玉米SSⅡb蛋白多克隆抗体的制备及其应用

抗体是蛋白质功能研究的重要试剂。玉米蛋白的功能研究因缺乏相应的抗体而难以开展。玉米淀粉合酶Ⅱb与淀粉合酶Ⅱa均属于淀粉合酶,其主要负责支链淀粉的延伸。但对淀粉合酶Ⅱb的报道较少,本研究以原核表达的淀粉合酶Ⅱb的C端(455~704 aa) GST融合蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔,分离血清制备SSⅡb多克隆抗体。Western blot试验发现, SSⅡb多克隆抗体不但能识别SSⅡb-C (455~704 aa)抗原,而且能识别玉米不同发育阶段胚乳中SSⅡb蛋白。利用该多克隆抗体的Western blot试验表明,玉米SSⅡb蛋白的表达在授粉后10 d到30 d的胚乳中表达模式是先增后降,授粉后15 d表达量最高,而半定量RT-PCR的结果表明授粉后20 d SSⅡb的转录水平最高。这些结果表明成功制备了特异的玉米SSⅡb的多克隆抗体,并能在Western blot中特异识别玉米内源SSⅡb蛋白,为进一步深入研究SSⅡb蛋白功能奠定基础。

烟草NtSYP121基因克隆、表达载体构建及表达分析

采用同源克隆的方法对烟草品种K326中的一个SYP121基因进行了研究,该基因全长903 bp,蛋白编码300个氨基酸。同源性分析结果显示,该基因所编码的蛋白与渐窄叶烟草SYP121-like、绒毛状烟草SYP121-like等的亲缘关系最近,故命名为Nt SYP121。组织表达分析发现,该基因在成熟期的根、茎、叶、花中均有表达,在根中的表达量最高。非生物逆境胁迫实验表明,该基因对低钾、高盐、干旱、ABA均有响应表达,并成功构建了Nt SYP121-p BI121过表达载体。研究结果为解析Nt SYP121在响应逆境胁迫的功能奠定一定理论基础。