改性木葡聚糖温敏水凝胶预防大鼠腹腔粘连的实验研究

目的探讨改性木葡聚糖(mXG)凝胶对SD大鼠术后腹腔粘连的预防作用。方法清洁级SD雄性大鼠48只,体质量(200±20)g,随机分为3组(n=16),制作大鼠腹壁-盲肠损伤粘连模型。A组为mXG凝胶组,将1 mL 4%(w/v)的mXG溶液注射于腹壁和盲肠创面,待凝胶完全形成后关腹;B组为商业膜组,关腹前将2cm×3 cm大小的壳聚糖防粘连膜覆盖于腹壁创面;C组为对照组,关腹前将1 mL生理盐水注射于腹壁和盲肠的创面。观察3组大鼠一般情况,术后1、2周每组各取8只大鼠,行大体观察及组织学观察,双盲法行粘连程度分级。结果术后各组大鼠均无死亡,术后1周,A组盲肠的创面恢复良好,散在炎性细胞浸润,浆膜少量纤维结缔组织增生;B组受损的腹壁和盲肠间出现了一定程度的粘连,纤维结缔组织及胶原增生较多;C组受损的腹壁和盲肠形成了比较严重的粘连,粘连组织致密且比较成熟,纤维结缔组织大量增生。根据Nair五级分级标准及组织学观察分级,A组与B、C组差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。术后2周,A组多数均未发生粘连,而且盲肠完全恢复正常,腹壁创面也恢复良好,纤维结缔组织及胶原增生少;C组腹腔粘连严重,纤维结缔组织及胶原大量增生;B组介于两者之间,3组分级差异有统计学意义(P<0.05)。术后1周及2周,免疫组化结果显示转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达A组较弱,C组最强,B组介于两者之间。结论m XG凝胶在粘连早期阶段就起到了防粘连作用,并且随时间的延长防粘连效果增强,起到了创面愈合的作用。

胰岛素抵抗与慢性肝病研究进展

糖尿病是最常见的慢性疾病。据统计,2017年全球约有4.51亿人患有糖尿病,成人患病率高达8.4%,预计到2045年达到9.9%[1]。糖尿病主要有两种类型:1型糖尿病和2型糖尿病(T2DM),其中T2DM占总发病率的90%以上。胰岛素抵抗(IR)是T2DM的一个重要发病机制,是指各种原因使胰岛素在其靶器官(如肝脏、脂肪、肌肉、胰腺和脑等),降低葡萄糖摄取和利用的效率,导致血糖升高。肝脏是调控血糖和脂质均衡的中央器官,若肝脏出现疾患可导致糖代谢紊乱,进而导致糖尿病的发生。T2DM同时会伴有IR和高血糖,而后两者可加快病毒性肝炎和酒精性脂肪肝及自身免疫性肝病的进程。另外,肥胖(脂肪堆积)也是T2DM的主要发病因素,而T2DM与肥胖又是原发性肝癌的高危因素[2]。因此,IR是慢性肝病的重要病理生理学基础,不仅导致T2DM,同时还可加快肝病进程。反之,肝脏疾病,包括肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝癌甚至肝移植,对糖平衡产生影响,甚至可诱发糖尿病的发生。

刺五加苷B影响EMT进程抑制肺癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨刺五加苷B对人肺癌A549和H460细胞迁移侵袭的影响。方法:采用不同浓度的刺五加苷B(0、5、15、20、25、30、35、40、45 mmol/L)作用肺癌细胞A549和H460,同时设置对照组和空白组,筛选出最佳作用浓度。用最佳药物浓度刺五加苷B作用肺癌细胞进行细胞划痕实验、Transwell迁移侵袭实验,观察细胞划痕面积变化和穿过Transwell小室的细胞数量,探究刺五加苷B对肺癌细胞A549和H460迁移和侵袭的影响。应用Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Slug、Snail表达情况,探究刺五加苷B对肺癌A549和H460细胞上皮间质转化的作用。结果:刺五加苷B明显抑制肺癌A549和H460细胞划痕面积减少,穿过Transwell小室和基质胶的细胞数量减少。与对照组相比刺五加苷B明显上调上皮标志E-cadherin蛋白表达,并发现EMT转录因子Slug和Snail表达水平显著降低。结论:刺五加苷B能明显抑制肺癌A549和H460细胞生长、并通过影响EMT进程抑制细胞迁移侵袭。

