青稞CHS基因的克隆及原核表达分析

为进一步研究查尔酮合酶(Chalcone synthase,CHS)在黄酮化合物代谢过程中的作用,以青稞94-19-1为材料,通过同源克隆技术分离CHS基因,并对分离得到的CHS基因进行生物信息学分析及原核表达。结果表明,从青稞94-19-1中克隆得到的CHS基因编码区长为1 197bp,编码398个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白质分子量为43.479kDa,预测等电点(pI)为5.92,是酸性蛋白;该酶蛋白体外红细胞中的半衰期为30h,不稳定系数(II)大于40,属于不稳定蛋白;平均亲水指数为-0.090,是亲水性的蛋白。SDS-PAGE检测结果表明,将该基因克隆到表达载体pET-32a上,并在大肠杆菌BL21中表达,可得到64kDa左右的融合蛋白,在IPTG诱导浓度为1.0mmol·L-1时,最佳诱导时间为3h。