m6A甲基化相关单核苷酸变异与膜性肾病的发病相关

目的:膜性肾病(membranous nephropathy, MN)是一种具有遗传易感性的肾小球靶向性自身免疫性疾病,其发病机制仍未完全阐明,本文旨在探索m6A甲基化相关单核苷酸变异(m6A-SNPs)是否参与了其发病环节。方法:本研究利用全基因组关联分析(GWAS)和RMvar数据库中的SNPs数据初步确定了与MN相关的m6A-SNPs,通过查询在线网站选取位于基因本体区、显示顺势表达数量性状位点(cis-eQTL)信号以及在东亚人群中次等位基因频率(minor allele frequency, MAF)值大于0.1的SNPs,并对剩余SNPs进行功能注释。最后,利用GEO数据库中GSE108113数据集进行差异基因表达分析。结果:共确定了61个与MN相关的m6A-SNPs以及MICA、NOTCH4、EXTL3、PCDHB14等8个差异表达基因。结论:m6A-SNPs可能通过调控以上基因的表达参与了MN的发生发展。

碳酸司维拉姆联合常规治疗对慢性肾衰竭合并高磷血症患者血清炎症因子及HO-1、iPTH水平的影响

目的:探讨碳酸司维拉姆联合常规治疗对慢性肾衰竭(CRF)合并高磷血症患者血清炎症因子及血红素氧化酶1(HO-1)、全段甲状旁腺激素(i PTH)水平的影响。方法:将2014年1月-2015年1月唐山市工人医院肾内科确诊为CRF合并高磷血症患者60例按随机数字表法分为对照组和观察组,各30例。对照组患者给予降糖、降脂、降压、降磷、保护肾脏等临床常规方法治疗,观察组患者在对照组治疗基础上给予碳酸司维拉姆(剂量0.8 g,每天3次,餐中服药),疗程均为4周。比较两组患者血清中白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、HO-1、i PTH和钙、磷水平,并比较两组患者不良反应发生情况。结果:因两组患者在治疗过程中均有2例退出,故最终两组纳入数分别为28例。治疗前,两组患者血清各指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。与治疗前比较,两组患者治疗后血清中IL-6、CRP、i PTH、磷水平均显著降低(P<0.05),血清钙水平显著升高(P<0.05),且观察组患者上述指标较对照组改善更明显(P<0.05)。两组患者不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:碳酸司维拉姆联合常规治疗后能更为有效地降低CRF合并高磷血症患者血清炎症因子(IL-6、CRP)和HO-1、i PTH水平,调节钙、磷代谢,且安全性较高。

1,25(OH)_2D_3对甲状旁腺素诱导的肾小管上皮细胞转分化和TGF-β_1的表达的影响

目的:探讨1,25(OH)2D3对甲状旁腺素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养在含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液中。对照组:加入等体积含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH刺激组:加入终浓度为10-10 mol/L PTH的含50 mL/L FCS的DMEM/F12培养液;PTH+1,25(OH)2D3干预组:加入10-10 mol/L PTH,同时加入不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7 mol/L)的1,25(OH)2D3。刺激HK-2细胞48 h。半定量RT-PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1的基因表达;Western blot法检测细胞中α-SMA和TGF-β1的蛋白表达;免疫细胞化学法检测细胞中α-SMA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的含量。结果:半定量RT-PCR结果显示,对照组HK-2细胞中几乎无α-SMA的mRNA表达,仅有少量的TGF-β1 mRNA表达;PTH刺激组α-SMA和TGF-β1mRNA表达量与对照组比较明显增加;PTH+1,25(OH)2D3干预组表达量比PTH刺激组显著降低,且随着1,25(OH)2D3浓度的升高呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,对照组HK-2细胞中无α-SMA的蛋白表达,仅有少量的TGF-β1蛋白表达;10-10 mol/L的PTH能够明显诱导HK-2细胞中α-SMA的蛋白表达,增加TGF-β1的蛋白表达量;PTH+1,25(OH)2D3干预组,α-SMA和TGF-β1的蛋白表达量比PTH刺激组显著降低(P<0.05)。免疫细胞化学法结果显示,对照组几乎无α-SMA阳性表达的细胞,PTH刺激组可见大量细胞α-SMA表达阳性;PTH+1,25(OH)2D3干预组α-SMA表达阳性的细胞数明显低于PTH刺激组(P<0.05)。ELISA结果显示,对照组细胞上清液中可检测到少量的TGF-β1,PTH刺激组含量显著升高,PTH+1,25(OH)2D3干预组与PTH刺激组比较含量明显降低(P<0.05)。结论:1,25(OH)2D3能够部分拮抗PTH诱导的HK-2细胞转分化和TGF-β1的表达。

