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两种色型黄粉虫酚氧化酶原的cDNA克隆、生物信息学分析及表达水平检测 被引量:3
1
作者 黄琼 胡杰 王勤 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期594-604,共11页
酚氧化酶是黑色素合成和昆虫免疫的关键酶,通常以无活性的酚氧化酶原形式存在。为给黄粉虫Tenebrio molitor遗传分化和免疫防御研究提供参考,本研究采用PCR和RACE技术克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的酚氧化酶原基因Tm-ppo,对其cDNA序... 酚氧化酶是黑色素合成和昆虫免疫的关键酶,通常以无活性的酚氧化酶原形式存在。为给黄粉虫Tenebrio molitor遗传分化和免疫防御研究提供参考,本研究采用PCR和RACE技术克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的酚氧化酶原基因Tm-ppo,对其cDNA序列及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR检测其在两种色型黄粉虫不同发育阶段mRNA表达水平上的动态变化。结果表明:从黄、黑两种色型黄粉虫幼虫中克隆出的两个Tm-ppocDNA序列全长均为2199bp,碱基序列一致性为99%,包含一个2055bp的开放阅读框,编码684个氨基酸,它们的编码蛋白有3个氨基酸差异:第176位(P→A)、256位(V→A)和648位(I→M)。这两个基因分别被命名为Tm-ppo-1和Tm-ppo-2(GenBank登录号分别为JX987235和JX987234)。Tm-ppo-1和Tm-ppo-2编码的酚氧化酶原异构体蛋白(分别为Tm-PPO-1和Tm-PPO-2)存在一个可能的酚氧化酶原水解活化位点(R50~F51残基之间)和一个双铜结合中心(第196~239位残基和第344~411位残基);同时含有一个类似巯基酯区域的序列(第579~588位残基)及一个C-末端保守基序(第634~645位残基);但它们无氨基端疏水信号肽序列,也不存在跨膜区域。Tm-PPO-1和Tm-PPO-2的二级结构由大量的α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲组成;三级结构分为前导域(第16~66位残基)、不相邻的功能域Ⅰ(第3~15位残基和第67~181位残基)、功能域Ⅱ(第182~419位残基)和功能域Ⅲ(第420~679位残基)4部分。此外,Tm-ppo-1和Tm-ppo-2在黄、黑两种色型黄粉虫的各发育期均有表达,并且不同发育阶段的mRNA表达水平呈现明显的变化规律:幼虫期﹥成虫期﹥蛹期。同时,环境温度对Tm-ppo-1和Tm-ppo-2的mRNA表达具有显著影响:与常温对照组(25~30℃)相比,42℃暴露24h和48h的两种色型黄粉虫幼虫、蛹和成虫的mRNA表达量明显下调。相同试验条件下,黑色型黄粉虫幼虫和成虫的Tm-ppo-2mRNA表达量明显高于黄色型幼虫和成虫的Tm-ppo-1mRNA表达量,但两种色型黄粉虫蛹的Tm-ppo异构体表达量无显著差异。本研究为进一步探讨黄粉虫的遗传分化和免疫防御提供了有益参考。 展开更多
关键词 黄粉虫 色型 酚氧化酶原 基因异构体 生物信息学 MRNA表达
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Plasmid DNA Analysis of Pathogenic Escherichia coli in Musk Deer 被引量:11
2
作者 罗燕 程建国 +3 位作者 郑士华 赵翠 李蓓 李敏 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第3期22-25,共4页
