热应激对不同泌乳阶段奶牛应激、抗氧化和肝功能相关指标的影响

【目的】探究热应激对不同泌乳阶段奶牛应激、抗氧化和肝功能相关指标的影响,以期为不同泌乳阶段奶牛更有效预防热应激提供理论支持。【方法】选择四川省某规模化奶牛场热应激期泌乳牛856头和非热应激期泌乳牛896头,按泌乳天数分为新产(0~21 d)、泌乳前期(22~120 d)、泌乳中期(121~200 d)和泌乳后期(201~305 d),分别随机选择处于热应激中期和非热应激期体况、年龄、泌乳天数相近的各泌乳阶段健康经产(2~4胎次)泌乳奶牛10头,采集各试验牛尾静脉血,检测热应激蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)、皮质醇(Cortisol,Cor)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、游离脂肪酸(Non-esterified fatty acid,NEFA)、结合珠蛋白(Haptoglobin,HPT)和谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)水平。【结果】热应激各泌乳阶段奶牛应激指标HSP70、Cor水平和抗氧化指标SOD活性均极显著上升(P<0.01);新产、泌乳前期奶牛T-AOC水平极显著降低(P<0.01),泌乳中期奶牛T-AOC水平显著降低(P<0.05);新产奶牛MDA水平显著上升(P<0.05),泌乳前期、中期奶牛MDA水平极显著上升(P<0.01)。各泌乳阶段奶牛GDH活性极显著升高(P<0.01);新产奶牛、泌乳前期奶牛NEFA水平极显著提高(P<0.01),泌乳中期显著提高(P<0.05);新产、泌乳前期和中期奶牛HPT水平均极显著上升(P<0.01)。【结论】不同泌乳阶段奶牛均受热应激影响而发生不同程度应激反应和氧化损伤,且肝功能均不同程度损伤,新产、泌乳前期和中期奶牛尤为严重。

白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛生理生化及抗氧化性指标的影响

为探究白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛生理生化及抗氧化性指标的影响,以12头健康奶牛为对照组(不注射药物)、12头临床型乳房炎奶牛为试验组,按体重0.05 mL·kg^(-1)颈部肌肉注射白头翁皂苷B4注射液,每天1次,连续6 d。试验期间,使用IDEXX ProCyte Dx全自动五分类血细胞分析仪检测对照组及试验组1、3、5、7 d血液常规指标,分别用BS-240VET全自动生化分析仪和ELISA法检测对照组任一天及试验组1、3、5、7 d血清生化指标血糖(GLU)、肌酐(CREA)、尿素(UREA)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALKP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TBIL)、胆固醇(CHOL)、淀粉酶(AMYL)、脂肪酶(LIPA)和总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平。结果表明:(1)对照组和试验组奶牛血常规和血清生化指标均处于正常生理值范围,且试验组生理生化指标较对照组有显著改善;(2)白头翁皂苷B4显著或极显著促进临床型乳房炎奶牛抗氧化因子SOD、MDA、CAT和NOS恢复至健康水平(P<0.05或0.01),用药后7 d试验组除GSH-Px和T-AOC水平显著低于对照组外,其余各抗氧化性指标差异均不显著。综合而言,白头翁皂苷B4可促进临床型乳房炎奶牛血清生化指标均在生理范围内显著改善,有效减轻乳腺炎氧化损伤,有助于奶牛临床型乳房炎治疗。

白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛乳汁体细胞、酶、炎性和抗氧化因子影响

【目的】乳房炎是危害奶牛健康最严重的疾病,常造成奶牛乳汁体细胞数升高和细胞因子水平改变。白头翁皂苷B4是中药白头翁的主要成分,具有抑菌、抗炎、抗氧化和增强免疫力等功能。对临床型乳房炎奶牛注射白头翁皂苷B4注射液,为探究白头翁皂苷B4对临床型乳房炎奶牛乳汁SCC、酶、炎性和抗氧化因子的影响,为临床应用提供依据。【方法】选取规模化奶牛场2-3胎次泌乳高峰期健康中国荷斯坦奶牛(对照组,不注射药物)和临床型乳房炎奶牛(试验组)各12头。乳房炎发病当天记为第0天,按0.05 mL/kg连续颈部肌肉注射白头翁皂苷B4注射液6 d,1次/d,并观察临床疗效至第12天。分别使用体细胞检测仪和ELISA法检测各组奶牛第0、1、3、5、7、9、11天乳汁SCC和乳清酶LDH、NAG、ALT、AST、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α,抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT、MDA含量,并应用SPSS 24.0软件进行统计学分析。【结果】临床型乳房炎奶牛乳汁SCC,乳清酶LDH、NAG、ALT、AST、ALP、ACP,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、脂质过氧化物MDA含量均显著高于对照组(P<0.05),并随治疗时间推移显著下降(P<0.05);而抗氧化因子T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT含量显著低于对照组(P<0.05),并随治疗时间推移显著上升(P<0.05);第11天时除ALP显著高于对照组外(P<0.05),其余指标均与对照组差异不显著(P<0.05)。【结论】白头翁皂苷B4可显著降低临床型乳房炎奶牛炎症反应和乳汁SCC,促进乳酶恢复正常水平,增强乳腺抗氧化能力,是治疗奶牛临床型乳房炎的理想药物。

