选择性MRCP在胆囊结石术前检查中的价值

目前，伴随微创技术的日趋成熟，腹腔镜胆囊切除术（LC）已经成为治疗胆囊良性疾病的“金标准”，临床病例中胆囊结石合并胆总管结石，其发生率约5%~29%［1］，而有文献报道，LC后胆总管结石残余率约0.18％~0.9％［2，3］。作者对2008年1月至2012年12月本院肝胆外科420例术前有胰腺炎病史，肝功能异常，但B超未发现胆管结石，且胆总管直径〈8mm的患者在LC术前行磁共振胰胆管成像（MRCP）检查，并根据检查结果，采用不同的治疗方法，现将其临床资料整理、分析如下。

miRNA-21在胆囊癌中的表达情况及对胆囊癌细胞增殖活性的影响

目的研究miRNA-21在胆囊癌细胞的表达情况和下调miRNA-21对胆囊癌细胞增殖活性的影响。方法收集50例胆囊癌患者的肿瘤组织和癌旁正常组织,利用荧光定量PCR(q-PCR)检测胆囊癌组织和正常癌旁组织中miRNA-21的表达水平,再以人胆囊癌细胞株为研究对象,转染miRNA-21 inhibitor下调miRNA-21表达水平,标记为miR-21下调组、空白对照组、阴性对照组,使用MTT法检测转染后细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,细胞划痕检测细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blot)法检测10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)、人凋亡相关因子配体(FasL蛋白)的表达情况,q-PCR技术检测PTEN mRNA、FasL mRNA的表达水平。结果胆囊癌患者肿瘤组织中miRNA-21表达水平高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=16.34,P<0.05)。miR-21下调组miRNA-21表达量低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(t分别=4.86、4.59,P均<0.05);MTT法检测结果显示,接种后24 h、48 h、72 h、96 h、120 h,miR-21下调组细胞的光密度值明显低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(t分别=4.35、4.55、6.16、7.46、7.90、4.62、4.56、6.19、7.48、7.80,P均<0.05);miR-21下调组停留在G0/G1期的细胞多于空白对照组和阴性对照组(t分别=12.37、13.25,P均<0.05),而S期和G2期细胞少于空白对照组和阴性对照组(t分别=7.06、8.40、5.71、6.02,P均<0.05);细胞划痕实验结果显示miR-21下调组的胆囊癌细胞划痕愈合率明显低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(t分别=5.77、5.98,P均<0.05);Western-blot结果显示miR-21下调组细胞中PTEN蛋白和FasL蛋白表达量高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(t分别=19.68、19.60、27.45、26.67,P均<0.05)。q-PCR结果表明miR-21下调组细胞中PTEN mRNA和FasL mRNA表达水平高于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义(t分别=16.19、16.12、16.09、17.51,P均<0.05)。结论miRNA-21在胆囊癌组织中的上调表达可能是影响胆囊癌细胞增殖和迁移活性的机制之一。

日间手术患者出院准备度研究进展

从日间手术的发展、出院准备度概念及其相关量表、出院准备度的影响因素等方面进行综述,旨在为临床上提高日间手术患者出院准备度提供理论依据;为今后中国日间手术患者出院准备度的评估和干预相关研究提供参考。

1例老年巨块型肝细胞癌合并肺气肿患者的围手术期护理

总结1例老年合并肺气肿的巨块型肝细胞癌患者在加速康复外科理念下的围手术期相关护理体会。护理要点:在加速康复外科理念的指导下,在围手术期制定个性化的呼吸功能锻炼方案改善患者肺通气功能,设定早期活动目标积极实施术后早期活动,落实血栓防治、心理护理等措施。患者术后7 d康复出院。

肝破裂急诊手术后胆瘘二例

肝破裂后行急诊肝修补术，术后出现胆瘘往往较难避免，由此继发腹腔感染，而再次行手术治疗创伤大，且难于奏效。笔者采用了经十二指肠放置鼻胆管引流（ENBD）结合经皮腹腔穿刺引流治疗2侧该类患者。现报告如下。