糖尿病肾病患者血CD64、Alb、IL-6表达及其与合并肺部感染的关系和预后影响因素

目的探讨糖尿病肾病(DN)患者血CD64、白蛋白(Alb)、白细胞介素(IL)-6表达与其合并肺部感染的关系及预后影响因素。方法选取126例DN合并肺部感染患者纳入肺部感染组,同期126例DN未合并肺部感染患者纳入非肺部感染组。检测比较两组血CD64、Alb、IL-6水平,比较肺部感染组不同预后患者一般资料与血CD64、Alb、IL-6水平,分析DN合并肺部感染预后的影响因素及血CD64、Alb、IL-6对患者预后不良的预测价值。结果肺部感染组血CD64、IL-6表达均明显高于非肺部感染组,血Alb表达明显低于非肺部感染组(P<0.05);肺部感染组死亡患者血CD64、IL-6表达均明显高于生存患者,血Alb表达明显低于生存患者,临床肺部感染评分(CPIS)、急性生理与慢性健康评估(APACHEⅡ)评分均明显高于生存患者(P<0.05);肺部感染组CPIS、APACHEⅡ评分与血CD64、IL-6表达正相关,与血Alb表达呈负相关(均P<0.05);DN合并肺部感染患者预后与CPIS、APACHEⅡ评分、血CD64、Alb、IL-6表达关系密切;血CD64、Alb、IL-6联合预测DN合并肺部感染患者预后死亡的曲线下面积(AUC)高达0.899,高于3种指标单独预测,联合预测的最佳敏感度为86.21%,特异度为81.44%。结论DN合并肺部感染患者血CD64、Alb、IL-6表达异常,可反映患者肺部感染严重程度及病情,在判断DN合并肺部感染患者预后方面具有重要价值。

醛固酮对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的:探讨醛固酮(ALD)在体外是否能够促进人近端肾小管上皮细胞株(HK2)结缔组织生长因子(CT-GF)的表达。方法:采用体外培养的HK2细胞,分别观察不同浓度(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)ALD处理48h,或用10-9mol/LALD处理不同时间(24h、48h、72h)对HK2细胞CTGF表达的影响,应用RT-PCR法检测CTGFmRNA水平的表达。结果:HK2细胞培养48h后,空白对照组即有CTGF的基础表达,ALD不同浓度组CTGFmRNA的表达均有增加,与空白对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);以10-9mol/L浓度的ALD作用于HK2细胞,随着作用时间的延长,CTGFmRNA的表达量明显增加,与对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:ALD能够促进HK2细胞CTGFmRNA水平的表达,并具有剂量依赖性和时间依赖性,ALD可能通过促进CTGF的分泌,发挥其促进肾间质纤维化的作用。

原发性肾小球肾炎患者尿中结缔组织生长因子的检测及其临床意义

目的探讨原发性肾小球肾炎患者尿中结缔组织生长因子(CTGF)水平的变化及临床意义。方法选择原发性肾小球肾炎患者48例,正常对照组32例,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定其尿中CTGF分泌水平,应用比浊法检测尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血浆清蛋白、血肌酐、血尿素氮等生化指标,选用肾小球指数、肾小管间质病变程度作为评价肾脏病理损害的指标,并与尿中CTGF水平进行相关性分析。结果原发性肾小球肾炎组患者尿CTGF水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。原发性肾小球肾炎组患者尿CTGF水平与尿蛋白指数、血肌酐水平、血尿素氮水平、肾小球指数、肾间质病变程度呈正相关(r值分别为0.453、0.368、0.339、0.412、0.397,P<0.05),而与血浆清蛋白水平无明显相关性。结论原发性肾小球肾炎患者尿中CTGF水平升高,检测尿中CTGF水平可能成为评价慢性肾小球肾炎患者肾脏病变严重程度的指标。

肾活检362例临床病理分析

目的了解肾脏疾病的病理类型及其特点。方法回顾性分析该院2005年8月～2007年5月共362例因肾脏疾病行肾活检的病历资料,分析其病理类型及其与临床表现的关系。结果362例患者中,原发性肾小球疾病占79.01%,继发性肾小球疾病占15.47%,遗传性肾小球疾病占1.1%,小管间质性疾病占4.42%。原发性肾小球疾病以IgA肾病(IgAN)最多,占30.97%,其次分别为系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)占14.36%,微小病变(MCD)占13.81%,膜性肾病(MN)占11.87%。继发性肾脏病中以狼疮性肾炎(LN)多见,占5.8%,其次是乙型肝炎相关性肾炎占3.6%,过敏性紫癜肾炎占3.3%。临床表现肾炎综合征占43.09%,肾病综合征占53.61%,急性肾衰竭占3.3%。结论原发性肾小球疾病是最常见的肾小球疾病,以IgAN为主。继发性肾小球疾病中以LN多见,女性多发,其他继发性肾小球疾病逐渐增多。肾活检非常有必要。

