圈养大熊猫肠道微生物分离、鉴定及细菌耐药性研究

对中国卧龙自然保护区大熊猫研究中心-碧峰峡基地64只大熊猫分别采取粪样，用选择性培养基分离大肠杆菌、沙门氏菌，根据形态特征及16S rDNA序列对菌株进行鉴定；用PDA培养基分离真菌，真菌通用引物ITS4、ITS5进行扩增鉴定。采用K-B法（CLSI）药敏试验测试大肠杆菌和沙门氏菌对18种药敏纸片的耐药性。形态学与rDNA-ITS序列鉴定表明，共分离到真菌19株，鉴定为8个属。分离出大肠杆菌88株，沙门氏菌47株；大肠杆菌对各抗生素的耐药率为0%~35.22%，耐药率为TET（35.22%）、AML（12.50%）、S3（12.50%），共产生17种耐药谱，其中TET、AML-TET谱型占优势；沙门氏菌对各抗生素的耐药率为0%~42.55%，耐药率为TET（42.55%）、AML（40.43%）、S3（38.30%），也产生了17种耐药谱，AML和AML-TET谱型占优势。通过对细菌和真菌的分离鉴定以及细菌的耐药性试验，了解大熊猫肠道微生物与不同个体的关系，为研究大熊猫的营养及消化等奠定基础，对预防和诊断大熊猫肠道疾病，提高大熊猫的存活率提供依据。

四川省猪肉源大肠杆菌和沙门氏菌的分离与耐药性分析

采集四川省鲜猪肉126份,选择性培养基分离大肠杆菌、沙门氏菌,划线纯化后,通过形态特性及16SrDNA序列对菌株进行鉴定,利用K-B法(CLSI)药敏试验检测大肠杆菌和沙门氏菌对17种抗生素的耐药性。结果表明:共获得大肠杆菌105株,沙门氏菌18株,检出率分别为83.33%和14.28%。大肠杆菌对各种抗生素的耐药率在0%～55.3%,对四环素、氨苄西林耐药率最高,分别为55.3%、52.3%,对其他抗菌药物的耐药率依次为卡那霉素(26.7%)>链霉素(19.1%)>环丙沙星(17.1%)>诺氟沙星(14.3%)>头孢噻吩(11.5%)>氨苄西林/舒巴坦(4.8%)>头孢曲松、头孢噻肟、氨曲南、庆大霉素(2.9%)>头孢他啶(1.9%)>阿莫西林/克拉维酸(0.8%)>丁胺卡那霉素(0.1%)>亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦(0%),共产生28种耐药谱,氨苄西林、四环素及氨苄西林/四环素谱型占优势。沙门氏菌对各种抗生素的耐药率在0%～55.5%,其中对四环素、氨苄西林、链霉素的耐药率最高,依次是55.5%、38.9%、27.8%,对其他抗菌药物的耐药率依次是:氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸(11.1%)>头孢噻肟、卡那霉素、头孢噻吩、庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星(5.6%)>头孢曲松、头孢他啶、亚胺培南、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、丁胺卡那霉素(0%),共产生13种耐药谱。四川省肉源大肠杆菌、沙门氏菌对各类抗生素已表现出一定的耐药性,虽耐药率相对较低,但多重耐药已经成为普遍现象,应引起足够重视,并加强对其监测。

鸡枞菌ITS区克隆、测序及其系统发育关系

采集鸡枞菌(Termitomyces)子实体,对其进行rDNA-ITS区序列聚合酶链式反应扩增测序,利用MEGA5对rDNA-ITS不同区域作序列分析,并构建鸡枞菌转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)系统发育树。结果表明:在10种鸡枞菌中,测序结果表明鸡枞菌rDNA-ITS区长度在527~661bp。系统发育树表明,10种鸡枞菌中,有8种鸡枞菌各为一支,尖盾鸡枞菌与球盖白蚁伞聚为一支;待定种A1、E1、H1独为一支,可能为新种;B1、G1、D1可能为谷堆鸡枞菌;I1可能为根白蚁伞;ZZ1可能为粗柄鸡枞菌;待定种C1不能明确。结果证明,ITS1及ITS1-5.8S rDNA-ITS2可用于鸡枞菌进行种间系统发育树的建立,但ITS1区构建的鸡枞菌种间系统发育树支持率最高,ITS2区可辅助进行某些待定种的鉴定。

大熊猫源大肠杆菌及肺炎克雷伯氏菌对消毒剂耐药性研究

本实验对大熊猫肠道分离的88株大肠杆菌、32株肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂BC、CTPC、CTAB及DDAC的最小抑菌浓度（MIC）值进行测定,并扩增了消毒剂的耐药基因。结果显示,大肠杆菌对季铵盐类消毒剂MIC值为：BC的MIC值介于8~128 mg/L;CTPC的MIC值在32~256 mg/L之间;CTAB的MIC值为64~512 mg/L;DDAC的MIC值介于8~128 mg/L。肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂的耐药情况为：BC的MIC值介于16~512 mg/L;CTPC的MIC值在64~256 mg/L之间;CTAB的MIC值介于128~512 mg/L;DDAC的MIC值介于8~64 mg/L。可见,肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂的MIC值要大于大肠杆菌对季铵盐类消毒剂的MIC值。耐药基因检测结果表明,大肠杆菌季铵盐类消毒剂的染色体型耐药基因扩增率为68.18%~98.86%,最高为sug E（98.86%）,emr E最低（68.18%）,没有检测出qac E、qac F、qac G,检出率最高的可移动遗传元件介导耐药基因为qac EΔ1（19.31%）。肺炎克雷伯氏菌的染色体型耐药基因检出率为13.64%~28.41%,ydg E最高（28.14%）,emr E检出率最低（13.64%）,可移动遗传元件介导耐药基因sug E（p）检出率最高（6.82%）,qac EΔ1、qac F、qac G基因未检出。测定大熊猫源大肠杆菌及肺炎克雷伯氏菌对消毒剂的耐药性,对圈养大熊猫消毒剂的规范使用,防控大熊猫细菌性疾病以及细菌对消毒剂耐药性有着重要意义。

大熊猫肠道大肠杆菌的分离、鉴定及其耐药性分析

本实验分离大熊猫粪便样品中大肠杆菌,利用形态学和分子生物学方法鉴定菌株,采用药敏纸片扩散法(Kirby-Bauer)进行常用抗生素耐药性试验分析。结果表明,从抗生素大类来比较,耐药率依次为:四环素类(55.6%)>青霉素类(26.7%)>磺胺类(18.9%)>喹诺酮类(10%)>头孢类(7.8%)>氨基糖苷类(1.1%)>单环内酰胺类(0)、碳青霉烯类(0)。大肠杆菌对四环素的耐药率最高,达到55.6%;对头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、亚胺配能及美罗配能等敏感,耐药率为0。其它抗菌药物耐药率依次是:阿莫西林(26.7%)>磺胺复合物(18.9%)>氨苄西林/舒巴坦(17.8%)>复方新诺明(11.1%)>萘啶酸(10%)>头孢噻吩(7.8%)>阿莫西林/克拉维酸(3.3%)>庆大霉素(2.2%),共产生了33种耐药谱,大部分菌株至少耐1种药物,TET为优势耐药谱(18/90),其次为TET、AML(10/90),多重耐药较普遍(40/90),个别菌株耐药谱达到6种,此研究为大熊猫肠道疾病的合理、科学治疗奠定了基础。