植酸酶及其植物基因工程

综述了植酸酶的来源、其酶学性质及植酸酶的植物基因工程,并对其存在的问题、应用前景作了展望。

饲用植酸酶基因工程菌

植酸酶可以分解动物饲料中的植酸磷,释放出动物能够直接利用的磷.在饲料中添加少量植酸酶可以代替大量价格昂贵的无机磷酸钙的添加,使饲料成本降低,饲料综合利用率提高;此外还可减少磷对土壤和环境的污染.

一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析

从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒（RHDV），命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性；但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线；电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序，序列分析表明VP60基因序列全长1740bp，编码579个氨基酸，测序结果提交GenBank（注册号为DQ069280），并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较，结果表明核苷酸同源性为90．0％～98．0％，氨基酸同源性为94．1％～99．0％，氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区；同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株，丰富了地方毒株资源，为明确我国地方株的分子流行病学，以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。

PCR-RFLP检测猪源致病性沙门氏菌gyrA基因点突变的研究

测定了16株猪源致病性沙门氏菌对5种常用氟喹诺酮类药物的最低抑菌浓度(MIC),结果表明,对5种氟喹诺酮类药物的耐药率在31 2%～56 2%。分别以质粒和染色体为模板,应用PCR扩增16株沙门氏菌的gyrA基因,结果表明,所有菌株均获得以染色体为模板的扩增产物,并从1株鼠伤寒沙门氏菌获得了以质粒为模板的扩增产物。对PCR扩增产物进行RFLP分析,氟喹诺酮高敏菌株没有检出突变位点,中敏菌株和耐药菌株检测出了gyrA基因的点突变。

牦牛致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

采集川西北草原红原县牧区具有腹泻症状的牦牛新鲜粪样,分离鉴定出致病性大肠杆菌40株;选取10种常用的抗菌药物对分离菌株进行了药敏试验。结果表明,分离菌株对庆大霉素、硫酸新霉素、氟哌酸、土霉素和恩诺沙星高度敏感,敏感率达100%(40/40),多数菌株对氨苄青霉素、链霉素、头孢唑啉耐药,耐药率分别为50%(20/40)、42.5%(15/40)和40%(16/40)。

枯草芽孢杆菌整合载体研究进展

芽孢杆菌质粒经常在复制时出现不稳定的单链(ssDNA)形式,从而导致质粒载体的丢失,而采用整合载体将克 隆基因整合到宿主染色体,是克服枯草杆菌质粒不稳定性的一个有效途径。本文综述了芽孢杆菌整合载体的研究历 程、整合机理、整合类型及其应用和前景。

猪圆环病毒2型感染的PCR检测及防治

对规模化猪场发现的患有断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)典型症状的病猪,采用针对猪圆环病毒2型(PCV2)开放阅读框2(ORF2)设计的特异性引物进行PCR检测。从20头发病猪的组织样品中检测PCV2,结果有18头呈阳性结果,检测结果在四川省首次证实了猪圆环病毒2型(PCV2)感染,并提出了相应的综合防治措施。

植酸酶phyC基因表达载体的构建及其在E.coli中的表达

以phyC -PUC18-T为模板 ,扩增出枯草芽孢杆菌中性植酸酶phyC基因 ,克隆至T载体中 ,经酶切鉴定及序列测定后重组入谷胱甘肽S -转移酶融合表达载体pGEX - 4T - 1中 ,转化大肠杆菌JM10 9,重组质粒在宿主JM10 9中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 4 5次基本保持稳定 ,0 1mMIPTG诱导后酶活测定结果表明 ,表达产物具有生物学活性。SDS -PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,相对分子量 (Mr)为 6 9kD ,30℃诱导 3h后 ,表达的目的蛋白量占菌体总蛋白的 4 7 4 %。

四川草科鸡IL-15 cDNA的克隆与序列分析

根据GenBank上登录的鸡IL-15基因序列,设计合成了一对特异性引物,以ConA诱导的鸡脾淋巴细胞提取的总RNA为模板进行RT-PCR技术扩增,并克隆到pMD18-T载体测序。测序结果表明,四川草科鸡IL-15开放阅读框(ORF)由564个核苷酸组成,编码187个氨基酸,与GenBank中公布的ChIL-15基因进行比较,核苷酸和氨基酸同源性为98.6%～99.5%。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白具有亲水性,有很强的抗原性,共有3个潜在的N-糖基化位点,可能存在3个蛋白激酶C磷酸化位点,存在2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。