奶牛静脉血、胎盘组织、脐静脉血及犊牛静脉血脂联素与犊牛初生重相关性研究

为探究奶牛静脉血、胎盘组织、脐静脉血和犊牛静脉血中脂联素之间及与犊牛初生重的相关性,选取规模化养殖场正常分娩奶牛54头,按犊牛初生重将奶牛分为3组:A组,≤40kg,9头;B组,40~45kg,25头;C组,≥45kg,20头。分别采集分娩奶牛颈静脉血、胎盘组织、脐静脉血及犊牛颈静脉血,ELISA法检测血液及胎盘组织脂联素水平,相关分析法分析各样品之间及与犊牛初生重的相关性。奶牛静脉血脂联素水平((29.15±4.02)mg/L)高于脐静脉血((13.79±1.14)mg/L)与犊牛静脉血((13.46±0.94)mg/L)脂联素水平,差异极显著(P<0.01),脐静脉血脂联素水平高于犊牛静脉血脂联素水平,但差异性不显著(P>0.05);奶牛静脉血脂联素水平与胎盘组织、脐静脉血、犊牛静脉血脂联素水平以及胎盘组织脂联素水平与脐静脉血、犊牛静脉血脂联素水平相关性均不显著(P>0.05),脐静脉血脂联素水平与犊牛静脉血脂联素水平极显著正相关(P<0.01);犊牛初生重与奶牛静脉血脂联素水平无显著相关性(P>0.05),与脐静脉血、胎盘组织脂联素水平极显著正相关(P<0.01),与犊牛静脉血脂联素水平显著正相关(P<0.05);奶牛静脉血、胎盘组织、脐静脉血脂联素水平及犊牛静脉血脂联素水平在公、母犊间差异均不显著(P>0.05)。脐静脉血、胎盘组织脂联素水平对犊牛初生重有非常显著的影响,犊牛静脉血脂联素水平对犊牛初生重具有一定影响,而奶牛静脉血脂联素水平对犊牛初生重的影响不显著;奶牛静脉血、脐静脉血、胎盘组织及犊牛静脉血脂联素水平在公、母犊间差异均不显著。

超声破碎和胰蛋白酶酶解奶牛胎盘制备还原性多肽方法的建立与优化

为实现高效制备奶牛胎盘还原性多肽,选取身体健康、妊娠足月、自然分娩的中国荷斯坦奶牛新鲜胎盘,冰浴条件下匀浆化,采用超声破碎法和胰蛋白酶酶解法制备奶牛胎盘多肽,探究不同匀浆浓度、超声功率、酶底质量比和处理时间对制备胎盘多肽收率和还原力的影响,并以响应面法结合提取率与还原力对提取条件进行优化。结果表明:超声破碎法在匀浆浓度50.00%,功率1800W,破碎7.50min可获得最佳提取率(0.95%)和VitC当量(2.91μg/mg);胰蛋白酶酶解法分别在反应时间5.78和5.13h,匀浆浓度30.21%和35.59%,酶底质量比3.24%和4.19%时,可得最高提取率(5.55%)和VitC当量(39.32μg/mg);提取率与还原力均呈显著正相关(P<0.05);经响应面优化,奶牛胎盘还原性多肽最佳制备条件为:酶解时间5.8h,底物浓度34.98%,酶底质量比3.33%,此时理论综合提取率为2037.92μg/g。综上,奶牛胎盘含有天然还原性多肽,超声破碎法和胰蛋白酶酶解法均可应用于提取奶牛胎盘还原性多肽,胰蛋白酶酶解法优于超声破碎法。

