人外周血、脐血、脂肪组织来源的内皮祖细胞部分生物学特性比较

目的研究人外周血、脐血和脂肪组织三种不同来源内皮祖细胞部分生物学特性异同,探讨其可能不同的适应范围和方式及方法,进而为提高内皮祖细胞的应用效率提供依据。方法采用密度梯度离心法分离人外周血、脐血单个核细胞,胰蛋白酶消化提取脂肪组织干细胞。所采集细胞诱导分化,观察细胞形态,对培养第7天的细胞进行鉴定。采用MTT法检测细胞增殖,Boyden小室检测细胞迁移能力,贴壁法检测细胞黏附功能以及血管生成试剂盒检测细胞体外成血管能力。结果诱导分化细胞均证实为内皮祖细胞。脐血源性内皮祖细胞增殖、迁移、黏附、成血管能力最强(P<0.05)。脂肪组织来源内皮祖细胞增殖与成血管能力方面较外周血来源内皮祖细胞强(P<0.05)。结论人脐血内皮祖细胞可能更适用于同种异体干细胞移植,脂肪组织来源内皮祖细胞可能在自体干细胞移植治疗缺血性疾病方面有潜在应用前景。

糖基化终末产物对人外周血内皮祖细胞数量及功能的影响

目的观察糖基化终末产物(AGEs)对体外培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响。方法体外培养的人外周血EPCs根据不同AGEs-人血白蛋白(HSA)浓度分为对照纽、正常组(终浓度7.5 mg/L)、干预1组(终浓度1 5 mg/L)干预2组(终浓度30 mg/L)和干预3组(终浓度60 mg/L)。采用密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞;激光共聚焦显微镜检测其对FITC标记荆豆凝集素-1的吸附和Dil-标记乙酰化低密度脂蛋白进行细胞功能鉴定;加入AGEs后,分别采用MTT法、Boyden小室测定EPCs的增殖、迁移能力;人纤维连接蛋白检测EPCs的黏附能力;用体外血管生成分析试剂盒检测不同浓度AGEs HSA作用后的EPCs成血管能力。结果高浓度AGEs可减少EPCs贴壁细胞数量(P<0.01),减弱EPCs的黏附(P<0.01)、增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)和成血管能力(P<0.01)。结论 AGEs可减少人外周血EPCs的数量并使用其功能受损。

外周血内皮祖细胞治疗下肢缺血性疾病的疗效

目的观察外周血内皮祖细胞治疗下肢缺血性疾病的疗效,比较内皮祖细胞两种不同移植方式的治疗效果。方法 2008年1月至2010年1月在我院治疗30例患者的34条缺血的下肢,选择两种移植方法,16例18条患肢采用小腿肌肉局部注射,16例17条患肢采用下肢动脉腔内注射。结果二组患者总的疼痛缓解改善率分别为83.3%(15/18)和93.8%(15/16)。对缓解或改善患者的冷、凉感觉,二组患者总的有效率均为100%(16/16,14/14)。二组患者总的保肢率分别为88.9%(16/18)和93.75%(15/16)。术后两种移植方法的踝肱比值(ABI)增加的例数分别为38.8.4%(8/18)和37.5.2%(6/16)。有15例患者16条患肢接受了下肢动脉造影,发现均有不同程度的新生侧枝血管形成。结论内皮祖细胞移植治疗下肢缺血性疾病是一种简单、安全、有效的方法。两种移植方法疗效没有明显的差异。

老年患者下肢动脉硬化闭塞症综合治疗体会

动脉硬化性闭塞症（ASO）是导致肢体缺血的常见病，多发生于下肢。ASO发病率随年龄的增长而明显增加，由于ASO根本病理变化为动脉粥样硬化，目前尚无根治性治疗方法，一些危重患者常可发生致残，甚至致死性后果。现将我科收治的老年下肢ASO患者的资料报道如下。

糖尿病大鼠骨髓内皮祖细胞的培养与鉴定

目的探讨糖尿病大鼠骨髓来源的内皮祖细胞体外诱导、培养和扩增的方法。方法用密度梯度离心法采集糖尿病大鼠骨髓单个核细胞,在含有血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的M199培养基中进行体外培养。应用免疫组织化学和免疫荧光法鉴定内皮祖细胞的CD34和CD133,并通过检测其对FITC标记的UEA-1的吸附和Dil-acLDL的吞噬来进行细胞功能的鉴定。结果在培养2天后部分细胞开始贴壁、变大,并逐渐伸展呈梭形。第7天时贴壁细胞增生明显,"集落"样生长。培养第7天细胞CD34和CD133均呈阳性,激光共聚焦显微镜观察显示EPC可以同时吞噬ac-LDL并结合UEA-1。结论糖尿病大鼠骨髓可以分离培养出内皮祖细胞,并能体外扩增,为糖尿病内皮祖细胞的移植研究奠定了基础。