刺五加内生放线菌Streptomyces tauricus CWJ-107活性次级代谢产物研究

目的从药用植物刺五加内生放线菌Streptomyces tauricus CWJ-107次级代谢产物中发现抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)活性良好的天然产物。方法采用16S r RNA基因序列分析对菌株CWJ-107进行初步分类鉴定,大量发酵获得粗提物,通过硅胶柱层析、LH20凝胶柱层析、薄层色谱以及高效液相色谱等方法,以抗MRSA活性导向进行目标化合物的分离纯化,利用核磁共振和质谱鉴定化合物结构,并利用微孔板法测定化合物最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),对其抗MRSA活性进行评价。结果菌种鉴定结果显示菌株CWJ-107为Streptomyces tauricus,从菌株CWJ-107的菌丝体中分离得到1个抗MRSA活性化合物107-A,经波谱解析证实其结构为糖基化蒽醌类化合物cinerubin B,抗菌活性测定结果证实其具有良好的抗MRSA活性,MIC值为1μg/m L。结论从刺五加内生放线菌CWJ-107的代谢产物中分离到的107-A经结构鉴定为糖基化蒽醌类化合物cinerubin B,除此之外,本文首次报道了该化合物的抗MRSA活性。

2013-2014年唐山地区致病皮肤真菌流行病学分析

目的了解2013-2014年唐山地区致病皮肤真菌流行病学情况。方法对有代表性的三家医院在2013-2014年按统一方法分离的致病真菌进行分析。结果综合医院分离致病真菌697株,11种菌种;专科医院分离致病真菌326株,9种菌种;基层医院分离致病真菌130株,7种菌种。三家医院共成功分离致病真菌1 153株,12种菌种,其中以白念珠菌居首,红毛癣菌和须癣毛癣菌分列第2位和第3位。结论综合医院致病真菌的分布情况基本代表本地区致病真菌的分布情况;白念珠菌是唐山地区最常见的致病真菌,在临床防治中需重视。

沉默CD276基因促进宫颈癌Caski细胞的凋亡及作用机制研究

目的:探究免疫共刺激分子CD276在宫颈癌细胞(Caski、Hela)和人源胚胎肾细胞(293T)中的表达量,以及靶向沉默CD276基因来研究CD276对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡影响以及作用机制。方法:荧光定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测CD276在293T、Caski、Hela细胞的表达情况。通过脂质体Lipofectamine 2000体外转染controlsiRNA和CD276 siRNA至宫颈癌Caski细胞中,实验分为对照组、空转染组、CD276 siRNA组,采用Western blot检测Caski细胞中CD276蛋白的表达量。用细胞计数法(CCK-8)、膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)&碘化丙啶(PI)双染法检测Caski细胞的增殖、凋亡,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液上清中IL-8、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白水平。结果:免疫共刺激分子CD276在Caski、Hela细胞中的表达量显著高于293T细胞(0. 754±0. 068 vs 0. 261±0. 032; 0. 852±0. 087 vs 0. 279±0. 026; P<0. 05); Caski细胞中的表达量显著高于Hela细胞(P<0. 05)。与对照组相比,CD276 siRNA组细胞中CD276蛋白的表达量明显降低(0. 235±0. 028 vs 0. 863±0. 091,P<0. 05),显著抑制细胞的增殖(0. 326±0. 035 vs 0. 659±0. 068,P<0. 05),诱导其凋亡[(23. 487±2. 579)%vs (5. 489±0. 632)%,P<0. 05],下调IL-8(43. 257±3. 612 vs 125. 369±18. 478)、VEGF(136. 751±13. 269 vs 369. 254±28. 157)的蛋白水平(P<0. 05)。结论:CD276在宫颈癌细胞中的表达量显著增加,沉默CD276基因的表达,明显抑制Caski细胞的增殖,促进其凋亡,其作用与IL-8、VEGF的蛋白水平有关。

手足口病患儿机体儿茶酚胺类激素水平的研究

目的通过比较手足口病患儿机体儿茶酚胺类激素的水平及变化规律,探讨此类激素在手足口病患儿疾病发展过程中引起呼吸循环衰竭的病理生理机制。方法筛选2014年6月至9月唐山市妇幼保健院收治的146例手足口病患儿为研究对象,将患儿分为3组:普通组、重症组、危重症组,所有患儿行肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的检测。对照组为本院儿童保健科门诊体检健康儿童。结果危重症组、重症组患儿血清3种儿茶酚胺水平均明显高于普通组、对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。危重症组患儿血清NE,DA水平与重症组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。普通组患儿血清儿茶酚胺水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。危重症组患儿尿液DA水平明显高于普通组、对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论手足口病普通病例存在向重症发展的可能,对手足口发病期患儿进行儿茶酚胺类激素的检测,有助于对病情的评估,可以作为疾病进展的预警指标。