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌细胞外基质的影响

目的:研究醛固酮(ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(SP I)对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌细胞外基质的影响。方法:用EL ISA法测定细胞培养上清中FN和I型胶原的浓度,用半定量RT-PCR法检测细胞中FN和I型胶原mRNA的表达。结果:EL ISA结果显示,ALD促进系膜细胞合成分泌FN和I型胶原,且呈剂量依赖和时间依赖性。半定量RT-PCR结果显示,ALD促进系膜细胞FN和I型胶原mRNA的表达,也呈剂量依赖和时间依赖性。SP I能够拮抗ALD的作用。结论:ALD从蛋白和基因水平促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN和I型胶原,SP I能够拮抗ALD的作用,具有一定的肾脏保护作用,从而有益于延缓肾小球硬化的进展。

醛固酮对人肾小管上皮细胞MMP-1/TIMP-1基因表达和合成分泌纤维连接蛋白的影响

目的探讨醛固酮(ALD)对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)基因表达,以及合成分泌纤维连接蛋白(FN)的影响。方法人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于含5%FCS的DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)刺激HK-2细胞48h后,应用半定量RT-PCR法检测细胞中MMP-1、TIMP-1和FN的基因表达,ELISA法测定培养上清液中纤维连接蛋白(FN)的含量。结果 ALD呈剂量依赖性地下调HK-2细胞中MMP-1的基因表达,上调TIMP-1和FN的基因表达,MMP-1/TIMP-1比值降低(P<0.05)。ALD呈剂量依赖性地增加培养上清液中FN的含量(P<0.05)。结论 ALD通过调控HK-2细胞中MMP-1和TIMP-1的基因表达,促进其合成分泌FN,导致肾间质纤维化的进展。

烧伤脓毒症并发IgA肾病6例临床病理分析

目的分析烧伤脓毒症并发肾损害的临床病理特点。方法回顾性分析唐山工人医院1995-2005年有肾活检结果的烧伤脓毒症恢复期并发肾损害患者6例,分析其临床及病理特点。结果肾损害在烧伤后平均3个月(1-6个月)被发现。2例表现为无症状性镜下血尿和蛋白尿;2例表现为慢性肾炎综合征;2例为肾病综合征。肾组织免疫荧光检查均发现系膜区IgA沉积。光镜表现为轻度系膜增生2例,中度系膜增生4例;1例有小细胞新月体形成;慢性肾小管间质病变不明显。结论在烧伤脓毒症并发肾损害中,IgA肾病不少见,可能与烧伤脓毒症存在一定关系。

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的研究甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响及其机制。方法不同浓度的PTH刺激HK-2细胞后,应用Hoechst33258染色观察PTH对HK-2细胞形态学的改变,Annexin V/PI双染流式细胞术检测PTH对HK-2细胞凋亡的影响。Western blot和半定量RT-PCR法检测PTH对HK-2细胞Bax和Bcl-2蛋白和基因表达的影响。结果Hoechst33258染色结果表明,PTH作用于HK-2细胞48h,细胞出现核固缩、核碎裂,随着PTH浓度的升高,凋亡细胞数逐渐增多,且具有一定的浓度依赖性。流式细胞术结果表明,随着PTH浓度的升高,凋亡细胞百分率逐渐增多,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot和半定量RT-PCR结果表明,随着PTH浓度的升高和作用时间的延长,Bax蛋白和基因表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白和基因表达量逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加。结论PTH可能通过调节凋亡基因Bax和Bcl-2的表达促进肾小管上皮细胞凋亡,进而促进肾小管间质纤维化。

醛固酮对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶-2表达及细胞增殖的影响

目的探讨醛固酮(aldosterone,ALD)对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶-2(matrismetallopro-teinase-2,MMP-2)表达及细胞增殖的影响。方法应用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscriptionpoly-merasechainreaction,RT-PCR)技术,观察ALD诱导人近端肾小管上皮细胞系(HK2)合成MMP-2的情况,四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT]法观察不同浓度的ALD对HK2增殖的影响。结果在无ALD刺激的情况下,HK2细胞中有基础量的MMP-2mRNA的表达,ALD以剂量和时间依赖的方式抑制HK2细胞合成MMP-2mRNA,同时ALD以剂量和时间依赖的方式促进HK2细胞的增殖。结论ALD可抑制体外培养的人近端肾小管上皮细胞表达MMP-2,促进人近端肾小管上皮细胞的增殖,提示ALD可能抑制了肾小管上皮细胞细胞外基质的降解,促进了肾纤维化的进展。

