利用高通量测序技术分析川中黑山羊瘤胃纤毛虫种群结构

本试验旨在应用高通量测序技术研究川中黑山羊瘤胃纤毛虫种群结构。选取3只4月龄川中黑山羊[体重(15.53±0.21)kg],正常饲喂20 d后采集瘤胃液(A)样品,间隔40 d后再次采集瘤胃液(F)样品,提取样品总DNA后,扩增真核生物18S rRNA V4区,扩增产物使用Illumina MiSeq平台测序。结果表明:1)共获得高质量有效序列242 321条,聚类后得1 650个操作分类单位(OTU)。2)A样品、F样品在alpha多样性Chao、ACE、Shannon和Simpson指数上,差异不显著(P>0.05)。3)在纲水平分类上,2个时间点样品相对丰度最高的均为纤毛门,侧口纲(A样品为46.0%、F样品为44.7%),2个样品的相对丰度差异不显著(P>0.05)。4)在科水平分类上,A样品优势科为头毛科(31.8%),其次为均毛科(14.2%);F样品优势科为头毛科(42.8%);并且F样品头毛科相对丰度显著高于A样品(P<0.05),A样品均毛科相对丰度显著高于F样品(P<0.05)。5)在属水平分类上,A样品与F样品相对丰度最高的属均为多加多泡双毛属(A样品为20.9%、F样品为25.4%),无显著差异(P>0.05);存在显著性差异的属是均毛属、头毛属、腹甲双毛属、刺甲双毛属相对丰度,其中A样品均毛属(14.1%vs.1.9%)、腹甲双毛属相对丰度(2.8%vs.1.5%)显著高于F样品(P<0.05),而头毛属(6.7%vs.12.5%)、刺甲双毛属相对丰度(0.3%vs.2.5%)显著低于F样品(P<0.05)。本试验结果表明,幼龄川中黑山羊瘤胃液纤毛虫相对丰度最高的种属为多加多泡双毛属,瘤胃中还有许多未被分类鉴定且相对丰度较高的真核生物。

复方中药“禽康散”对人工感染新城疫病毒肉鸡血清免疫球蛋白及新城疫抗体效价的影响

10日龄的健康艾维茵肉仔鸡250只，随机分为5组。21日龄时除阴性对照组（Ⅳ组）外均用新城疫病毒（Newcastle disease，virus，NDV）强毒株攻毒，各治疗组（Ⅰ～Ⅲ组）在22～25日龄饲料中分别添加0．5％、1.0％、2．0％的复方中药“禽康散”，第Ⅳ、Ⅴ组（阳性对照组）不用药。在攻毒前1d和攻毒后1、3（用药后2d）、7（停药后2d）、15（停药后10d）d观察血清免疫球蛋白及新城疫抗体效价的变化。结果显示：Ⅴ、Ⅱ组血清IgG在攻毒15d（停药10d）时与Ⅲ、Ⅳ、V组差异极显著（P〈O．01）；Ⅰ～Ⅲ组血清IgA浓度在攻毒后3、7d均明显高于第V组（P〈0．05或0．01），以1％治疗组效果最佳；各组之间血清中IgM含量无显著差异（P〉0．05）。Ⅴ～Ⅲ组新城疫抗体效价在攻毒7d后各阶段均高于阳性对照组（P〈0．05或0．01），以第Ⅲ组最佳。结果表明，日粮添加1．0％～2．0％质量分数的“禽康散”能明显增加血清中IgG、IgA含量和新城疫抗体效价，从而提高机体体液免疫功能，达到提高机体抗NDV的能力。

复方中药“禽康散”对人工感染新城疫病毒肉鸡的疗效试验

10日龄健康艾维菌肉仔鸡150只，随机分为5组。21日龄时除阴性对照组（Ⅳ组）外均用新城疫病毒F48E9攻毒，各治疗组（I～Ⅲ组）在22～25日龄饲料中分别添加0．5％、1．0％和2．0％的复方中药“禽康散”，第Ⅳ组（阴性对照组）、V组（阳性对照组）不用药。观察其对人工感染新城疫病毒（NDV）的临床治疗效果。试验结果，添加0．5％、1％和2％“禽康散”组治愈率分别为66．67％、87．5％和84．33％；而阳性对照组病死率高达83．33％。结果表明复方中药“禽康散”对肉鸡人工感染新城疫病毒有较好的治疗作用。以1％添加量效果最佳。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮及其联合染毒对小鼠肝脏功能及肝细胞凋亡的影响

为探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEA)及其联合染毒对小鼠肝脏功能和肝脏细胞凋亡的影响,成年雌性昆明小鼠360只,体质量(20±1)g,随机分为9组,腹腔单独或联合注射(每隔24 h注射1次,连续4次)不同浓度的镰刀菌素(DON 1.5,2.5 mg/kg;ZEA 20,30 mg/kg)。于感染后0,3,5,8,12 d测定小鼠肝脏AST、ALT的活性和TP、ALB的含量;3,5,8 d测定肝细胞凋亡率的变化。结果表明,DON、ZEA单独或联合染毒均显著提高小鼠肝脏AST、ALT活性及肝细胞凋亡率(P<0.01或P<0.05),显著降低TP、ALB含量(P<0.05);联合染毒组与相应单一染毒组相比差异显著(P<0.01或P<0.05),呈现明显的剂量-效应关系。联合染毒具有亚加性效应,以2.5mg/kg DON与30 mg/kg ZEA联合染毒所呈现的亚加性效应更明显。

玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其联合染毒对小鼠肝氧化损伤的研究

将成年雌性昆明小鼠360只随机分为9组,即空白对照组、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)1.5mg/kg(按体重给药,下同)给药组、DON 2.5mg/kg给药组、玉米赤霉烯酮(ZEA)20mg/kg给药组、ZEA30mg/kg给药组、DON 1.5mg/kg+ZEA 20mg/kg给药组、DON 1.5mg/kg+ZEA 30mg/kg给药组、DON 2.5mg/kg+ZEA 20mg/kg给药组、DON 2.5mg/kg+ZEA 30mg/kg给药组,每天腹腔注射1次,每次200μL,连续注射4d。分别在试验的第0、3、5、8、12天测定小鼠肝组织中MDA含量、抑制OH-能力、TAOC、GSH-Px活性和SOD活性。结果,ZEA或/和DON染毒均导致小鼠肝MDA含量明显升高,抑制OH-能力、T-AOC、GSH-Px活性和SOD活性明显降低(P<0.05或P<0.01),具有明显的染毒剂量和染毒时间依赖效应。结果表明,联合染毒具有互作效应或亚加性效应,其中以2.5mg/kg DON与30mg/kg ZEA联合染毒所呈现的亚加性效应最明显。

复方中药“禽康散”对鸭瘟病毒感染鸭胚及成纤维细胞的保护效应

将不同浓度复方中药"禽康散"和鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)分别以不同方式接种到鸭胚尿囊膜后观察其对DPV感染的鸭胚保护率;用MTT法测定"禽康散"对鸭胚成纤维细胞(DEF)的安全质量浓度和增殖的影响,及安全质量浓度范围内的"禽康散"对DPV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)能力的影响。结果显示,"禽康散"在10日龄鸭胚内对DPV具有显著的杀灭和阻断感染的作用。"禽康散"对DEF的最大安全质量浓度为2-4 g/mL,在2-4～2-8 g/mL质量浓度范围内对DEF有显著的增殖和抑制DPV感染DEF的能力,且与加药方式和药物质量浓度有一定关系。结果表明,一定质量浓度的"禽康散"对DEF具有增殖作用,并对DPV在鸭胚内和细胞水平上均有较好的杀灭和拮抗作用。

复方微量元素“生命元”对CCl4诱导的慢性肝损伤波尔山羊血液生理、生化指标的影响

选用18只3月龄、体质量(12.0±1.0)kg的雄性波尔山羊,随机分为3组,每组6只。其中Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(模型组)、Ⅲ组(干预组)分别皮下分点注射菜籽油1.0mL/kg、50%CCl4菜籽油1.0mL/kg、50%CCl4菜籽油1.0mL/kg(同时颈部肌肉注射"生命元"1.0mL/kg)。于试验前、注射药物后6,12,18,24,30d分别采样测定受试波尔山羊血常规和肝功能。结果表明:(1)模型组红细胞、血红蛋白、白细胞处理后各时间段与对照组显著差异(P<0.05);而干预组仅在试验后6,12d差异显著(P<0.05)。(2)就TP、GLO而言,模型组自试验后18d起显著高于对照组(P<0.05);而干预组在整个试验期与对照组差异均不显著。就ALB而言,模型组在整个试验期均显著低于对照组(P<0.05),而干预组仅在试验6d与对照组差异显著。就A/G而言,模型组、干预组在整个试验期皆极显著低于对照组(P<0.01),而干预组仅在试验后6d显著或极显著低于模型组。复方微量元素"生命元"能有效降低机体因CCl4引发的炎症反应;具有明显的保护肝细胞和改善肝细胞合成血浆蛋白的能力。

藏鸡致病性沙门菌的耐药性分析及质粒耐药基因的检测

为研究藏鸡致病性沙门菌的耐药性及其质粒耐药基因携带情况,分别采用琼脂纸片扩散法和PCR扩增技术对14株藏鸡致病性沙门菌进行耐药表型及质粒耐药基因检测,并通过质粒接合试验验证其质粒耐药基因的水平传播。结果显示,14株分离菌对氨苄西林的耐药性(85.71%)最高,对阿莫西林(78.57%)、羧苄西林(78.57%)、复方新诺明(71.43%)、利福平(71.43%)、四环素(64.29%)的耐药比较严重,仅对头孢唑啉、庆大霉素、丁胺卡那敏感,且92.86%(13/14)的菌株表现为多重耐药性。此外,14株菌共检出blaTEM(78.57%)、blaCTX-M(71.43%)、blaOXA(42.86%)、blaPSE(50.00%)、blaDHA(14.28%)、blaCMY-2(50.00%)、qnrA(28.57%)、qnrS(42.86%)、aac(6′)-Ib-cr(35.71%)、oqxA(42.86%)和oqxB(35.71%)等11种质粒耐药基因。质粒耐药基因可通过接合试验水平转移,其接合成功率为57.14%(8/14)。结果表明,这14株藏鸡致病性沙门菌的耐药性比较严重,且广泛携带质粒耐药基因。