西藏沙棘根瘤及根际土壤放线菌分离及抗菌活性研究

探索西藏林芝与山南地区沙棘根瘤及其根际土壤样品中放线菌的多样性及抗菌活性,为天然产物药物研发提供新的微生物资源。采用稀释涂布法对10份样品中可培养放线菌进行分离,后经菌株16S rRNA序列测序,以邻接法(neighbor-joining method,N-J)构建系统发育树分析放线菌种属多样性;利用微孔板法对代表性菌株进行发酵培养及抗菌活性评价;进一步利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)考察活性菌株代谢产物情况。从10份样品中分离到112株放线菌,分属于7个目12科23个属,优势菌属为链霉菌属(Streptomyces);抗菌活性结果表明有17株放线菌至少对一种检定菌有抗菌活性,阳性抑菌率为36.9%。有16株放线菌对临床常见的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)有较强抑制活性,其中13株放线菌对MRSA抑制率超过阳性对照药万古霉素;另外有7株放线菌对耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)有抑制活性,其中Streptomyces sp.XZ19-363对CRAB抑菌作用最强,抑制率为91.3%,UPLC-MS分析显示,具有广谱抗菌活性的菌株在不同培养基中产生了较为丰富的次级代谢产物。西藏林芝与山南地区沙棘根瘤及其根际土壤中可培养放线菌资源丰富多样,同时具有较好的抗菌活性且代谢产物丰富。

刺五加内生放线菌Streptomyces sp. CWJ-256次生代谢产物研究

目的研究刺五加植物内生放线菌CWJ-256次级代谢产物及其生物活性。方法采用16S rRNA基因同源进化分析对菌株CWJ-256进行初步分类鉴定,采用抗菌活性追踪方式,对CWJ-256发酵液通过硅胶柱层析、凝胶柱层析、薄层色谱显色以及高效液相色谱等方法对目标化合物分离纯化,利用核磁共振波谱法和质谱法鉴定化合物的结构。采用MTT法测试其抗肿瘤细胞增殖活性。基于Gluc报告系统对化合物3的体外抗流感病毒药效学进行初步评价。结果菌种鉴定显示Streptomycessp.CWJ-256为生黑孢链霉菌Streptomyces melanosporofaciens;从该菌株的发酵代谢产物中分离得到3个活性化合物,经结构鉴定为efomycin G(化合物1)、11,11'-O,O-dimethylelaiophylin(化合物2)、elaiophylin(化合物3);抗肿瘤细胞增殖活性评价显示,化合物1和3对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231具有增殖抑制作用(IC50分别为4.385和2.118μmol/L)。体外抗流感病毒药效学评价显示,化合物3对流感病毒A/WSN/33(H1N1)具有一定抑制效果。结论刺五加内生放线菌Streptomycessp.CWJ-256可产生多个洋橄榄叶素类次生代谢产物,显示出抗细胞增殖、抗病毒等多种活性。

刺五加内生放线菌Planomonospora sp.12代谢产物研究及其菌种鉴定

目的分离、纯化及鉴定放线菌株12发酵液中抗菌活性代谢产物并对菌株12进行菌种鉴定。方法采用硅胶柱层析、高效液相色谱等方法对菌株12的活性代谢产物进行分离纯化及纯度分析,并以质谱、核磁等方法对获得的组分进行结构鉴定;采用16s r RNA基因序列检测并构建进化树对菌株进行鉴定。结果从菌株12的发酵液中分离到1个活性化合物12-A,经波谱分析证实其结构和硫肽类化合物siomycin A相同,活性测定表明其对革兰阳性菌、真菌有较明显的抑制活性;经菌种鉴定,菌株12归为Planomonospora属放线菌。结论从菌株12的发酵液中分离得到的化合物12-A为已知化合物siomycin A。

microRNAs调控肿瘤相关成纤维细胞的研究进展

肿瘤相关成纤维细胞(tumor associated fibroblasts, TAFs)是肿瘤微环境中的重要成员之一,通过调控自身细胞因子的分泌水平和直接的细胞-细胞相互作用在恶性肿瘤的发生发展中扮演重要角色,而微小RNA(microRNA,miRNA)对TAFs活化和肿瘤进展有重要作用。本文综述了TAFs的基本特性、miRNA对TAFs的调控及其在肿瘤进展中的作用。

