华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0.15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0.15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。

人粪便中UNC5C基因甲基化在早期诊断大肠癌中的临床意义

目的探讨人粪便中UNC5C基因甲基化在临床上早期诊断大肠癌的临床意义。方法选取2011年12月至2013年12月该院收治的大肠癌病人52例,健康体检者40例,对UNC5C启动子的两个区域(区域1和区域2),使用结合重亚硫酸盐限制性内切酶法(COBRA)研究对象的粪便标本中UNC5C基因甲基化状态。结果广泛UNC5C的甲基化及部分甲基化在大肠癌患者粪便、健康体检者中分为54%(28/52)和81%(42/52);0%(0/40)和10%(4/40)。无论广泛还是部分UNC5C的甲基化率大肠癌患者粪便的检出率均明显高于健康体检者(P<0.05)。人粪便UNC5C基因甲基化状态改变与大肠癌患者的性别、年龄、肿块大小没有明显的相关性(P>0.05)。结论无论广泛还是部分UNC5C的甲基化率大肠癌患者粪便的检出率均明显高于健康体检者,而广泛甲基化为大肠癌所特有。

UNC5C基因启动子的甲基化状况与大肠癌UNC5C的相关性分析

目的探讨UNC5C基因启动子的甲基化状况与大肠癌UNC5C的相关性。方法选择河北省唐山市开滦总医院肿瘤科2010年2月至2013年3月共54例散发性大肠癌及相关正常黏膜组织,以及6个大肠癌细胞株和纤维细胞株（FCL）作为研究对象。对研究对象实施基因mRNA和甲基化分析。结果 UNC5A和UNC5B的mRNA,在所检测的大肠癌细胞株中均有表达。而UNC5C除FCL外,所有的癌细胞株中均无mRNA表达。在大肠癌组织中UNC5C的甲基化明显高于正常黏膜,差异有统计学意义（P〈0.05）。UNC5C基因在Ⅰ~Ⅱ期,以及Ⅲ~Ⅳ期的甲基化水平均显著高于未甲基化水平,均差异有统计学意义（P〈0.05）。依照Spearman法进行相关性分析,UNC5C缺陷与大肠癌疾病呈正相关（r=0.856,P〈0.05）。结论 Netrin-1受体UNC5C缺陷与大肠癌具有一定相关性。

孤立性肺结节的诊治分析

目的：总结孤立性肺结节（SPN）的诊断和治疗体会。方法回顾性分析我院2010年1月-2014年5月手术治疗的120例 SPN 患者的临床资料。结果术后病理检查提示良性病变30例，包括结核瘤10例，错构瘤8例，炎性假瘤6例，硬化性血管瘤2例，肺囊肿2例，霉菌球1例，淋巴结1例；恶性病变90例，包括腺癌56例，鳞癌26例，腺鳞癌3例，小细胞癌1例，大细胞癌1例，转移癌3例。SPN 良、恶性患者年龄、临床症状、吸烟指数、结节直径、毛刺分叶症、结节边界、胸膜牵拉、胸膜皱缩比较差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论患者年龄、临床症状、吸烟指数、结节直径、毛刺分叶症、结节边界模糊、胸膜牵拉、胸膜皱缩对判断 SPN 的良恶性有重要意义；对于可疑恶性病变者，应积极手术治疗。

粪便DNA亚硫酸盐快速处理方法的探讨

目的探讨从微量的粪便中运用亚硫酸盐法成功处理DNA甲基化的方法,寻求最适宜的亚硫酸盐的浓度以及处理时间。方法收集我科员工新鲜粪便标本(经胃镜及结肠镜证实无消化道肿瘤),经亚硫酸盐方法处理后,对大肠埃希菌进行PCR检测,检测结果使用ABI310测序仪器进行测序。结果在最终浓度为2.63 mol亚硫酸盐、并经过95℃15min,4℃10 min,75℃60 min处理;2.11 mol亚硫酸盐经过95℃15 min,4℃10 min,75℃165 min处理均能将E.coli DNA的胞嘧啶(C)转变为尿嘧啶(U)。结论为从粪便中检测人类相关基因甲基化提供了快捷、科学的依据。

