转录因子RUNX1上调MFAP2调控Notch信号通路促进甲状腺癌血管生成

目的探究微纤维相关蛋白2(MFAP2)在甲状腺癌中的功能以及其影响血管生成的分子机制。方法生信分析靶基因在甲状腺癌组织中的表达量及其富集通路,预测靶基因潜在的上游转录因子并分析其表达量与靶基因的相关性以及结合位点。双荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀(ChIP)实验验证基因之间的结合关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测靶基因的表达水平,western blot检测信号通路和血管形成相关蛋白的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和血管形成实验检测细胞活力和血管形成能力。结果生信分析确定MFAP2在甲状腺癌中高表达(P<0.05),qRT-PCR发现MFAP2在甲状腺癌细胞FTC-133、TCP-1和IHH-4显著高表达于人甲状腺正常细胞NTHYORI3-1(均P<0.05)。MFAP2富集在Notch信号通路上,Runt相关转录因子1(RUNX1)与MFAP2表达呈正相关,RUNX1与MFAP2上游2000 bp处有结合位点。qRT-PCR实验证实RUNX1与MFAP2在甲状腺癌细胞中高表达(P<0.05),双荧光素酶报告实验和ChIP实验验证了RUNX1与MFAP2之间存在靶向结合关系。CCK-8实验和血管形成实验证实MFAP2通过激活Notch信号通路促进甲状腺癌细胞的活力和肿瘤的血管生成。回复实验证实RUNX1/MFAP2轴通过Notch轴促进甲状腺癌的血管生成。结论RUNX1/MFAP2/Notch信号网络在甲状腺癌进展中有促癌机制,提示抑制该调控网络的药物开发可能是甲状腺癌治疗的新途径。

血清糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对表皮生长因子受体扩增伴随突变的非小细胞肺癌预后的预测作用

目的评估游离的糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(GPNMB)对表皮生长因子受体(EGFR)扩增伴随突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者的耐药和预后的预测价值。方法选取2018年3月至2019年9月在唐山市人民医院接受治疗的55例EGFR扩增伴随突变的NSCLC患者作为观察组,患者均应用EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)作为一线治疗方案;随机选取同期体检中心67例健康人群血液样本作为对照组。比较2组游离GPNMB表达水平;采用t检验或χ2检验分析GPNMB表达和患者临床病理特征的相关性;结合临床疗效,评估其作为耐药标志物的价值。随访患者的无进展生存时间(PFS),并采用多因素Cox回归分析影响EGFR扩增伴随突变NSCLC患者生存的独立危险因素。结果与对照组相比,观察组游离GPNMB表达水平显著升高。观察组游离GPNMB水平和EGFR-TKI的临床疗效显著相关(P=0.016),GPNMB高表达患者的耐药程度更强,PFS也更短(P=0.032)。游离GPNMB高水平(HR=4.029,95%CI:1.942~8.358,P<0.001)是影响患者生存的独立危险因素。结论EGFR扩增伴随突变的NSCLC患者游离GPNMB表达水平显著上调;且其高表达与患者耐药程度的增强及不良预后显著相关,是影响患者生存的独立危险因素。

胸段食管癌喉返神经旁淋巴结转移的风险模型构建及预测能力的初步验证

目的:探讨影响胸段食管癌喉返神经旁淋巴结转移的危险因素,构建模型并检验其预测效能。方法:收集2014年1月至2017年1月我院收治的89例患者为造模组,根据术后病理结果,将患者分为转移组与未转移组,分析可能影响喉返神经旁淋巴结转移发生的相关因素。根据危险因素权重,构建风险模型。同时,连续性收集2017年2月至2018年12月的47例患者资料,验证模型的预测效能。结果:Logistic回归分析发现,肿瘤位置、分化程度、浸润深度、淋巴结SUV值、CT下淋巴结征象是影响喉返神经旁淋巴结转移发生的独立性危险因素(P<0.05)。根据Logistic回归分析,可得回归方程:P预测=-0.754-1.347X1-1.361X 2+1.282X3+3.380X4+1.912X 5,X1:肿瘤位置(1=上段,2=中段,3=下段)、X2:分化程度(1=低分化,2=中分化,3=高分化)、X3:浸润深度(1=T1,2=T2,3=T3,4=T4)、X4:淋巴结SUV值(1=SUVmax≥2.5,2=SUV max<2.5)、X 5:CT下淋巴结征象(1=阴性,2=阳性)。ROC曲线的Youden指数最大值为0.710,截断值为0.662,敏感性为70.9%,特异性为99.1%,曲线下面积为0.918。将验证组患者各因素带入预测模型,检验该模型预测效能,结果发现,ROC曲线下面积为0.79,Hosmer-Lemeshow拟合优度检验显示,χ^2=1.52,P=0.93。模型拟合效度好,预测价值高。结论:影响胸段食管癌发生喉返神经旁淋巴结转移的高危因素多,临床应进行及时有效评估。本研究构建的预测模型有较好的评估效能,有一定的临床应用价值。

