胰岛素抵抗小鼠小肠类器官模型构建及黄诺玛苷对此模型肠黏膜屏障的保护作用

目的构建胰岛素抵抗(IR)小鼠小肠类器官模型,研究两色金鸡菊黄酮类成分黄诺玛苷对肠黏膜屏障的保护作用。方法①构建C57BL/6J和db/db小鼠小肠类器官模型,3D免疫荧光染色观察小肠类器官细胞核核抗原(Ki-67)、上皮细胞E钙黏蛋白(E-cad)、溶菌酶(Lyz)和黏蛋白2(MUC-2)表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测纤连蛋白(Fn)、胰高血糖素样肽1(GLP-1)和肽YY(PYY)mRNA表达;Western印迹法检测Fn,GLP-1和PYY蛋白表达;ELISA检测Lyz分泌水平。②将构建的小鼠小肠类器官分为5组:以C57BL/6J小鼠小肠类器官为正常对照组,db/db小鼠小肠类器官为IR模型组,db/db小鼠小肠类器官用黄诺玛苷25,50和100μmol·L^(-1)处理48 h为IR模型+黄诺玛苷组,RT-qPCR检测各组类器官Lyz mRNA表达,Western印迹法检测Lyz蛋白表达。结果①C57BL/6J和db/db小鼠小肠类器官培养第6天形成管腔结构清晰的环状结构,IR小鼠小肠类器官模型建立成功。3D免疫荧光检测结果显示,建立的小肠类器官均表达Ki-67,E-cad,Lyz和MUC-2;RT-qPCR结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Fn mRNA表达显著升高(P<0.05),GLP-1和PYY mRNA表达显著降低(P<0.05);Western印迹法结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Fn蛋白表达显著升高(P<0.01),GLP-1(P<0.01)和PYY(P<0.05)蛋白表达显著降低;ELISA结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Lyz分泌量显著降低(P<0.01)。②RT-qPCR结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Lyz mRNA表达水平显著降低(P<0.01);与IR模型组相比,IR模型+黄诺玛苷50和100μmol·L^(-1)组Lyz mRNA表达水平显著增加(P<0.05,P<0.01);Western印迹法结果显示,与正常对照组相比,IR模型组Lyz蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与IR模型组相比,IR模型+黄诺玛苷50和100μmol·L^(-1)组Lyz蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论构建的IR小鼠小肠类器官模型为探讨药物干预修复肠黏膜屏障的病理生理机制提供了更完善的体外研究模型。黄诺玛苷可能通过逆转IR小鼠Lyz表达水平的降低维护肠黏膜屏障,进而发挥改善IR作用。

卡瑞利珠单抗联合化疗对中晚期食管癌的疗效、安全性分析及NLR对疗效的预测价值

目的探讨卡瑞利珠单抗联合化疗在中晚期食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)治疗中的临床疗效及安全性,分析外周血中性粒细胞淋巴细胞比值(neutrophil lymphocyte ratio,NLR)对卡瑞利珠单抗联合化疗在ESCC治疗效果的预测价值。方法回顾性分析在喀什地区第一人民医院接受卡瑞利珠单抗联合化疗(研究组92例)或单纯化疗(对照组76例)治疗的中晚期ESCC患者168例。分析两组客观缓解率(objective remission rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、无进展生存期(progression free survival,PFS)、总生存期(overall survival,OS)和不良反应,采用Kaplan-Meier法进行生存分析。分析NLR对卡瑞利珠单抗联合化疗治疗ESCC的疗效预测价值。结果研究组完全缓解(complete response,CR)、部分缓解(partial response,PR)、疾病稳定(stable disease,SD)、ORR、DCR、新辅助化疗后手术等指标均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组及对照组的中位PFS(8.7个月vs 4.6个月)及中位OS(14.8个月vs 11.2个月)较对照组明显提高(P<0.001)。研究组部分不良反应与对照组相比发生率较高(P<0.05),但在可以控制的范围内,安全性尚可。高NLR2组患者PFS率及OS率比低NLR2组患者低(P<0.001),ROC曲线NLR2曲线下面积为0.91(P<0.001),NLR2≥3.12是ESCC患者预期PFS及OS生存获益的危险因素(P<0.001)。结论卡瑞利珠单抗联合化疗相比单纯化疗延长中晚期ESCC患者的PFS及OS,提高ORR、DCR,安全性良好。NLR2对卡瑞利珠单抗联合化疗治疗效果有良好的预测价值。