miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为

目的:探讨miR-192-5p靶向E盒锌指结合同源框2(ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:利用TCGA数据库数据分析miR-192-5p和ZEB2在胰腺癌组织中的表达及两者的相关性。采用qPCR法和WB法分别检测人正常胰腺上皮细胞HPNE和胰腺癌PANC-1细胞中miR-192-5p和ZEB2的表达水平。利用脂质体转染技术转染PANC-1细胞,实验分为miR-192-5p mimic组、Mimic NC组、miR-192-5p inhibitor组、Inhibitor NC组、Mimic NC+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1组、miR-192-5p mimic+pcDNA3.1-ZEB2组。CCK-8法、克隆形成、划痕愈合、Transwell实验分别检测转染PANC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。qPCR法、WB法、双重免疫荧光实验检测PANC-1细胞中ZEB2、E-cadherin、vimentin的表达水平。通过生物信息学网站预测miR-192-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p对靶基因的调控作用。结果:胰腺癌组织中ZEB2的表达显著高于正常胰腺组织(P<0.01),且胰腺癌组织中miR-192-5p和ZEB2表达呈负相关(r=-0.419,P<0.01)。与HPNE细胞比较,PANC-1细胞中miR-192-5p低表达、ZEB2蛋白高表达(均P<0.01)。miR-192-5p过表达后,PANC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均显著降低,E-cadherin的mRNA和蛋白表达均上调、vimentin和ZEB2 mRNA和蛋白表达均下调;而抑制miR-192-5p后得到了相反的结果(P<0.05或P<0.01)。miR-192-5p靶向调控ZEB2的表达,过表达ZEB2可部分逆转上调miR-192-5p对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程的抑制作用。结论:miR-192-5p通过靶向ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞的恶性生物学行为。

ZEB2调控胰腺癌PANC-1细胞迁移和侵袭的实验研究

目的研究锌指E-box结合同源异型盒2基因(zinc finger E-box binding homeobox transcription factor-2,ZEB2)对胰腺癌PANC-1细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭能力及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响。方法分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中胰腺癌组织和癌旁组织中ZEB2的表达。将胰腺癌PANC-1细胞分为si-NC组、si-ZEB2组、pcDNA3.1组和pcDNA3.1-ZEB2组,采用qRT-PCR技术和Western blot法验证ZEB2敲降或过表达的有效性。CCK-8实验、集落形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测ZEB2对PANC1细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭的影响。利用qRT-PCR技术和免疫荧光实验检测细胞中EMT标志物E-cadherin、vimentin的表达水平。通过STRING网站预测与ZEB2具有相互作用的蛋白。结果TCGA数据库分析显示,与癌旁组织相比,胰腺癌组织中ZEB2表达水平明显升高(P<0.05)。与si-NC组相比,si-ZEB2组PANC-1细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭能力减弱;与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-ZEB2组PANC-1细胞的增殖、集落形成、迁移、侵袭能力增强(均P<0.05)。qRT-PCR技术和免疫荧光实验结果提示,与si-NC组相比,si-ZEB2组PANC-1细胞的上皮标志物E-cadherin mRNA表达升高,而间质标志物vimentin mRNA和蛋白表达降低;与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-ZEB2组PANC-1细胞中上皮标志物Ecadherin mRNA表达减少,间质标志物vimentin mRNA和蛋白表达增加(均P<0.05)。STRING网站预测出10个蛋白与ZEB2作用密切。结论过表达ZEB2能够促进胰腺癌PANC-1细胞的迁移、侵袭和EMT进程。

miR-192-5p对胰腺癌细胞系AsPC-1增殖、迁移和侵袭的调控作用

本研究旨在揭示miR-192-5p对胰腺癌(pancreatic cancer,PC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,为胰腺癌的临床诊断和治疗提供实验依据。采用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测miR-192-5p在人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞系AsPC-1中的表达水平;利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)、集落形成、划痕以及Transwell实验检测miR-192-5p对AsPC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的影响;生物信息学方法预测miR-192-5p的候选靶基因,并通过双萤光素酶报告实验对miR-192-5p的靶基因进行验证;RT-qPCR检测miR-192-5p对E盒锌指结合同源框2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)mRNA表达的影响。结果显示,miR-192-5p在胰腺癌细胞系AsPC-1中的表达水平明显低于正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE中的;胰腺癌细胞系AsPC-1中转染miR-192-5p mimics后其miR-192-5p的表达水平显著升高,并能抑制ZEB2 mRNA的表达,抑制胰腺癌细胞系AsPC-1的增殖、集落形成、迁移和侵袭;胰腺癌细胞系AsPC-1中转染miR-192-5p inhibitor后其miR-192-5p的表达显著降低,促进ZEB2 mRNA的表达,促进胰腺癌细胞系AsPC-1的增殖、集落形成、迁移和侵袭;双萤光素酶报告实验表明ZEB2是miR-192-5p的功能靶基因。本研究结果提示miR-192-5p可能通过靶向ZEB2而抑制胰腺癌细胞系AsPC-1的增殖、迁移和侵袭。