猪传染性胃肠炎病毒检测基因芯片的构建

采用PCR扩增制备TGEV的靶基因并进行纯化，对基因芯片的最佳靶基因点样质量浓度、探针质量浓度、杂交温度、杂交时间进行筛选，选择构建检测芯片的最适靶基因，进行基因芯片探针最佳标记方法试验。结果表明，质粒PCR扩增和采用异丙醇沉淀纯化的靶基因质量好，基因芯片最佳靶基因点样质量浓度为200mg／L，最佳探针质量浓度为3000μg／L，预杂交时间为1h，杂交时间为3～6h，杂交温度为48℃，以S、S3、sM、M、N、ORF7、POL等7个靶基因为构建TGEV检测芯片的最适靶基因，确定了多重PCR扩增标记TGEV探针的最佳体系，Cy3-dCTP标记浓度为2．5μmol／L，构建的TGEV检测芯片与标记的混合探针杂交效果好。