[Objective] The pathogenic Escherichia coli in musk deer was classified at molecular level to provide basic materials for molecular epidemiology of pathogenic Escherichia coli in musk deer. [Method] Plasmids from 24 p... [Objective] The pathogenic Escherichia coli in musk deer was classified at molecular level to provide basic materials for molecular epidemiology of pathogenic Escherichia coli in musk deer. [Method] Plasmids from 24 pathogenic Escherichia coli in musk deer were extracted by the Lysis Triton method, and then identified by single enzyme digestion with three endonucleases of Hind Ⅲ, EcoR Ⅰ and BamH Ⅰ. [Result] The yield rate of plasmids was 91.6%, and 24 pathogenic Escherichia coli in musk deer had the identical or similar plasmid profiles. [Conclusion] Plasmid DNA analysis offers scientific basis for molecular epidemiology of pathogenic Escherichia coli in musk deer in Sichuan Institute of Musk Deer Breeding. 展开更多
关键词 Musk deer Pathogenic Escherichina coil Plasmid DNA Plasmid profile
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林麝肺炎及化脓性疾病的病理组织学观察 被引量:8
3
作者 罗燕 程建国 +4 位作者 王建明 康纪平 蔡永华 李秋波 贾炼 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期122-123,共2页
为观察患肺炎及化脓性疾病死亡林麝的肺脏、肝脏、心脏和肾脏的病理组织学变化,采用石蜡切片、苏木素-伊红染色后显微镜检查。结果发现,肺脏主要表现为化脓性肺炎,肝脏主要表现为急性肝炎,心脏主要表现为急性心肌心包膜炎,肾脏主要表现... 为观察患肺炎及化脓性疾病死亡林麝的肺脏、肝脏、心脏和肾脏的病理组织学变化,采用石蜡切片、苏木素-伊红染色后显微镜检查。结果发现,肺脏主要表现为化脓性肺炎,肝脏主要表现为急性肝炎,心脏主要表现为急性心肌心包膜炎,肾脏主要表现为急性肾小球肾炎。 展开更多
关键词 林麝 病理学 组织学
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2种色型黄粉虫酚氧化酶同工酶的比较 被引量:3
4
作者 黄琼 胡杰 +1 位作者 周定刚 苟琳 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期377-386,共10页
为黄粉虫(Tenebrio molitor L.)品种选育、体色分化及免疫防御研究提供参考,采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳并结合分光光度法,对黄、黑2种色型黄粉虫各发育期的酚氧化酶(包括单酚氧化酶和二酚氧化酶)同工酶酶谱及酶活性进行比较研... 为黄粉虫(Tenebrio molitor L.)品种选育、体色分化及免疫防御研究提供参考,采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳并结合分光光度法,对黄、黑2种色型黄粉虫各发育期的酚氧化酶(包括单酚氧化酶和二酚氧化酶)同工酶酶谱及酶活性进行比较研究。