回乳期奶牛血清PRL、E_2、P_4和STAT5含量的变化规律

为探究回乳期奶牛血清中促乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P4)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)含量和产奶量变化规律及其相关性,选择规模化奶牛场产奶量为(15.43±0.60)kg,将干乳的妊娠后期奶牛20头为研究对象。干乳开始当天记为第0天,分别在第0、1、3、5、7、9和11天上午8:00采集奶牛尾静脉血,ELISA法检测血清中PRL、E2、P4和STAT5含量并对结果进行统计学处理,分析其在奶牛回乳过程中的变化规律及其相关性。结果表明:回乳期奶牛血清PRL含量和产奶量在0~1d变化不显著(P>0.05),3~11d依次降低且差异极显著(P<0.01);血清E2含量0~1d、3~5、7~9d、9~11d之间差异均不显著(P>0.05),依次呈阶梯式下降趋势;血清STAT5含量同样呈下降趋势,回乳0~5d、7~11d差异不显著(P>0.05),但0~5d与7~11d两阶段间差异极显著(P<0.01);血清P4含量从回乳0~11d变化不显著(P>0.05);回乳期奶牛产奶量与PRL、E2、STAT5含量呈极显著正相关(P<0.01),PRL、E2和STAT5含量变化两两间均呈极显著正相关(P<0.01);P4含量变化与PRL、E2、STAT5含量和产奶量变化的相关性均不显著(P>0.05)。综上所述,在奶牛回乳期间,血清中PRL、E2和STAT5含量均呈降低趋势并显著正相关,而P4含量变化不显著且与其他激素无显著相关性,为进一步研究泌乳相关激素调控奶牛回乳的作用机理提供理论依据。

围产前期奶牛血清相关能量平衡指标和脂肪因子对酮病的预警作用及意义

为探究围产期奶牛产前14和7 d血清能量平衡指标以及脂肪因子对产后酮病的预警作用及意义。从奶牛产前21 d至产后21 d,每隔7 d跟踪采集60头围产期奶牛尾静脉血,最终筛选出健康奶牛21头,酮病奶牛17头,检测奶牛各时间点血清BHBA、NEFA、Glu、TG、INS、 ADP、LEP、抵抗素、IL-6和TNF-α含量,利用二元Logistic回归模型筛选预警酮病的指标,再采用ROC曲线确定各风险评估指标的诊断效果及最佳分界值。结果表明:奶牛产前14 d时,血清BHBA和NEFA可作为酮病的预警指标;BHBA的最佳分界值为>0.42 mmol/L,对应的敏感度为58.8%,特异度为81.0%;NEFA的最佳分界值为>0.47 mmol/L,对应的敏感度为58.8%,特异度为90.5%;产前7 d时,血清BHBA和NEFA可作为酮病的预警指标,BHBA的最佳分界值为>0.34 mmol/L,对应的敏感度为76.5%,特异度为66.7%;NEFA的最佳分界值为>0.32 mmol/L,对应的敏感度为94.1%,特异度为47.6%。本研究发现产前14和7 d血清ADP、LEP、抵抗素、IL-6和TNF-α均不适合为产后酮病的预警指标。然而,随预产期临近,该5种脂肪因子Logistic曲线的显著性逐渐向具有统计学意义接近,存在作为酮病预警指标的潜力。

基于LC-MS/MS分析不同蛋白酶酶解奶牛胎盘产物差异及其抗氧化活性预测

为探究胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解奶牛胎盘产物间差异,用此3种酶在最优条件下酶解奶牛胎盘获得胎盘酶解产物,每种酶重复3次,利用LC-MS/M技术鉴定产物中蛋白和肽段,BIO-PEP数据库匹配和测算十肽及以下的抗氧化活性多肽。结果显示:胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解产物分别鉴定出541、137和86种蛋白,2766、1170和128个肽段,胰蛋白酶鉴定蛋白和肽段数极显著高于其余2种酶(P<0.01),木瓜蛋白酶鉴定蛋白和肽段数均显著低于其余2种酶(P<0.05);3种酶酶解产物十肽及以下具有潜在抗氧化能力肽段分别占十肽及以下肽段总量的39.14%(256/654)、32.80%(81/247)和53.33%(16/30),木瓜蛋白酶占比显著高于其余2种酶(P<0.05);胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶3种酶酶解产物抗氧化多肽共同特征是分别含有EL、LY、MM、LK、IR、MY、VY残基,HL、LK、TY、HH、EL残基和LK、IR、EL等残基。综上,通过LC-MS/M技术对酶解产物定性和定量分析,胰蛋白酶酶解奶牛胎盘的产物生物学信息最丰富,在蛋白组学中可靠性和准确性最高;木瓜蛋白酶酶解奶牛胎盘最彻底,其产物潜在抗氧化活性最强,本研究为使用蛋白组学研究奶牛胎盘时酶的选择和奶牛胎盘抗氧化活性多肽的开发利用提供理论依据。