长链非编码RNA XIST靶向miR-101/EZH2对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)对胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移能力的影响,明确lncRNA XIST与miR-101/zeste基因增强子同源物2(EZH2)的靶向关系。方法收集2010年7月至2018年9月间浙江省嘉兴市第一医院行手术切除并经病理学确诊的90例胰腺癌及其对应的癌旁正常组织;选取PANC1细胞将其分为sh-XIST组、sh-control组、miR-control组和miR-101组。采用荧光定量PCR法检测胰腺癌组织和各组PANC1细胞lncRNA XIST、miR-101的表达,分析lncRNA XIST和miR-101的表达与肿瘤临床病理参数的关系。采用CCK-8法和Transwell小室检测各组PANC1细胞的增殖和迁移能力,蛋白质免疫印迹法检测各组PANC1细胞的EZH2表达水平。将各组PANC1细胞以3×10^6个/100μl密度分别接种于Balb/c裸鼠,检测种植瘤体积。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA XIST与miR-101及其下游靶基因EZH2的关系。结果与癌旁组织比,胰腺癌组织lncRNA XIST表达量显著上调(2.89±0.42比1.12±0.22,P<0.05),miR-101水平显著下调(0.32±0.12比1.25±0.22),差异均有统计学意义(P值均<0.05)。胰腺癌的分化程度越高、TNM分期越高、淋巴结转移的癌组织lncRNA XIST水平显著升高,miR-101水平显著降低。sh-XIST组PANC1细胞lncRNA XIST表达水平较sh-control组显著下调(0.34±0.18比1.21±0.27),miR-101组PANC1细胞miR-101表达水平较miR-control组显著上调(2.94±0.31比1.54±0.29),差异均有统计学意义(P值均<0.05)。培养72 h的sh-control组、sh-XIST组、miR-control组和miR-101组450 nm处吸光度值(A450值)分别为1.98±0.24、1.21±0.20、1.87±0.21、1.11±0.17,穿膜细胞数分别为(74.25±6.79)、(29.11±5.17)、(61.27±5.19)、(20.47±4.58)个细胞/200倍视野,sh-XIST组较sh-control组、miR-101组较miR-control组细胞增殖活力和迁移能力均显著下降,种植瘤生长明显缓慢,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论lncRNA XIST可靶向结合miR-101/EZH2调节胰腺癌PANC1细胞的增殖和迁移能力,促进胰腺癌的发生和发展。

大黄素联合5AzA-cdR对胰腺癌裸鼠皮下移植瘤抑癌基因p16、RASSF1A、ppENK的去甲基化作用

目的探讨大黄素是否增强5AzA-cdR对胰腺癌裸鼠移植瘤抑癌基因p16、RASSF1A、ppENK的去甲基化作用。方法建立胰腺癌PANC1细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,随机将裸鼠分为对照组、大黄素组、5AzA-cdR组以及大黄素联合5AzA-cdR组(联合用药组)。观察各组移植瘤的生长情况,采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测各组移植瘤组织p16、RASSF1A、ppENK的甲基化水平,采用荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测上述3个抑癌基因mRNA和蛋白的表达量。结果对照组、大黄素组、5AzA-cdR组、联合用药组移植瘤重量分别为(0.28±0.01)、(0.17±0.01)、(0.12±0.02)、(0.08±0.01)g;体积分别为(517±0.02)、(382±0.01)、(232±0.03)、(169±0.01)mm^3;p16甲基化程度为1.00±0.00、0.89±0.02、0.63±0.02、0.19±0.01;RASSF1A甲基化程度为1.00±0.00、0.88±0.02、0.51±0.01、0.32±0.01;ppENK甲基化程度为1.00±0.00、0.92±0.02、0.77±0.02、0.31±0.01;p16mRNA表达量为1.00±0.00、1.71±0.02、2.67±0.02、3.81±0.01;RASSF1AmRNA表达量为1.00±0.00、1.92±0.02、2.73±0.03、3.77±0.01;ppENKmRNA表达量为1.00±0.00、1.69±0.03、2.17±0.02、4.28±0.01;p16蛋白表达量为1.00±0.00、1.71±0.02、2.67±0.02、3.81±0.01;RASSF1A蛋白表达量为1.00±0.00、1.92±0.02、2.73±0.03、3.77±0.01;ppENK蛋白表达量为1.00±0.00、1.69±0.03、2.17±0.02、4.28±0.01。3个治疗组移植瘤的重量及体积均显著小于对照组,3个抑癌基因甲基化程度均低于对照组,抑癌基因mRNA及蛋白表达均显著高于对照组,其中联合用药组又显著强于2个单独用药组,差异均有统计学意义(P值<0.05或<0.01)。结论大黄素联合5AzA-cdR用药可增强5AzA-cdR对胰腺癌移植瘤组织抑癌基因p16、RASSF1A、ppENK的去甲基化作用。