结果表明:在2种色型黄粉虫的各发育期,共发现迁移率不同的单酚氧化酶(MPO)同工酶酶带6条、二酚氧化酶(DPO)同工酶酶带5条,其中MPO酶带分布在3个泳动区,DPO酶带分布在2个泳动区,黑色型卵比黄色型卵多1条MPO特征性酶带;并且黑色型卵、幼虫和成虫的MPO和DPO活性显著高于黄色型卵、幼虫和成虫;但在蛹期,MPO活性黄色型比黑色型高,而DPO活性则是黑色型比黄色型高;此外,同一色型黄粉虫在不同发育阶段的MPO和DPO同工酶酶带数、酶活性强弱及迁移率变化明显,其中,卵期有MPO和DPO特有酶带各1条,幼虫期只有1条DPO特有酶带;同时,各发育阶段的MPO和DPO同工酶酶谱及酶活性变化规律不同,由卵至成虫期,MPO活性变化趋势为:卵期>蛹期>成虫期>幼虫期,DPO活性变化趋势为:幼虫期>成虫期>蛹期>卵期。上述结果为进一步研究黄粉虫的体色分化、免疫防御和品种选育奠定了理论基础。 展开更多
关键词 黄粉虫 黄色型 黑色型 单酚氧化酶 二酚氧化酶 酶谱 酶活性
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两种色型黄粉虫抗冻蛋白cDNA克隆、序列分析与表达分析 被引量:2
5
作者 黄琼 胡杰 +3 位作者 周定刚 王勤 杨伟 朱天辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期659-667,共9页
产生抗冻蛋白(antifreeze proteins,AFPs)是大多数昆虫抵抗低温的一个重要策略。为给黄粉虫Tenebriomolitotr耐寒机理研究提供参考,本研究采用RT-PCR、5'RACE和3'RACE法克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的抗冻蛋白基因Tm-afp,分... 产生抗冻蛋白(antifreeze proteins,AFPs)是大多数昆虫抵抗低温的一个重要策略。为给黄粉虫Tenebriomolitotr耐寒机理研究提供参考,本研究采用RT-PCR、5'RACE和3'RACE法克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的抗冻蛋白基因Tm-afp,分析了其基因序列及所编码的氨基酸序列,并检测了其在这两种色型间的mRNA水平差异。结果表明:从黄、黑两种色型黄粉虫幼虫克隆出的Tm-afp cDNA全长分别为579bp和588bp,它们包含一个20bp的5'端非翻译区、一个402bp的开放阅读框和一个变异较大的3'端非翻译区,其碱基序列一致性为95%。由于这两个抗冻蛋白基因编码的蛋白成熟肽存在两个氨基酸差异:第35位(D→E)和130位(T→S),因此将其判定为黄粉虫抗冻蛋白基因Tm-afp的两个异构体,并分别命名为Tm-afp-1和Tm-afp-2。Tm-afp-1和Tm-afp-2编码的抗冻蛋白异构体(分别为Tm-afp-1和Tm-afp-2)信号肽之间有3个氨基酸差异:第2位(G→A)、9位(S→T)和27位(Y→N);其成熟肽的第一个氨基酸为谷氨酰胺,含8个高度保守的12aa短串联重复序列,每个重复序列的第2位和第8位为半胱氨酸。此外,Tm-afp-1和Tm-afp-2均属富含苏氨酸和半胱氨酸的昆虫抗冻蛋白,其二级结构均由大量的β-折叠和无规则卷曲组成,三级结构为8个特殊的右手β-螺旋,每一圈螺旋由12个氨基酸组成;在β-螺旋的一个侧面规则排列着由保守XCT形成的β折叠片层。同时,低温可以诱导黄、黑两种色型黄粉虫Tm-afp的表达,但长时间低温诱导下黑色型黄粉虫幼虫的Tm-afp表达量显著高于黄色型黄粉虫幼虫Tm-afp表达量。结果提示,黄粉虫种内不同色型间,抗冻蛋白基因Tm-afp可能存在多种异构体,并且黑色型黄粉虫Tm-afp比黄色型黄粉虫Tm-afp对低温的应答更强烈。这一研究结果为进一步探索黄粉虫的耐寒性机理提供了有益参考。 展开更多
关键词 黄粉虫 色型 抗冻蛋白 基因异构体 序列分析 MRNA表达
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中药对麝香产量的影响研究 被引量:3
6
作者 程建国 罗燕 +2 位作者 蔡永华 王大中 王洪永 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第26期12579-12581,共3页