miR-144-3p靶向E2F8抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭并阻滞细胞周期

为了探究miR-144-3p在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)中的作用机制,本研究基于多个数据库对miR-144-3p和其下游靶基因在肺腺癌组织中的表达水平进行了预测;通过生物信息学方法和文献调研,确定了E2F转录因子8(E2F transcription factor 8,E2F8)为miR-144-3p的下游靶基因,并通过双荧光素酶实验对miR-144-3p和E2F8的靶向结合关系进行了验证;然后,通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、免疫印迹分析(Western-blot)、细胞毒性检测(Cell Counting Kit-8 assay,CCK-8 assay)、克隆形成、侵袭能力测定和流式细胞术等实验,对miR-144-3p和E2F8在肺腺癌中的调控机制进行了探究。结果显示,miR-144-3p在肺腺癌组织和细胞中呈显著低表达,而E2F8则显著高表达,两者存在靶向关系;过表达miR-144-3p或敲低E2F8能抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭并阻滞细胞周期于G1期。上述结果表明,miR-144-3p通过负调控E2F8抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭能力,并阻滞细胞周期于G1期,从而抑制肺腺癌细胞的恶性进展。这为肺癌新检测、治疗手段的开发提供了参考依据。

miR-196b靶向ERG促进肺腺癌的增殖和迁移

目的探究miR-196b影响肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)进展的机制。方法通过TCGA数据库分析miR-196b在LUAD组织中的表达水平,利用TargetScan预测其下游靶基因并用双荧光素酶实验进行验证,qRT-PCR检测miR-196b和ETS相关基因(ETS-related gene,ERG)在LUAD细胞系中的表达情况,MTT、划痕愈合和Transwell实验分别检测不同处理后LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化情况。结果miR-196b在LUAD中高表达(P=3.50e-17)并靶向负调控ERG,过表达miR-196b能够促进LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),回复实验证实miR-196b/ERG调控轴能够影响LUAD细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。结论miR-196b靶向ERG促进LUAD进展的分子机制,对开发LUAD新的临床治疗方法具有潜在意义。

临床护理路径评估模型在肿瘤放化疗患者护理管理中的应用研究

目的:探讨临床护理路径(CNP)评估模型在肿瘤放化疗患者护理管理中的应用价值。方法:选取医院收治的148例肿瘤放化疗患者,按照随机数表法将其分为对照组和观察组,每组74例,对照组采用常规护理模式,观察组采用CNP评估模型,从放化疗准备阶段、治疗阶段和康复阶段分别制定护理目标和工作事项,从患者的认知协作能力、临床诊疗效果和护理满意程度3个方面设计16项评估指标,实施护理质量动态监测和护理路径的优化调整,对比两组患者的护理效果。结果:两组放化疗后观察组的卡氏功能量表(KPS)、焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)评分数据优于对照组,差异有统计学意义(t=2.377,t=2.212,t=2.574;P<0.05);观察组的并发症总发生率(13.51%)低于对照组(33.78%),差异有统计学意义(x^(2)=8.420,P<0.05);观察组患者对护理服务能力、疾病护理质量和护理费用支出的满意度高于对照组,差异有统计学意义(x^(2)=8.134,x^(2)=4.485,x^(2)=5.630;P<0.05)。结论:CNP评估模型能较好地改善放化疗患者焦虑抑郁和体力状态,降低患者放化疗不良反应,提高护患沟通实效性和对患者的护理效果。

丁苯酞对恶性肿瘤合并缺血性脑卒中患者临床疗效的研究

目的评价丁苯酞对恶性肿瘤合并缺血性脑卒中患者的临床疗效。方法选取2021年6月—2023年6月唐山市人民医院神经内一科收治的86例恶性肿瘤合并缺血性脑卒中的患者为研究对象,采用随机数字表法将患者分为丁苯酞组和对照组,其中丁苯酞组43例,对照组43例。对照组根据患者情况给予抗栓、稳定斑块以及对症降糖、降压等综合治疗;丁苯酞组在对照组基础上给予丁苯酞氯化钠注射液每次100 ml,每天2次静脉滴注治疗。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估患者神经功能缺损情况,记录相关并发症评估预后;在治疗前(入院时)及治疗后(入院14 d)检测患者血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)的水平并计算差值,评估丁苯酞对炎症细胞因子水平的影响。结果丁苯酞组患者治疗后24 h、7 d、14 d,NIHSS评分逐渐降低,丁苯酞组患者治疗后14 d NIHSS评分低于对照组[6(4,10)比10(4,12)分],差异有统计学意义(P<0.05)。丁苯酞组患者颅内出血发生率为4.65%(2/43),与对照组的2.33%(1/43)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前后丁苯酞组患者IL-6、IL-8、TNF-α、sST2炎症细胞因子水平差值高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论对于恶性肿瘤合并缺血性脑卒中的患者,丁苯酞可改善其神经功能症状,降低血清IL-6、IL-8、TNF-α、sST2炎症细胞因子水平,且不增加出血率,对改善恶性肿瘤合并缺血性脑卒中患者预后有积极作用。

