抗IL-4全人源单链抗体的筛选和鉴定

目的表达人白细胞介素4(IL-4),从全人源单链抗体(sc Fv)文库中筛选抗IL-4全人源sc Fv并鉴定其特异性。方法采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导p ET102/IL-4/BL21表达IL-4,进行纯化鉴定。利用全人源噬菌体抗体文库表达抗IL-4全人源sc Fv,用表达的IL-4作为抗原,筛选阳性克隆菌株经PCR、酶切及测序鉴定。采用斑点杂交检测抗IL-4sc Fv的特异性。结果表达的IL-4融合蛋白相对分子质量(Mr)为27 000。采用该抗原筛选出了表达抗IL-4的阳性克隆,PCR结果显示,在约1000 bp处有扩增的目的条带。酶切结果显示,有2株克隆的指纹图谱相同,其余均不同。选取指纹图谱不同的且与IL-4结合能力强的4个sc Fv的克隆进行测序,显示有3个的序列正确。斑点杂交显示,这3株克隆表达的sc Fv均具有特异性。结论成功筛选到抗IL-4全人源sc Fv。