目的探讨RNA干扰(RNAi)技术下调肝脏和骨骼肌细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)表达对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖代谢的影响。方法构建并筛选SOCS3短发夹状RNA(sh RNA)表达质粒,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒。制备T2DM大...目的探讨RNA干扰(RNAi)技术下调肝脏和骨骼肌细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)表达对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖代谢的影响。方法构建并筛选SOCS3短发夹状RNA(sh RNA)表达质粒,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒。制备T2DM大鼠模型,采用随机数字表法分为对照组和干扰组各15只,于实验第1天和第15天对照组尾静脉注射非干扰序列慢病毒1.5ml/次,干扰组尾静脉注射SOCS3 RNAi慢病毒1.5ml/次。4周后检测大鼠空腹胰岛素(FINS)和空腹血糖(FPG)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI)和胰岛素敏感指数(ISI);实时荧光定量PCR法和Western blot法检测大鼠肝脏和骨骼肌组织中SOCS3 m RNA和蛋白表达水平。结果成功构建了SOCS3 sh RNA慢病毒表达质粒,其在C6大鼠神经胶质瘤细胞中可抑制SOCS3表达,其抑制率为70%,获得的慢病毒滴度为1.0×109TU/ml。干扰组肝脏和骨骼肌组织中SOCS3 m RNA和蛋白表达水平较对照组均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01)。干扰组FINS、FPG和IRI较对照组均明显下降,而ISI较对照组明显上升,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论利用RNAi技术下调T2DM大鼠SOCS3基因可提高T2DM大鼠胰岛素敏感性,缓解胰岛素抵抗程度。展开更多
文摘目的探讨RNA干扰(RNAi)技术下调肝脏和骨骼肌细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)表达对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖代谢的影响。方法构建并筛选SOCS3短发夹状RNA(sh RNA)表达质粒,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒。制备T2DM大鼠模型,采用随机数字表法分为对照组和干扰组各15只,于实验第1天和第15天对照组尾静脉注射非干扰序列慢病毒1.5ml/次,干扰组尾静脉注射SOCS3 RNAi慢病毒1.5ml/次。4周后检测大鼠空腹胰岛素(FINS)和空腹血糖(FPG)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI)和胰岛素敏感指数(ISI);实时荧光定量PCR法和Western blot法检测大鼠肝脏和骨骼肌组织中SOCS3 m RNA和蛋白表达水平。结果成功构建了SOCS3 sh RNA慢病毒表达质粒,其在C6大鼠神经胶质瘤细胞中可抑制SOCS3表达,其抑制率为70%,获得的慢病毒滴度为1.0×109TU/ml。干扰组肝脏和骨骼肌组织中SOCS3 m RNA和蛋白表达水平较对照组均明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01)。干扰组FINS、FPG和IRI较对照组均明显下降,而ISI较对照组明显上升,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论利用RNAi技术下调T2DM大鼠SOCS3基因可提高T2DM大鼠胰岛素敏感性,缓解胰岛素抵抗程度。
