表达甲型H1N1流感病毒血凝素抗原的DNA疫苗构建及其免疫原性评价

目的构建表达甲型HIN1流感病毒血凝素（hemagglutinin，HA）抗原的DNA疫苗，并在小鼠中测试其免疫原性。方法运用人密码子优化技术合成甲型HIN1流感病毒HA序列，并转移至DNA疫苗载体，用Westernblotting检测其表达效率。采用单纯随机抽样方法把BALB／c小鼠分成DNA疫苗组和对照组。用DNA疫苗免疫疫苗组小鼠，免疫后取小鼠血清和脾细胞，分别用ELISA方法和酶联免疫斑点试验（ELISPOT）方法检测血清中的特异性抗体应答和脾细胞中的特异性T细胞应答，最后用血凝抑制（hemagglutination inhibition，HI）试验和假病毒中和试验分别检测血清中的HI抗体和中和抗体应答。采用t检验作两组之间比较。结果所构建的DNA疫苗能够高效表达HA蛋白。免疫小鼠后能有效诱导T细胞免疫应答[429．0±113．4斑点形成细胞（spot—forming cell，SFC）／10。脾细胞]，血清结合抗体滴度为16127．0±2698．0，HI抗体滴度为100．8±16．9，所有数据均显著高于载体对照（分别为t=3．863，P=0．0042；t=5．734，P=0．0002；t=6．018，P=0．0001）。DNA疫苗能活化产生高水平的针对同源H1N1毒株的中和抗体，但不能活化产生针对异源H1N1毒株的中和抗体。结论本研究构建的DNA疫苗有较好的免疫原性，并能诱导一定水平的保护性抗体产生。