四川草科鸡IL-15 cDNA的克隆与序列分析

根据GenBank上登录的鸡白介素15(IL-15)基因序列,设计合成一对特异性引物,以ConA诱导的鸡脾淋巴细胞提取的总RNA为模板进行RT-PCR扩增,并克隆到pMD18-T载体测序。测序结果表明,四川草科鸡IL-15开放阅读框(ORF)由564个核苷酸组成,编码187个氨基酸,与GenBank中公布的鸡白介素15基因进行比较,核苷酸和氨基酸同源性为98.6%～99.5%。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白具有亲水性,有很强的抗原性,共有3个潜在的N-糖基化位点,可能存在3个蛋白激酶C磷酸化位点,存在2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。

“自杀性”DNA疫苗研究进展

DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点。但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制。“自杀性”DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗。由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点。同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效。文章针对“自杀性”DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍。

山地乌骨鸡IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ真核表达载体构建及其对IBV DNA疫苗免疫增强作用研究

利用RT-PCR法从刺激的山地乌骨鸡的外周淋巴细胞及脾脏组织总RNA中扩增出与鸡IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ基因预期大小的DNA片段,并与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL2、pDNAIL15、pDNAIL18及pDNAIFN-γ.研制了4种分子免疫佐剂,对通过检测血清总IgG值、CD4＋、CD8＋百分含量,研究了４种分子免疫佐剂对禽传染性支气管炎DNA疫苗的免疫增强作用.并对pDNAIL2在鸡胚成纤维细胞中的表达进行了研究.研究发现,所有分子佐剂和DNA疫苗联合接种试验组鸡血清总IgG值、CD4＋T及CD8＋T淋巴细胞含量从5天后就一直高于DNA疫苗单独注射组,并在15天和21天时出现差异显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）.结果表明,IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ对IBV DNA疫苗有免疫增强作用,且pDNAIL2在体外得到了表达.