JNK在神经病理性痛大鼠中脑导水管周围灰质星形胶质细胞活化中的作用

目的评价c-Jun氨基末端激酶（JNK）在神经病理性痛大鼠中脑导水管周围灰质（PAG）星形胶质细胞活化中的作用。方法清洁级雄性SD大鼠72只，9周龄，体重160～200 g，采用随机数字表法分为4组：正常对照组（C组，n＝8）、神经病理性痛组（NP组，n＝40）、二甲基亚砜溶剂对照组（DS组，n＝12）和JNK抑制剂SP600125组（SP组，n＝12）。采用慢性坐骨神经缩窄性损伤（CCI）法制备大鼠神经病理性痛模型。于CCI后14 d时，SP组PAG内注射10 nmol JNK抑制剂SP600125 0.5 μl，DS组注射10%二甲基亚砜0.5 μl。C组取8只大鼠，NP组于CCI前、CCI后3、7、14、21 d时取8只大鼠，DS组和SP组取8只大鼠分别于CCI前、CCI后14 d给药前、给药后30、45、60、75和90 min时测定机械痛阈。C组机械痛阈测定结束后处死，取PAG组织，采用Western blot法测定PAG区磷酸化JNK（p-JNK）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达；NP组于各时点痛阈测定结束后处死，测定PAG区p-JNK表达；DS组和SP组取4只大鼠于给药后45 min时机械痛阈测定结束后处死，测定PAG区GFAP的表达。结果与C组比较，NP组CCI后各时点机械痛阈降低，CCI后7～21 d时p-JNK表达上调（P〈0.01）；与DS组比较，SP组给药后30 min时机械痛阈升高，给药后45 min时GFAP表达下调（P〈0.01）；与给药前比较，SP组给药后30～75 min时机械痛阈升高（P〈0.01）。结论神经病理性痛大鼠PAG星形胶质细胞活化机制与JNK激活有关。

R-脊椎蛋白1对肝星状细胞活化的作用及其机制

目的 探讨R-脊椎蛋白1（R-Spondin1）在小鼠肝纤维化模型及肝星状细胞（HSC）中的动态表达情况及其对HSC活化的影响. 方法 体内实验：健康雄性昆明种小鼠24只,随机分为2组.模型组（16只）：用20％四氯化碳（CCl4）橄榄油5ml/kg皮下注射,2次/周;对照组小鼠（8只）不作任何处理.10周后处死小鼠,留取肝组织,Western blot检测R-Spondin1、α-平滑肌肌动蛋白（c-SMA）、胶原蛋白Ⅰ（collagen Ⅰ）的蛋白水平,Real-time PCR检测R-Spondinl、α-SMA、collagenⅠ的mRNA水平.体外实验：分离小鼠HSC,检测R-Spondin1、α-SMA、核内β-catenin的蛋白表达情况,以及R-Spondin1的mRNA水平、T淋巴细胞转录因子（TCF）活性在HSC自发激活前后的变化,并比较小鼠HSC经R-Spondin1和抑癌蛋白刺激前后的活化差异.两组间均数比较采用t检验;多组资料采用单因素方差分析,进一步的两两比较采用Dunnett检验. 结果 与对照组相比,肝纤维化模型组R-Spondin1蛋白和mRNA表达水平明显增高,差异有统计学意义（蛋白相对表达量为3.16±0.18与0.99±0.16,t=13.31,P＜0.01;mRNA相对水平为4.36±0.26与0.98±0.12,t=21.46,P＜0.01）.在HSC的自发激活过程中,核内β-catenin的蛋白水平和TCF活性显著增强（核内β-catenin蛋白相对表达量为4.47±0.21与0.97±0.14,t=25.25,P＜0.01;TCF相对活性为5.33±0.34与1.03±0.09,t=20.93,P＜0.01）;R-Spondin1的蛋白和mRNA表达水平显著上调（蛋白相对表达量为4.54±0.18与1.04±0.12,t=31.17,P＜0.01;mRNA相对水平为5.13±0.15与1.01±0.16,t=38.06,P＜0.01）.α-SMA、核内β-catenin的蛋白表达及TCF活性在R-Spondin1刺激后显著上调;而在R-Spondin1和抑癌蛋白共同刺激后无显著变化. 结论 R-Spondin1可能通过增强β-catenin在细胞核内的积聚影响HSC的活化.