[目的]探索利用中药提高麝香产量的可行性。[方法]以中兽医理论为指导,设计一组中药配方,对人工饲养的雄性林麝进行饲喂试验。[结果]试验中老年林麝的平均鲜香产量为13.93 g,试验中药配方对恢复中老年林麝的产香能力具有良好效果。泌香... [目的]探索利用中药提高麝香产量的可行性。[方法]以中兽医理论为指导,设计一组中药配方,对人工饲养的雄性林麝进行饲喂试验。[结果]试验中老年林麝的平均鲜香产量为13.93 g,试验中药配方对恢复中老年林麝的产香能力具有良好效果。泌香前饲喂组的平均产香量比对照组下降38%。全程饲喂组的平均产香量比对照组下降32%。泌香前饲喂组的平均鲜香产量比全程饲喂组低39.6%。试验组的泌香时间及泌香持续时间与对照组基本一致。试验中药配方极显著地提高了中老年林麝的产香量,但对泌香盛期健康林麝产香量的影响不显著。[结论]该中药配方对中老年雄性林麝具有保健作用,但对健康林麝的泌香机能有负面影响。 展开更多
关键词 配方中药 林麝 平均产香量
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中药麝香抗肿瘤研究进展 被引量:15
7
作者 张亚兰 罗燕 +3 位作者 刘春兰 冯丽娟 王成志 魏亮 《畜牧与饲料科学》 2009年第4期191-192,共2页
对麝香的药理作用及其抗肿瘤机制进行了较详细的综述,并提出了麝香有可能成为继紫杉醇等中药之后的又一重要的抗肿瘤药物,但其潜在的抗肿瘤机制尚未完全明白,有待进一步研究。
关键词 麝香 抗肿瘤 研究进展
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粗柄鸡枞菌总DNA提取及ITS区克隆测序研究 被引量:9
8
作者 邹立扣 潘欣 《北方园艺》 CAS 北大核心 2009年第6期217-219,共3页
利用2种DNA提取方法获得了粗柄鸡枞菌总DNA,并比较了2种方法之间的提取效果,利用分子生物学方法扩增并克隆出粗柄鸡枞菌长632 bp的ITS区序列,为以后的鸡枞菌培养及鉴定奠定了一定的基础。
关键词 粗柄鸡枞菌 总DNA 克隆测序
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2种色型黄粉虫酯酶同工酶的比较 被引量:1
9
作者 黄琼 胡杰 苟琳 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期610-616,共7页
采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳并结合分光光度法,对黄、黑2种色型黄粉虫(Tenebrio molitor L.)各发育期的酯酶同工酶酶谱及酶活性进行比较研究.结果表明:在2种色型黄粉虫的各发育期,共发现迁移率不同的酯酶同工酶酶带15条,这些酶... 采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳并结合分光光度法,对黄、黑2种色型黄粉虫(Tenebrio molitor L.)各发育期的酯酶同工酶酶谱及酶活性进行比较研究.结果表明:在2种色型黄粉虫的各发育期,共发现迁移率不同的酯酶同工酶酶带15条,这些酶带分布于5个不同的泳动区;黑色型的幼虫和成虫分别比黄色型的幼虫和成虫各多1条特征性酶带;同一色型黄粉虫各发育期酯酶同工酶的酶带数、酶活性强弱及迁移率也变化较大,卵期的酶带数最少(4条)、最弱,其中2条为卵期的特有性酶带.酶活性检测进一步表明:从卵至成虫期,黑色型黄粉虫的羧酸酯酶(CarE)、乙酰胆碱酯酶(AchE)和磷酸酯酶(ACP和AKP)活性均比黄色型黄粉虫高;同一色型黄粉虫各发育阶段的CarE、AchE及ACP和AKP活性也呈现明显的规律性变化,即:卵期<成虫期<蛹期<幼虫期.上述结果为黄粉虫的抗药性研究及品种选育积累了一定的基础数据. 展开更多
关键词 黄粉虫 黄色型 黑色型 酯酶同工酶 酶谱 酶活性
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1株拟盘多毛孢菌的培养·纯化及其ITS区的克隆测序 被引量:2
10
作者 邹立扣 潘欣 张翅 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第20期8507-8509,共3页
