Rad对心肌营养素1诱导心肌细胞肥大作用的实验研究

目的探讨小G蛋白Rad对心肌营养素1(CT-1)诱导心肌细胞肥大作用的影响。方法 2011年6月—2013年3月,选取新生健康雄性SD乳鼠60只。构建载有Rad基因的腺病毒载体(Ad-Rad)、含有编码绿色荧光蛋白基因的空白腺病毒载体(Ad-GFP)。取乳鼠心脏并剪碎,进行心肌细胞原代培养。采用随机数字表法将提取的原代心肌细胞平均分为6组,即空白对照组〔转染磷酸盐缓冲液(PBS),刺激物为PBS〕、Ad-GFP组(转染Ad-GFP,刺激物为PBS)、Ad-Rad组(转染Ad-Rad,刺激物为PBS)、CT-1对照组(转染PBS,刺激物为CT-1)、Ad-GFP+CT-1组(转染Ad-GFP,刺激物为CT-1)、Ad-Rad+CT-1组(转染Ad-Rad,刺激物为CT-1)。转染腺病毒载体48 h后,采用流式细胞仪检测腺病毒载体转染率,并采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Rad、心房钠因子(ANF)、β肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达水平,Western blotting法检测Rad表达水平。结果腺病毒载体转染率为95.51%。Ad-Rad组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05);Ad-Rad+CT-1组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05)。CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组ANF mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组(P<0.05);Ad-Rad+CT-1组ANF mRNA表达水平低于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05)。CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组β-MHC mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、Ad-Rad组(P<0.05);Ad-Rad+CT-1组β-MHC mRNA表达水平低于CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05)。Ad-Rad组Rad表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05);Ad-Rad+CT-1组Rad表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P<0.05)。结论 Rad具有负性调节CT-1诱导心肌细胞肥大的作用。

甘草甜素对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用及其lnc-SNHG5表达的影响

目的:研究甘草甜素对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及其与小核仁RNA宿主基因5(lnc-SNHG5)表达的相关性。方法:H9C2心肌细胞分为4组,正常对照组(Control)、模型组(Hypoxia Reoxygenation,HR)、转染组(Transfection group,TG)、甘草甜素组(Glycyrrhizin group,GP),其中模型组、转染组、甘草甜素组均构建心肌细胞缺氧复氧模型,转染组预先腺病毒转染沉默lnc-SNHG5表达,甘草甜素组预先给药,浓度为40μmol/L,CCK8检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡,qPCR检测lnc-SNHG5表达。结果:与模型组比较,转染组与甘草甜素组细胞存活率均提高(均P<0.05),细胞凋亡率均下降(均P<0.05);与正常对照组比较,模型组lnc-SNHG5表达显著升高(P<0.05),甘草甜素组相较于模型组,lnc-SNHG5表达显著降低(P<0.05)。结论:甘草甜素可能通过抑制lnc-SNHG5的表达发挥对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。