粪便中SFRP2基因甲基化与大肠癌的相关性

目的探讨粪便中的分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)2基因甲基化对大肠癌患者的诊断价值。方法选取2011年12月至2013年12月该院经病理检查确诊的52例大肠癌病人及32例结肠镜阴性的健康者(对照组)。通过亚硫酸氢盐的限制酶法(COBRA)检测大肠癌52例粪便中SFRP2基因启动子两个区域(区域1和区域2)甲基化状态,分析SFRP2基因甲基化与肿瘤临床病理因素的关系。结果大肠癌患者及健康者粪便中广泛甲基化、部分甲基化及无甲基化分别为59.6%(31/52)、84.6%(44/52)、15.4%(8/52)和12.5%(4/32),25.0%(8/32)、75.0%(24/32);广泛和部分SFRP2的甲基化率在大肠癌患者粪便的检出率均明显高于健康体检者(P<0.05);SFRP2基因甲基化与大肠癌患者性别、肿瘤分期、浸润程度无显著关联。结论 SFRP2基因甲基化是大肠癌进展过程中的早期事件,粪便SFRP2基因甲基化有望成为早期无创诊断大肠癌的新途径。

miR-93-5p对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的研究miR-93-5p对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养非小细胞肺癌细胞和正常肺细胞,检测细胞中miR-93-5p、P53表达水平,将A549细胞分为miR-93-5p低表达(miR-93-5p inhibitor)组、阴性对照(NC)组和空白对照(CK)组,转染48 h后,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移能力,生物信息学预测P53是miR-93-5p的直接靶标,进一步采用双荧光素酶实验进行验证,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测miR-93-5p低表达对P53蛋白表达及STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果与正常肺细胞比较,H1299、HCC827、A549肺癌细胞中miR-93-5p表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),P53表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-93-5p inhibitor后,A549细胞中miR-93-5p、p-STAT3、JAK、STAT3表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),P53相对表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05);与CK组、NC组相比,A549细胞的增殖、迁移能力均下降,差异有统计学意义(P<0.05);TargetScan数据库预测显示P53是miR-93-5p的直接靶标,双荧光素酶报告基因试验证实二者存在靶向关系。Western Blot结果显示:过表达P53后,与CK组、NC组相比,A549细胞中P53蛋白相对表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05),p-STAT3、JAK、STAT3蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MiR-93-5p可通过靶向P53调控STAT3信号通路的激活,进而调控肺癌A549细胞的增殖与迁移。

替吉奥治疗老年胃癌患者的临床疗效

目的探讨替吉奥治疗老年胃癌患者的疗效及不良反应。方法选取2008年7月至2012年5月收治的年龄≥60岁的老年胃癌患者126例,随机分为观察组(替吉奥治疗组,63例)和对照组(63例)。观察组患者采用替吉奥胶囊治疗,对照组采用奥沙利铂联合亚叶酸钙和氟尿嘧啶方案治疗。治疗结束后,对两组患者的有效率、不良反应和治疗满意度等分别进行统计分析。结果观察组患者的总有效率为88.9%,对照组患者的总有效率为71.4%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。患者主要的不良反应为肝功能损伤、骨髓抑制和胃肠道反应,观察组患者出现III～IV级不良反应者8例(12.7%),对照组为15例(23.8%),两组差异有统计学意义(P<0.05)。对患者的治疗满意度统计显示,观察组患者的总满意度为61.9%,对照组为55.6%,两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论替吉奥治疗老年胃癌患者疗效显著,不良反应较低,患者满意度较高。

粪便中Ras相关序列家族2A基因甲基化与大肠癌的关系

目的探讨粪便中的Ras相关序列家族2A（RASSF2A）基因甲基化对大肠癌患者临床诊断的价值。方法使用改良的COBRA法对102例大肠癌粪便中RASSF2A基因启动子两个区域（区域1和区域2）甲基化状态进行了分析。51例结肠镜阴性的健康者为对照组。同时探讨RASSF2A基因甲基化与肿瘤临床病理特征的关系。结果大肠癌患者粪便中广泛甲基化、部分甲基化及无甲基化检出率分别为63%（64/102）、87%（89/102）和13%（13/102），对照组分别为6%（3/51）、22%（11/51）和78%（40/51）。大肠癌患者粪便中广泛甲基化、部分甲基化的检出率明显高于健康体检者，无甲基化检出率明显低于对照组，差异有统计学意义（P＝0.000）。RASSF2基因甲基化与大肠癌患者性别、肿瘤分期、浸润程度之间无显著相关。结论RASSF2A基因甲基化是大肠癌进展过程中的早期事件，粪便RASSF2基因甲基化有望成为早期无创诊断大肠癌的新途径。