[目的]为拟盘多毛孢菌分离、纯化及ITS区克隆测序相关研究提供依据。[方法]对鸡枞菌内生拟盘多毛孢菌进行分离、纯化,并通过形态学及分子生物学的方法进行鉴定,对其ITS区进行PCR扩增和克隆测序分析。[结果]形态学鉴定结果显示没有已报... [目的]为拟盘多毛孢菌分离、纯化及ITS区克隆测序相关研究提供依据。[方法]对鸡枞菌内生拟盘多毛孢菌进行分离、纯化,并通过形态学及分子生物学的方法进行鉴定,对其ITS区进行PCR扩增和克隆测序分析。[结果]形态学鉴定结果显示没有已报道的拟盘多毛孢菌与其相似,系统发育树结果也表明其属于一单独分支中。[结论]建立拟盘多毛孢菌的ITS序列数据库是十分必要的。 展开更多
关键词 培养 拟盘多毛孢属 克隆
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乙醇对酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae应激性的研究进展 被引量:1
11
作者 曹文涛 黄强 +1 位作者 向阳 熊英 《酿酒科技》 北大核心 2006年第8期101-103,共3页
在酿酒发酵工业中,虽然酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae具有较高的乙醇耐受能力和乙醇产率,但也有一个乙醇的耐受能力极限。乙醇应激对酿酒酵母所产生的影响,包括乙醇应激对细胞质膜、HSP热激蛋白、抗氧化酶、海藻糖的影响以及高温高... 在酿酒发酵工业中,虽然酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae具有较高的乙醇耐受能力和乙醇产率,但也有一个乙醇的耐受能力极限。乙醇应激对酿酒酵母所产生的影响,包括乙醇应激对细胞质膜、HSP热激蛋白、抗氧化酶、海藻糖的影响以及高温高压等因素如何影响酿酒酵母的乙醇耐受力;以及当前研究中存在的问题。 展开更多
关键词 酿酒酵母 乙醇 应激性 耐受性
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鸡枞菌形态学及其分子鉴定 被引量:15
12
作者 邹立扣 潘欣 +2 位作者 韩军涛 杨明富 魏碧霞 《食用菌》 2009年第2期17-18,共2页
在获得不同种鸡枞菌总DNA的基础上,利用分子生物学方法扩增并克隆出3种鸡枞菌ITS区序列,首次对不同种鸡枞菌ITS区进行了同源性分析及进化树的构建,为以后的鸡枞菌培养及鉴定奠定了良好的基础。
关键词 鸡枞菌 筛选 发酵 多糖 生物量
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鸡菌内生拟盘多毛孢菌的分离和培养及鉴定 被引量:2
13
作者 邹立扣 潘欣 +2 位作者 韩军涛 安明松 张庆 《中国食用菌》 2008年第5期44-47,共4页
目前鸡地从菌尚不能进行人工栽培,而与其内生生长的拟盘多毛孢菌也许是影响其栽培的因素之一。采用常规组织分离法,从鸡地从菌上分离出一株拟盘多毛孢菌,利用常规组织分离法,从鸡地从菌上分离出一株拟盘多毛孢菌,对其进行了培养特性分... 目前鸡地从菌尚不能进行人工栽培,而与其内生生长的拟盘多毛孢菌也许是影响其栽培的因素之一。采用常规组织分离法,从鸡地从菌上分离出一株拟盘多毛孢菌,利用常规组织分离法,从鸡地从菌上分离出一株拟盘多毛孢菌,对其进行了培养特性分析及形态学鉴定,利用分子生物学方法对ITS区进行了克隆测序,利用分子生物学软件得到Pestalotiopsis属进化树,结合形态学特征,确定其为忽视拟盘多毛孢Pestalotiopsis neglecta。 展开更多
关键词 鸡[土从]菌 拟盘多毛孢菌 分离 鉴定
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麝致病性大肠杆菌的质粒DNA分析
14
作者 罗燕 程建国 +3 位作者 郑士华 赵翠 李蓓 李敏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第25期11882-11884,11888,共4页
[目的]将麝致病性大肠杆菌从分子水平上分型,为麝大肠杆菌的分子流行学研究提供基础材料。[方法]采用Lysis Triton法对24株麝致病性大肠杆菌进行质粒抽提,并用HindⅢ、EcoRⅠ及BamHⅠ3种内切酶对质粒进行单酶切。[结果]质粒得率为91.6%... [目的]将麝致病性大肠杆菌从分子水平上分型,为麝大肠杆菌的分子流行学研究提供基础材料。[方法]采用Lysis Triton法对24株麝致病性大肠杆菌进行质粒抽提,并用HindⅢ、EcoRⅠ及BamHⅠ3种内切酶对质粒进行单酶切。[结果]质粒得率为91.6%,24株麝致病性大肠杆菌具有相同或相似的质粒图谱。[结论]质粒DNA分析为四川养麝场致病性大肠杆菌的分子流行病学提供了科学依据。 展开更多
