鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)背肌中组织蛋白酶B2的纯化与酶学性质鉴定

对鲢鱼背部白肌中的组织蛋白酶B2，进行了分离纯化及酶学性质的鉴定。目的酶经粗提后，再通过酸处理、硫酸铵分级沉淀、超滤、DEAE-Sephacel、Sephacryl S-100、SP-Sepharose F．F．、Blue-sepharose6 F．F．、Con A-Sepharose等步骤纯化，纯化倍数达到396．5倍。经SDS-PAGE分析，该酶呈现了分子量约为25和20KDa的2条带。组织蛋白酶B2的最适反应温度和pH分别为30-35℃和pH5．5。巯基还原剂DTT、L-Cys、pMe均显著地激活了该酶的活性。50μmol／L的E-64能够完全抑制其活性。Cl^-浓度为100μmol／L以内时，对组织蛋白酶B2起到激活作用，200μmol／L时则表现为抑制作用。25mmol／L的P2O7^4-，即可有效抑制该酶的活性。该纯化酶能够水解Z-Arg—Arg-MCA、Z—Phe-Arg—MCA，但是不能够水解L-Arg-MCA。组织蛋白酶B2水解Z—Arg-Arg—MCA、Z—Phe-Arg—MCA的K。值分别为7．15及226μmol／L，表明Z—Arg—Arg—MCA是该酶的最适底物。