隐性胰胆反流75例分析

目的研究隐性胰胆反流的发生率及其对胆囊上皮不典型增生和癌变的影响。方法对2006年7月至2008年2月期间择期行胆道手术或行ERCP检查的956例患者常规作胆汁淀粉酶测定，对手术切除胆囊标本行病理检查，观察不典型增生和癌变的发生率。结果754例患者中发现隐性胰胆反流75例，发生率为9．9％。反流组和对照组胆汁淀粉酶分别为（7701±20378）IU／L和（16±51）IU／L，差异有统计学意义（P〈0．01）：反流组中胆囊癌及不典型增生发生率分别为3．4％（2／58）和31．0％（18／58），均高于对照组（P〈0．05）。反流组中伴有癌变和不典型增生病例的胆汁淀粉酶值高于不伴有癌变和不典型增生的病例（9194±10399 IU／L vs．2388±2745 IU／L，P〈0．01）。结论在胆胰管汇合正常者中隐性胰胆反流是客观存在的，它促进了胆囊不典型增生和癌变的发生。

十二指肠镜诊治时发生严重并发症的防治体会

1995年2月～2005年10月，作者单位共完成经内镜逆行胰胆管造影检查（ERCP）1451例，在此基础上行Oddi括约肌切开术（EST）351例次，共发生严重并发症16例，发生率1．10％，其中与EST操作相关并发症9例，现报告如下。

低剂量吉西他滨化疗在溶质载体家族1号基因T1288A突变型胰腺癌中的疗效

目的探讨低剂量吉西他滨化疗在溶质载体家族1号基因（SLC29A1）T1288A突变型胰腺癌患者中的疗效及不良反应。方法以收治的SLC29A1基因T1288A突变型中晚期胰腺癌患者共72例，随机归入实验组（低剂量吉西他滨，600 mg/m2）36例和对照组（标准剂量吉西他滨，1 000 mg/m^2）36例，观察评价化疗疗效及不良反应。结果疗效比较中，实验组与对照组各项指标比较差异均无统计学意义。不良反应比较中，实验组白细胞减少、血小板减少、红细胞减少、恶心呕吐、肝损害、腹泻、皮疹和瘙痒、流感样症状发生率分别为3例（8.3%）、3例（8.3%）、4例（11.1%）、6例（16.7%）、2例（5.6%）、3例（8.3%）、1例（2.8%）、1例（2.8%）；对照组为12例（33.3%）、15例（41.7%）、13例（36.1%）、20例（55.6%）、2例（5.6%）、4例（11.1%），1例（2.8%）、1例（2.8%），不良反应中白细胞减少（P＝0.009）、血小板减少（P＝0.001）、红细胞减少（P＝0.013）、恶心呕吐（P＝0.001），差异有统计学意义。通过随访观察两组6个月和1年生存期比较差异无统计学意义。结论对于SLC29A1基因T1288A突变型胰腺癌患者，在一定范围内给予低剂量吉西他滨化疗，在不降低化疗疗效同时可有效减少化疗不良反应。