牛放养在蒙古高原较为严酷的环境中,通过GPS(Global Positioning System)卫星定位系统全天候跟踪,对克隆动物的牧食行为与生态适应性进行研究.结果表明,克隆羊和克隆牛均表现出优良的气候适应性,在较短时间内就能适应严酷的自由牧食状态;具备良好的放牧随群性,与本地牛或羊随群牧食,社群行为良好;具有正常的放牧状态下的繁殖能力.这些结果不仅说明克隆动物是健康的,而且同有性生殖动物一样,具有良好的环境适应能力和野外恶劣环境生存能力.本研究对于利用优秀的克隆动物进行家畜良种培育,特别是培育适合于不同草原生境的优良草食家畜具有重要意义.

纯合子转基因动物筛选方法研究进展

纯合子转基因动物筛选方法研究进展陈建泉成国祥徐少甫（扬州大学农学院生物技术研究所及动物医学系，哺乳动物胚胎工程与遗传工程实验室，扬州２２５００９）转基因动物在基础生物学、临床医学、制药工业、品种改良等众多领域中已日益显示其重要地位。转基因动物技术，在...

藏羚与几种牛科动物成纤维细胞的特性比较

为研究高原低氧环境对哺乳动物细胞生长特性的影响,本文以高原低氧动物藏羚和同科的阿尔巴斯白绒山羊、蒙古绵羊及鲁西黄牛的耳源组织细胞为材料,利用DMEM/F12培养液进行培养,建立了4种动物的体外培养成纤维细胞系,并对其进行形态学观察、生长曲线绘制、凋亡检测、核型分析等生物学特性检测。结果表明:4种动物的细胞经差异贴壁法联合消化排除法,可获得纯化的成纤维细胞,细胞形态一致且活力稳定,4种动物细胞的形态与生长曲线无明显差异;藏羚、绒山羊、绵羊、牛同代次细胞生长倍增时间分别为26 h、22 h、23 h和22 h;经流式细胞仪检测,细胞凋亡率分别为5.5%、2.7%、8.6%和1.5%;藏羚、绒山羊、绵羊与牛的染色体数目分别为60、60、54和60。藏羚与绒山羊、牛染色体数目相同,且除性染色体外,其余均为端部着丝粒类型,而绵羊存在6条中着丝粒类型染色体。该结果表明,在体外培养条件下,藏羚的体细胞生长特性与同科的其他物种的细胞生长特性存在明显差异。这为从细胞水平上研究藏羚对环境低氧适应的分子机理提供了基础。

基于DNA宏条形码技术的斑海豹食性分析

野生动物食性研究是掌握动物生境需求的核心内容,对野生动物的保护和管理具有重要意义。在我国辽东湾斑海豹(Phoca largha)传统繁殖地和盘锦栖息地海域采集其粪便,选用12S rRNA作为分子标记进行粪便DNA扩增,利用高通量测序鉴定其食物组成。结果发现:在斑海豹粪便中共鉴定出鱼类16种,隶属5目8科13属。食物组成的相对丰度显示:梭鱼(Liza haematocheilus)为绝对优势的饵料食物(40.72%),其次为鰕虎科(Gobiidae)种类(23.18%)。属水平不同采样群体的相对丰度显示:2021年、2023年辽东湾北部冰区和2023年盘锦辽河口栖息地排在前3位的种类分别是梭属(Liza)31.91%、矛尾鰕虎属(Chaeturichthys)14.06%和缟鰕虎属(Tri⁃dentiger)8.39%,梭属42.37%、复鰕虎属(Acanthogobius)14.06%和矛尾鰕虎属11.17%,及梭属47.93%、矛尾鰕虎属13.93%和绵鳚属(Zoarces)12.18%,分别合计占斑海豹3个群体食物组成相对丰度的54.36%、67.60%和74.04%。研究结果与辽东湾北部的渔业资源优势物种一致,表明斑海豹为广食性物种,其食物组成主要取决于栖息海域、季节及主要猎物种类的丰度。

斑海豹:唯一在中国繁殖的“海中大熊猫”

里海海豹是唯一生活在里海的海洋哺乳动物,自2008年起,它被国际自然保护联盟(IUCN)列为濒危物种。然而近日,俄罗斯达吉斯坦共和国里海沿岸发现约2500只死亡的海豹,引起各界关注。那么,作为海洋哺乳动物,海豹有多少种?分布在我国的海豹有哪些?目前保护现状如何?

牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性

采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牛乳腺上皮细胞。形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征;染色体分析结果表明,培养的细胞具有正常的染色体数目。通过荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表达上皮细胞特异的角蛋白5和8。该细胞在添加胰岛素、氢化可的松以及羊催乳素的无血清培养液中诱导培养时,用RT-PCR方法检测到了β-酪蛋白基因的转录。这些结果表明,分离培养的细胞是乳腺上皮细胞,这些细胞在诱导培养的条件下能够转录表达β-酪蛋白。

奶牛X性控冻精应用研究

利用SX—MOFLO精子分离设备分离奶牛XY精子，将分离后的奶牛X精子冷冻保存。探讨奶牛X性控冻精解冻后存活时间、不同方法进行人工授精的受胎率，为奶牛X性控冻精的大规模推广应用提供依据。方法与结果：（1）取不同种公牛、不同批次的X性控冻精及普通冻精解冻后倒人5ml。试管内摇匀，至37℃水浴锅中，每2h检测一次精子活力，4h后每小时检测一次精子活力，直至无运动精子。结果奶牛X性控冻精存活时间为5～12h，比同种普通精于的存活时间短2～10h。（2）应用奶牛X性控冻精人工授精的母牛的情期受胎率（59．4％=342／576）与普通冻精的情期受胎率（60．6％=129／213）相比，无显著差异（P〉0．05）。奶牛X性控冻精母犊出生准确率93．3％（319／342），极显著地高于普通冻精48．8％（63／129）的母犊率（P〈0．001）。且应用奶牛X性控冻精人工授精后的青年牛的情期受胎率（65．6％=240／366）极显著的高于经产牛的情期受胎率（48．6％=102／210）（P〈0．001）。（3）在母牛发情结束后6～8h左右进行人工授精，其情期受胎率为67．1％（116／173），显著地高于在母牛发情开始后8～12h进行人工授精56．1％（226／403）的情期受胎率（P〈0．01）。（4）在准确判断母牛卵巢上卵泡发育状态的前提下，将精液全部输至发育侧子宫角大弯处，其情期受胎率62．7％（289／461），高于母牛每侧子宫角输1／2支X性控冻精46．1％（53／115）的情期受胎率，但二者之间差异不显著（P〈0．05）。研究结果表明应用奶牛X性控冻精进行人工授精，其受胎率与奶牛的经产与否、授精时间和输精部位有关。

脂质体介导外源基因体外转染牛胎儿成纤维细胞条件的优化

通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因的表达随DNA、脂质体量的增加而增加,延长细胞暴露时间反而使转染效率下降,转染细胞数适当才能得到较高的转化率。

IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究

本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF-1毛囊特异表达载体pCDsR-KI(大小7.4 kb)。以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以lipofectamineTM2000介导转染所培养的第2代成纤维细胞,在DMEM/F12+10%FBS、37℃、5%CO2中培养,并添加G418筛选,获得了表达红色荧光蛋白的细胞克隆。经PCR法鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中。通过分析转基因体细胞的生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数趋于正常。为下一步通过体细胞核移植技术获得转基因克隆绒山羊准备了核供体细胞。

绒山羊曲细精管生殖细胞的长期培养和精子发生过程的观察

哺乳动物精子发生过程是生殖生物学的重要研究课题之一.为了开展对山羊精子发生过程的研究,我们首次建立了绒山羊睾丸生殖细胞原代培养方法.原代生殖细胞和支持细胞(Sertolicells)由绒山羊睾丸曲细精管组织块产生,在体外共培养超过三个月.在共培养期间,观察到绒山羊的精原干细胞分化为精母细胞和精子细胞的形态变化过程.这一方法的建立为山羊精子发生过程的研究和应用打下了基础.实验结果显示,在没有添加任何生长因子的条件下,绒山羊睾丸生殖细胞长期增生分化,不断产生精子细胞.这一结果暗示了组织块和共生的支持细胞为生殖细胞的增生和分化提供了营养因子和调节因子.生成的游离精子细胞最后全部死亡,暗示这一共培养体系不能提供变态过程所需因子.

卵丘细胞凋亡与增殖对牛卵母细胞体外发育的影响

【目的】探讨卵丘-卵母细胞复合体(COCs)形态、卵丘细胞凋亡与增殖状态和卵母细胞发育能力之间的相关性。【方法】根据卵胞质均匀程度和卵丘细胞层数等形态指标,对所挑选的未成熟COCs进行分组,随后利用体外受精技术和TUNEL技术,并结合流式细胞仪,评价各组COCs的体外发育能力及其卵丘细胞凋亡和细胞周期差异。【结果】与包被5层以上致密卵丘且卵胞质均质的COCs相比,具有2—5层轻度扩散卵丘与颗粒化卵质特征的COCs显示较好的后续胚胎发育潜力、较高的卵丘细胞凋亡程度和较低的G2-M期细胞比率。【结论】卵丘细胞凋亡程度与未成熟卵母细胞发育潜能呈正相关;COCs形态、卵丘细胞凋亡或者G2-M期细胞比率指标可以用来指示未成熟卵母细胞的发育潜力。