锌指蛋白185对胶质瘤细胞增殖影响的研究

目的：探讨锌指蛋白ZNF185在人脑胶质瘤细胞增殖中的作用。方法标本取自2011年1月—2013年12月于唐山市工人医院就诊，经病理确诊为胶质瘤患者的肿瘤组织，以瘤旁组织作对照。提取不同组织总蛋白， Western-blot检测ZNF185的表达。提取瘤旁组织总RNA，反转录扩增ZNF185编码序列并克隆至pEGFPC2质粒，构建ZNF185表达载体。采用Lipofactamine2000将ZNF185表达载体转染人胶质瘤细胞系SF767，以转染pEGFPC2空载体细胞作为对照。采用流式细胞仪检测细胞周期变化；MTT法检测细胞增殖活性。结果与瘤旁组织相比， ZNF185在人脑胶质瘤组织中表达显著降低（P＜0.01）；转染ZNF185表达载体的胶质瘤细胞与对照细胞相比ZNF185的表达显著增加（P＜0.01）；过表达ZNF185导致SF767细胞G0～G1期细胞比例显著增加（P＜0.05），而S期细胞比例减少（P＜0.05）。同时，过表达ZNF185也导致SF767细胞的增殖速度显著降低（P＜0.05）。结论ZNF185在人脑胶质瘤细胞中发挥抑制细胞增殖的作用。

帕金森病动物模型神经炎症反应与损伤的研究进展

帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）是一种常见的慢性神经元退化性疾病。目前,PD的发病机制尚不清楚,为更好地理解其发病机制,我们通过建立PD的多种动物模型来模拟PD病的发病过程,为PD发病机制的研究提供实验依据。近年来有报道小胶质细胞是脑组织中主要的免疫细胞,在中枢神经系统免疫反应中起重要作用。小胶质细胞静息状态下对机体起到一定保护作用,但其长期慢性激活有神经毒性,对机体会造成损伤。

1株发光杆菌Photorhabdus asymbiotica的次级代谢产物研究

目的研究1株发光杆菌Photorhabdus asymbiotica抗革兰阴性菌的活性次级代谢产物。方法以抗革兰阴性菌活性为导向,采用大孔吸附树脂、MCI柱色谱,以及反相高效液相色谱等多种分离纯化技术,利用HR-ESIMS和NMR等波谱学方法,分离Photorhabdus asymbiotica发酵液中的化合物并鉴定其结构。结果从菌株Photorhabdus asymbiotica中获得3个次级代谢产物,并鉴定为darobactin(1)、环(L-色氨酸-L-脯氨酸)(2)和环(L-脯氨酸-L-苯丙氨酸)(3)。其中化合物1对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌均具有显著的抗菌活性。结论化合物1为发光杆菌Photorhabdus asymbiotica中主要的抗革兰阴性菌活性化学成分。

生物传感器检测牛奶病原微生物的研究进展

牛奶中病原微生物的含量是衡量牛奶质量的重要指标之一,生物传感器在牛奶病原微生物检测方面有较好的优势。介绍了生物传感器的组成和原理,并详细综述了近几年电化学生物传感器和质量敏感型生物传感器在牛奶中病原微生物的定量检测中的研究现状,探讨了未来的发展趋势。

刺五加内生放线菌的分离与多样性研究

从采集自5个不同地点的刺五加全株植物,采用8种分离培养基,从植株不同部位分离,经BOX-PCR排重后,共得到内生放线菌265株.从不同培养基分离出的放线菌数目有较大差异.LNMS培养基分离菌株最多,60株.海藻糖-无机盐培养基分离最少,17株.从刺五加植株根及根茎分离到的放线菌数量最多,占菌株总数的77%,叶中分离的最少,为6%.从吉林柳河和吉林梅河口植株内分离的菌株较多.利用16SrRNA基因序列分析鉴定,菌株分属于7个亚目,9个科,9个属.

DNMT1和CCNA1在不同级别宫颈病变组织中的表达及临床意义

目的探讨DNMT1和CCNA1在不同级别宫颈病变组织中的表达及临床意义。方法选取病理学诊断的正常宫颈(NC)、宫颈低级别上皮内病变(LSIL)、宫颈高级别上皮内病变(HSIL)、宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织各30例,采用Western blot法、实时荧光聚合酶链反应(q RT-PCR)法检测各组DNMT1、CCNA1 mRNA和蛋白的表达。结果 DNMT1 mRNA和蛋白表达量在LSIL、HSIL及SCC组织中均高于NC组织(F=117.93,P<0.05;F=61.24,P<0.05),随着病变程度的增加,DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平逐渐上升(χ~2趋势=26.25,P<0.05;χ~2趋势=26.60,P<0.05)。CCNA1 mRNA和蛋白的表达水平在HSIL、SCC组织中均低于NC、LSIL组织(F=77.04,P<0.05;F=57.15,P<0.05),随着病变程度的增加,CCNA1 mRNA和蛋白表达量逐渐下降(χ~2趋势=64.19,P<0.05;χ~2趋势=60.24,P<0.05)。DNMT1、CCNA1 mRNA和蛋白在LSIL、HSIL、SCC组织中的表达呈负相关(r=-0.75、-0.56,P<0.05)。结论 DNMT1 mRNA、蛋白的高表达,CCNA1 mRNA、蛋白低表达,二者可能与宫颈癌的发生发展有关。

