四川地区猪群中鹦鹉热衣原体的分离及鉴定

用鸡胚分离法成功地从四川地区的猪群中分离出 5株鹦鹉热衣原体。用血清学试验 ,药敏试验 ,碘染试验 ,电镜检查 ,动物致病性试验等方法对 5株衣原体进行鉴定。试验表明 :5株衣原体均对青霉素、四环素敏感 ,对磺胺嘧啶不敏感 ;碘染试验均为阴性。 5株衣原体抗原分别能与标准阳性血清反应。电镜观察 5株衣原体均有大小两种颗粒 (即网状小体RB和原生小体EB) ,具有与标准株衣原体相同的结构。结果表明 :本研究分离的

规模化鸡场种蛋蛋壳、蛋内容物的总菌数、大肠杆菌数、沙门氏菌数测定

用稀释滴种法对四川四个万只以上父母代种鸡场送检新鲜种鸡蛋,每个鸡场随机抽检20枚进行了蛋壳、蛋内容物总菌数、大肠杆菌数、沙门氏菌数的定量计数测定。结果表明:不同鸡场的不同种蛋的蛋壳、蛋内容物的总菌数、大肠杆菌、沙门氏菌检出率有较大变化范围,但不同鸡场间带菌对数值平均数和检出率差异都不显著(P>0.05)。各规模化种鸡场的种蛋所带大肠杆菌在蛋壳上及蛋内容物中均为优势菌。

猪喘气病病原的研究

四川省乐山市某猪场的猪发生以咳嗽、气喘为主要症状的呼吸道疾病 ,取病猪新鲜肺组织进行分离培养检出了猪肺炎霉形体 (Mycoplasmahyopneunloniae)XY 1株及支气管败血波氏杆菌 (Boidatellabronchisepticai)JYZ3 株 ;利用分离的 2株病原菌制成灭活苗 ,对猪进行免疫 ,预防效果达 80 %以上。

Dot-PPA-ELISA检测猪血清伪狂犬病抗体的研究

本研究建立了Dot＿PPA＿ELISA检测猪伪狂犬病抗体的方法。制备的诊断膜片PRV点样抗原含量为0 5μg,可以检测的最低猪IgG含量为1 398×10＿8g,灵敏性高。不与猪瘟、猪细小病毒病、猪衣原体病、布氏杆菌病、日本乙型脑炎、口蹄疫阳性血清发生交叉反应,特异性好。研究初步确定检测猪伪狂犬病抗体的阳性标准为血清效价1∶64以上。试验结果表明:该法具有操作方便、快速,结果客观,易于判读等优点,可应用于猪场伪狂犬病的诊断和抗体检测。

应用斑点免疫金染色法检测猪细小病毒病抗体的研究

本研究初步建立了斑点免疫金染色法 (Dot- IGS)检测 PPV抗体的方法。试验采用经蔗糖密度梯度离心制备的 PPV提纯抗原和 p H7.4、直径 5 0～ 6 3.5 mm的胶体金来检测 PPV抗体 ,取得了较为满意的效果 ;该法对猪细小病毒病抗体最小检测量为1.0 0 8× 10 - 1 0 g/ ml,灵敏性高 ;不同猪布鲁氏菌病、猪伪狂犬病、猪衣原体病、猪口蹄疫、猪瘟、猪弓形体病等的阳性血清出现交叉反应 ,特异性强且重复性好。另该法还具有胶体金制备容易、操作简单快捷等优点 ,是对 PPV抗体检测的重要方法。

Dot-PPA-ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体方法的研究

以沙门氏菌的改良H E 抗原为膜载抗原 ,建立了检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot_PPA_ELISA方法。研究选取了特异性良好的抗原 ,确定了Dot_PPA_ELISA的最佳工作条件 ,初步确定了感染仔猪副伤寒的Dot_PPA_ELISA抗体阳性标准为 1∶32。本研究制备的诊断膜片特异性强、敏感性高 ,能够检测到 1∶2 0 4 8稀释的动物试验阳性血清 ;该方法操作简便快捷、结果客观、易于判定、各种试剂材料均可做到标准化 ,适合规模化养猪场仔猪副伤寒的抗体监测以及流行病学调查之用。

仔猪副伤寒血清抗体水平与其保护力的相关性研究

用已经建立的检测仔猪副伤寒血清抗体的Dot PPA ELISA ,对不同仔猪副伤寒抗体水平试验组 14头仔猪和对照组 4头仔猪进行了血清抗体效价测定 ,并以沙门菌强毒攻击受试猪 ,测定血清抗体效价与保护力的关系。试验结果表明 ,以Dot PPA ELISA检测的仔猪副伤寒血清抗体几何平均效价不低于 2 8.2 时 ,85 .7%的猪能够抵抗沙门菌强毒的攻击。试验初步确定以Dot PPA ELISA进行猪群免疫监测时 ,血清抗体的几何平均效价 2 8.0 为仔猪副伤寒的保护临界标准 ,该标准的确定为集约化猪场用Dot PPA ELISA检测仔猪副伤寒血清抗体 ,进行仔猪副伤寒的诊断。

Dot-PPA-ELISA联合检测猪PRV.Brucella和Chlamydia抗体方法的建立和应用研究

首次将Dot-PPA -ELISA用于联合检测猪衣原体、伪狂犬病毒和布氏杆菌抗体 ,并进行了较大规模的田间猪血清检测。实验对制作诊断膜片的工艺流程和关键材料做了细致研究 ,并进行同步监测、分析。确定了本方法的最佳反应条件和阳性标准。联合诊断膜片 (简称膜片 )具有良好特异性、灵敏性和稳定性。诊断膜片在 4℃保存 8个月、室温 (15～ 2 5℃ )保存 2个月、37℃保存 1个月灵敏性 ,特异性不变。 1∶6 4、1∶12 8、1∶6 4为联合检测猪伪狂犬病、衣原体病和布氏杆菌病抗体的阳性标准。结果表明 ,Dot -PPA -ELISA联合检测法操作方便、快速 ,结果客观 ,易于判读 ,诊断膜片便于寄送、保存 ,性能稳定、可靠 ,并能同时检测多种疫病等优点 ,适宜应用于猪衣原体病。

斑点酶联免疫吸附试验检测猪瘟血清抗体最佳条件的研究

以硝酸纤维膜为固相载体,以猪瘟病毒为抗原,确定了Dot-PPA-ELISA检测猪瘟抗体的最佳反应条件。试验表明,猪瘟兔化弱毒经仔猪睾丸原代细胞培养纯化,以0.05mol/LpH9.5CBS缓冲液稀释至浓度为0.98～1.15mg/mL制备诊检抗原膜片;采用4%蛋清蛋白0.05mol/LpH9.5CBS封闭;检测反应稀释液应用0.01MPPBST(含0.1%PEG、0.05Tween-20),酶结合物工作浓度以1∶30,底物选取4-氯1-萘酚等为检测猪瘟血清抗体的最佳反应条件。重复试验证明了其检测稳定性好。交叉试验、阻断试验证明了其特异性强。