醛固酮对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子基因表达的影响

目的探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的影响。方法①以不同浓度的ALD(10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)刺激肾小球系膜细胞72h后,用半定量RT-PCR法检测细胞中CTGFmRNA的表达。②以10-7mol/L的ALD刺激肾小球系膜细胞不同时间(12、24、48、72h)后,用半定量RT-PCR法检测细胞中CTGFmRNA的表达。结果半定量RT-PCR结果显示,随着ALD浓度的升高,CTGFmRNA的表达量(以CTGF/GAPDHmRNA表示)明显增加,在10-7mol/L时达高峰,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。表明ALD促进肾小球系膜细胞CTGFmRNA的表达,且具有一定的剂量-反应关系。以10-7mol/L的ALD作用于大鼠肾小球系膜细胞12～72h,随着作用时间的延长,CTGFmRNA的表达量明显增加,在72h时达高峰,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。表明ALD促进系膜细胞CTGFmRNA的表达,且具有一定的时间-效应关系。结论ALD促进大鼠肾小球系膜细胞CTGFmRNA的表达,从而促进慢性肾脏病进展。

醛固酮及其受体拮抗剂对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的研究醛固酮(ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(SPI)对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响。方法应用MTT法检测系膜细胞增殖,用流式细胞术检测细胞周期各时相的百分比。结果MTT结果显示,ALD抑制肾小球系膜细胞增殖(与对照组比较P<0.01),并具有一定的剂量依赖和时间依赖性,SPI能拮抗其作用。流式细胞术结果显示,ALD作用于系膜细胞24 h,G1期细胞数增多,S期细胞数减少(与对照组比较,P<0.01)。结论ALD通过调控细胞周期抑制肾小球系膜细胞增殖。

成人过敏性紫癜性肾炎患者血清肝细胞生长因子及血尿结缔组织生长因子的研究

目的:探讨过敏性紫癜性肾炎(HSPN)患者血清肝细胞生长因子(HGF)及血尿结缔组织生长因子(CTGF)的水平及其与肾脏损害的关系。方法:选择HSPN病例35例,正常对照组32例,应用ELISA方法测定其血清HGF及血尿CT-GF的水平,应用比浊法检测尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮等生化指标,选用WHO病理分类法进行分级分组,并与血清HGF及血尿CTGF水平进行相关性分析。结果:HSPN患者血清HGF水平较对照组升高,在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级血尿CTGF较对照组升高,在Ⅳ级血清HGF与尿CTGF水平呈负相关。结论:HSPN患者血清HGF升高,病理较重时血尿中CTGF的水平升高,提示其参与了HSPN的发生发展。测定HGF和CTGF二者相结合可能更有效的评估紫癜性肾炎的肾脏损害的程度。

乙醛促进人肾小管上皮细胞表型变化并增加细胞α平滑肌肌动蛋白的表达

机体摄入大量的酒精后,约90%在肝脏乙醇脱氢酶的作用下转化为乙醛,并进入血液循环。肾脏是仅次于肝脏的酒精排泄器官。酒精及其代谢产物乙醛通过肾脏排泄到尿中,尿中乙醛的含量高于肝脏及血液中的含量。长期过量饮酒可导致酒精性肾损害,酒精性肾损伤以肾小管间质病变为主,但其作用机制目前尚不清楚。肾小管上皮细胞发生表型转化是发生肾间质纤维化的重要机制之一。

醛固酮与肾脏疾病

肾素血管紧张素醛固酮系统在肾脏疾病的进展中起着重要作用。醛固酮是这一系统中造成肾脏损害的重要物质,醛固酮可能通过血流动力学改变和直接作用于肾脏固有细胞发挥肾损伤效应,醛固酮受体拮抗药能够拮抗醛固酮的作用,延缓肾脏疾病的进展,保护肾功能。

次氯酸钠消毒液接触后出现过敏性紫癜肾炎5例

目的报告接触次氯酸钠消毒液后出现过敏性紫癜肾炎的5例病人情况。方法回顾性分析5例患者的临床表现、病理类型、治疗及预后。结果5例过敏性紫癜肾炎均发生于首次接触次氯酸钠消毒液后,临床表现为镜下血尿、无症状性蛋白尿和血尿、肾病综合征,肾脏病理为轻至中度系膜增生性肾小球肾炎,经过糖皮质激素及对症治疗后痊愈。结论接触次氯酸钠消毒液后出现过敏性紫癜肾炎,两者的因果关系有待进一步探讨。