关键词 致病性大肠杆菌 质粒DNA 质粒图谱
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麝致病性沙门氏菌的质粒DNA分析
15
作者 罗燕 程建国 +4 位作者 邹立扣 李蓓 郑士华 赵翠 严智升 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第6期71-73,共3页
本文采用LysisTriton法对15株麝致病性沙门氏菌进行质粒抽提,并用HindⅢ、EcoRⅠ及BamHⅠ3种内切酶对质粒进行单酶切分析,结果表明:质粒得率为93.3%,15株麝致病性沙门氏菌菌株具有相同或相似的质粒图谱和酶切图谱。质粒DNA分析为四川养... 本文采用LysisTriton法对15株麝致病性沙门氏菌进行质粒抽提,并用HindⅢ、EcoRⅠ及BamHⅠ3种内切酶对质粒进行单酶切分析,结果表明:质粒得率为93.3%,15株麝致病性沙门氏菌菌株具有相同或相似的质粒图谱和酶切图谱。质粒DNA分析为四川养麝场致病性沙门氏菌的分子流行病学分析提供了科学依据。 展开更多
关键词 致病性沙门氏菌 质粒DNA 质粒图谱
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流沙河流域不同土地退化程度下植物分布特征
16
作者 林晓利 张世熔 +2 位作者 胡超 刘永恩 李婷 《山地学报》 CSCD 北大核心 2006年第B10期38-46,共9页
 根据野外植物调查的分析数据,对流沙河流域干旱河谷不同土地退化程度下植物分布特征进行了研究。结果表明,调查样方中分布的植物共33科57属60种。禾本科(Gramlneae)、菊科(Compositae)、蔷薇科(Rosogetle)、豆科(Legumlnosa...  根据野外植物调查的分析数据,对流沙河流域干旱河谷不同土地退化程度下植物分布特征进行了研究。结果表明,调查样方中分布的植物共33科57属60种。禾本科(Gramlneae)、菊科(Compositae)、蔷薇科(Rosogetle)、豆科(Legumlnosae)、漆树科(anaeardiaceae)、松科(Pinaceae)、十字花科(cn伽)、桑科(Moraceae)以及马桑科(Corlarlaceae)等9科植物共34种,占所有样方物种数的56.67%,其中早生植物占79.41%,体现了干旱河谷植被的特征。方差分析结果表明,不同土地退化程度之间的物种丰富度差异不显著,但呈现对照(无明显退化)〉重度退化〉中度退化〉轻度退化的趋势;而生物量和盖度均存在极显著差异,其均值均以对照最高,重度退化下最低。人为干扰和海拔通过人为活动强度或气候差异影响不同土地退化程度下的物种丰富度、生物量以及盖度。 展开更多
关键词 土地退化 植物分布特征 物种组成 干旱河谷
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兔须癣毛癣菌新变种的分离与鉴定 被引量:6
17
作者 邹立扣 曾博 +6 位作者 王红宁 李金良 李旭庭 龚雪 张安云 夏青青 周英顺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期32-35,共4页
从暴发皮肤病的某家兔场患病兔中分离到1株病原真菌,直接镜检、分离培养及致病性试验后,得到一种致病真菌。通过培养特性、显微观察及分子鉴定,显示该菌培养特性与已报道须癣毛癣菌均不相同,所有培养基上均未见螺旋菌丝,ITS区进化树亦... 从暴发皮肤病的某家兔场患病兔中分离到1株病原真菌,直接镜检、分离培养及致病性试验后,得到一种致病真菌。通过培养特性、显微观察及分子鉴定,显示该菌培养特性与已报道须癣毛癣菌均不相同,所有培养基上均未见螺旋菌丝,ITS区进化树亦标明其与其他种(变种)均不在同一分支中,据此确定为须癣毛癣菌的新变种(Trichophyton mentagrophytes var.sp.)。 展开更多
关键词 须癣毛癣菌 新变种
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