草乌甲素对LPS诱导的RAW264.7细胞抗炎作用及相关机制研究

目的探究草乌甲素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用及相关机制。方法使用不同浓度的草乌甲素处理RAW264.7细胞24 h,用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)检测RAW264.7细胞活力并筛选草乌甲素对RAW264.7细胞活性的安全剂量范围;使用最大安全剂量的草乌甲素统一预处理RAW264.7细胞2 h,再用LPS刺激细胞,于不同药物作用时间点分别收取上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α与巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平;Western blot法检测草乌甲素对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS、COX-2蛋白表达水平及对NF-κB、MAPK信号通路活化的影响。结果草乌甲素在小于150μg/mL时对RAW264.7细胞活力没有显著影响;ELISA结果显示与LPS组相比草乌甲素在各作用时间点均能有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6与MCP-1的含量(P<0.05),其中草乌甲素在作用时间分别为30 h、5 h时对TNF-α和IL-1β的抑制作用最明显(P<0.05);WB检测结果表明草乌甲素能显著抑制iNOS、COX-2、TLR4的表达以及NF-κB和MAPK通路的活化(P<0.05),其中草乌甲素作用时间48 h时抑制作用最明显(P<0.05)。结论草乌甲素可能通过抑制TLR4的表达以及NF-κB和MAPK的活化减少炎症因子的释放从而发挥抗炎作用。

草乌甲素对乙醛诱导的LX-2细胞ECM分泌及相关蛋白表达的影响

目的:探讨草乌甲素(BLA)对乙醛诱导的人LX-2肝星状细胞(LX-2细胞)外基质及其相关蛋白的影响。方法:将细胞分为空白对照组(NC组)、乙醛组(模型组)和BLA+乙醛组(BLA组),乙醛浓度为400μmol/L,BLA浓度为18.75μg/mL。对NC组和BLA组LX-2细胞进行形态学评价和DAPI染色,ELISA检测三组Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)的浓度,WB检测三组α-SMA、TGF-β1、MMP-1、TIMP-1的蛋白含量。结果:乙醛组Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的含量高于对照组(P<0.05),而BLA组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ含量低于乙醛组(P<0.05)。乙醛组TGF-β1、α-SMA和TIMP-1蛋白含量均高于对照组(P<0.05),而MMP-1蛋白含量低于对照组(P<0.05);BLA组TGF-β1、α-SMA和TIMP-1蛋白含量均低于乙醛组(P<0.05),而MMP-1蛋白含量高于乙醛组(P<0.05)。结论:BLA可能通过抑制TGF-β1信号通路来抑制LX-2细胞的激活和增殖,并通过降低MMP-1/TIMP-1比值来降低Col-Ⅰ和Col-Ⅲ的含量。