BHLHE40靶向HMGA2激活氧化磷酸化通路降低甲状腺癌细胞对顺铂敏感性的研究

目的探究BHLHE40能否通过靶向高迁移率族蛋白A2(HMGA2)激活氧化磷酸化(OXPHOS)通路进而影响甲状腺癌细胞对顺铂的敏感性。方法通过在线数据库TCGA-甲状腺癌和hTFtarget分析HMGA2及上游转录因子BHLHE40在甲状腺癌组织中的mRNA表达情况。采用脂质体转染法将si-HMGA2、oe-HMGA2、oe-BHLHE40以及阴性对照si-NC、oe-NC转染至甲状腺癌细胞K1和SW579中,通过实时荧光定量PCR检测BHLHE40和HMGA2在甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、K1和正常甲状腺细胞Nthy ori3-1中的mRNA表达水平,采用MTT法检测细胞活力,CCK-8法计算顺铂半抑制浓度(IC50)值,流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测OXPHOS复合体的表达,Seahorse XFe 96分析细胞的耗氧率。双荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀实验分析BHLHE40与HMGA2的结合关系。结果TCGA数据库结果表明,HMGA2和BHLHE40 mRNA在甲状腺癌组织中的表达(10.57±2.58、13.89±1.13)均较甲状腺正常组织高(4.82±1.69、12.28±1.01),差异均具有统计学意义(t=16.69,P<0.001;t=10.43,P<0.001)。实时荧光定量PCR结果发现,正常甲状腺细胞Nthy ori3-1、甲状腺癌细胞SW579、FTC-133和K1中HMGA2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.13、2.94±0.23、4.71±0.41和6.29±0.49,BHLHE40 mRNA相对表达量分别为1.00±0.12、2.60±0.23、3.39±0.35和6.18±0.51,差异均具有统计学意义(F=130.50,P<0.001;F=125.20,P<0.001)。进一步两两比较发现,与正常甲状腺细胞相比,甲状腺癌细胞中HMGA2和BHLHE40 mRNA的表达水平均显著升高(均P<0.001)。MTT法检测显示,与si-NC组相比,si-HMGA2处理显著降低了K1细胞的细胞活力(均P<0.05),oe-HMGA2处理相对于oe-NC组显著增加了SW579细胞的细胞活力(均P<0.05);与oe-NC+DMSO组相比,oe-HMGA2+DMSO组SW579细胞的细胞活力增强,而OXPHOS通路抑制剂Gboxin能够逆转过表达HMGA2对细胞活力的影响(均P<0.05)。流式细胞术和CCK-8实验结果显示,与si-NC组(凋亡水平:6.19%±0.28%;顺铂IC50值:17.47μmol/L)相比,敲低HMGA2能增加K1细胞的凋亡水平(11.96%±0.32%;t=19.17,P<0.001)和顺铂敏感性(IC50值:1.49μmol/L);与oe-NC组(凋亡水平:9.98%±0.32%;顺铂IC50值:8.17μmol/L)相比,过表达HMGA2显著降低了SW579细胞凋亡水平(4.32%±0.25%;t=19.65,P<0.001)和顺铂敏感性(IC50值:34.95μmol/L)。双荧光素酶报告实验结果发现,与si-NC组相比,在人肾上皮细胞293T细胞中敲低BHLHE40的表达显著降低野生型HMGA2的荧光素酶活性(0.31±0.02比1.00±0.11;t=10.69,P=0.004),但对于突变型HMGA2的荧光素酶活性没有显著性影响(1.06±0.11比1.00±0.07;t=0.80,P=0.470)。染色质免疫沉淀实验结果显示,与IgG组(1.00±0.10)相比,anti-BHLHE40组K1细胞的HMGA2 mRNA表达水平显著增加(6.57±0.62;t=15.36,P<0.001)。与oe-NC+DMSO组相比,oe-HMGA2+DMSO组SW579细胞凋亡水平(P<0.05)和顺铂敏感性均降低,OXPHOS复合体Ⅰ~Ⅴ表达显著增强,细胞耗氧率升高(均P<0.05),oe-HMGA2+Gboxin处理可逆转过表达HMGA2的影响(均P<0.05)。回复实验表明,与oe-NC+si-NC组相比,过表达BHLHE40后SW579细胞的细胞活力和OXPHOS复合体Ⅰ~Ⅴ的表达增强,细胞耗氧率和顺铂IC50值显著增加,细胞凋亡水平下降(均P<0.05);而同时敲低HMGA2可逆转过表达BHLHE40的影响(均P<0.05)。结论BHLHE40可通过靶向调控HMGA2的表达激活氧化磷酸化通路,进而影响甲状腺癌细胞对顺铂的敏感性。