脂肪间充质干细胞对脑出血大鼠自噬的影响及机制探究

目的探讨脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)大鼠自噬的影响并探讨其可能的作用机制。方法在无菌环境下分离健康SD大鼠腹股沟周围脂肪,体外培养ADSCs,并培养至第4代,应用流式细胞仪对ADSCs表面标志物进行测定。雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、ICH组、ADSCs组。ICH组和ADSCs组大鼠建立ICH模型,Sham组同样的方法建立模型,但不注射自体血。建模术后2 h,ADSCs组经右侧纹状体区域注射给予5μL细胞悬液(1×10^(5)个细胞),Sham组和ICH组给予等体积的生理盐水。建模成功后分别于第12 h、1 d、3 d、5 d、7 d对大鼠进行Longa神经功能评分,处死大鼠后,HE染色观察大鼠脑组织病理改变、尼氏染色观察未受损神经元数量、测定脑组织水含量、免疫组织化学染色法检测细胞内自噬相关蛋白人重组自噬效应蛋白(recombinant human beclin 1,Beclin1)和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(in vitro kinase assay for serine/threonine protein kinase AKT/mammalian target of rapamycin,AKT/mTOR)信号通路磷酸化的表达情况。蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测1 d、3 d脑组织内LC3、Beclin1、AKT/mTOR信号通路磷酸化蛋白表达水平。结果流式细胞仪检测所培养的大鼠ADSCs中黏附分子CD29、CD90呈阳性表达,CD45呈阴性表达。与Sham组相比,ICH组大鼠脑组织病理症状均明显增加,Longa评分、脑组织含水量、受损神经元数量,自噬相关蛋白LC3和Beclin1、AKT/mTOR信号通路磷酸化阳性细胞表达及蛋白表达水平均明显上调(P<0.05)。与ICH组相比,ADSCs组大鼠脑组织病理症状均明显减轻,Longa评分、脑组织含水量、受损神经元数量明显降低(P<0.05),自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达水平明显下降(P<0.05),AKT/mTOR信号通路磷酸化阳性细胞表达及蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论ADSCs移植治疗脑出血可发挥神经保护作用,这种作用可能与通过激活AKT/mTOR信号通路抑制ICH大鼠细胞自噬水平进而减轻大鼠脑损伤程度有关。

新型白念珠菌生物被膜抑制剂IMB-H12的活性和作用机制研究

白念珠菌是真菌感染疾病中的主要病原菌,生物被膜的形成是白念珠菌毒力特征,同时也是重要的耐药机制,开发具有生物被膜抑制活性的抗真菌药物具有重要的意义。本研究对前期获得的新型的具有生物被膜抑制活性的化合物1-(cyclopentylamino)-3-(4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy)propan-2-ol(简称IMB-H12)进行了深入的研究。IMB-H12对生物被膜的形成具有良好的抑制活性,并且对成熟的生物被膜具有一定的清除作用;初步作用机制研究发现IMB-H12能够抑制酵母-菌丝相的转换、抑制菌丝体的形成,降低白念珠菌的黏附活性和疏水性;IMB-H12能够诱导生物被膜菌细胞壁成分含量的改变,下调多个与黏附和菌丝形成相关的基因的表达。因此,对该化合物的进一步研究,有望发现新型的具有抗真菌活性的先导化合物。

解脂耶氏酵母合成萜类化合物的研究进展

解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)是一种遗传背景清晰、基因编辑工具完备的非常规油脂酵母。萜类化合物是以异戊二烯为基本结构单元,广泛存在自然界的天然次级代谢产物。近年来随着合成生物学的高速发展,代谢工程改造解脂耶氏酵母合成萜类化合物越来越受到人们的关注。本文从增强前体供应、亚细胞器合成和碳源利用等方面对代谢工程改造解脂耶氏酵母合成萜类化合物进行综述,并对未来可能的研究方向进行展望,为后续研究工作提供参考。