糖尿病模型小鼠的肠道菌群与血糖关系的探讨

目的:通过降糖物质使糖尿病模型小鼠血糖降低,探讨血糖变化与肠道菌群的关系。方法:采用腹腔注射链脲菌素(STZ)的方法建立小鼠糖尿病模型;在小鼠糖尿病造模前后及降血糖后,采用活菌计数方法,分别检测小鼠肠道主要的菌群,并采用血糖仪测定小鼠血糖值,利用统计学方法研究二者的关系。结果:造模成功小鼠血糖升高(>11.1mmol/L,P<0.05)时,肠道益生菌(双歧杆菌,乳酸杆菌)、梭菌的数量降低(P<0.05);经降糖物质处理后,小鼠血糖降低(P<0.05),肠道益生菌、梭菌的数量恢复到正常值(P<0.05)。但是,某些条件致病菌,如大肠杆菌、肠球菌、真菌等,在整个实验里呈递增状态(P<0.05)。结论:不同降糖物质对肠道菌群影响相似;小鼠肠道益生菌的变化趋势与血糖变化呈负相关,肠杆菌、肠球菌、真菌与血糖变化的规律不明显。

自制裸磁珠对常见食源性致病菌吸附性能的研究

目的:研究自制裸磁珠对常见食源性致病菌和卫生指示菌的吸附性能,摸索从样品中快速分离和浓集细菌的方法。方法:试验裸磁珠对细菌的吸附性能,摸索温度和样品成分对其吸附性能的影响。结果:自制裸磁珠在37℃对常见食源性致病菌和卫生指示菌有很强的吸附,吸附率均高于97%。食品成分对其吸附有一定影响,吸附率最低为58.42%。结论:自制裸磁珠可望用于环境和食品样品中多种细菌的非特异性吸附分离和浓集,值得进一步研究和推广。

人参皂甙Rg1对单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的作用研究

目的观察人参皂甙Rg1对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的影响。方法将雄性SD大鼠80只随机分为4组：UUO组、人参皂甙Rg1组（Rg1）、氯沙坦组（ARB）和假手术组（SOR）。从术后24h开始，Rg1组予人参皂甙Rg1溶液腹腔注射50mg／（kg·d），其余3组予以同等体积生理盐水腹腔注射；ARB组予氯沙坦溶液20mg／（kg·d）灌胃，其余3组予以同等体积生理盐水灌胃，连续14d。术后第3d、7d、14d处死各组大鼠，行HE、Masson和PAS染色，动态观察肾间质病理学改变。采用荧光定量PCR、Western蛋白印迹、免疫组织化学方法从mRNA和蛋白质水平观察各组肾脏组织转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达情况。结果UUO组呈进行性肾间质纤维化改变，包括小管的萎缩、扩张、炎细胞浸润、肾间质胶原的沉积。Rg1组和ARB组上述肾脏病理损害明显减轻。UUO组肾脏组织TGF-β1的表达量较SOR组升高（P〈0．05），尤以7～14d明显。Rg1组和ARB组TGF-β1的表达量与UUO组比较有明显的下降（P〈0．05）。结论人参皂甙Rg1对UUO所致的大鼠肾间质纤维化的形成有明显的抑制作用，其作用机制可能与降低TGF-βI的表达有关。

人参皂甙Rb1对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞p47phox的表达及细胞外基质的影响

目的探讨人参皂甙Rb1(G-Rb1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK52E)氧化应激的作用及对细胞外基质(ECM)的影响。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组,10ng/mL TGF-β1刺激组,不同剂量的G-Rb1干预组(在10ng/mL TGF-β1基础上分别加入10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL G-Rb1),40ng/mL G-Rb1组,100nmol/L NADPH氧化酶抑制剂DPI组。采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;应用免疫组化技术、Western blot检测NADPH氧化酶亚单位p47phox的表达;实时荧光定量PCR(RT-PCR)、酶联免疫吸附法观察细胞外基质主要成分胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的变化。结果与正常对照组相比,TGF-β1可显著增强NRK52E细胞内ROS水平和p47phox的表达,Col-Ⅰ和FN的含量也显著增加(P<0.05)。G-Rb1和DPI明显抑制了TGF-β1诱导的细胞内ROS的产生和p47phox的表达,同时降低了Col-Ⅰ和FN的水平(P<0.05)。结论TGF-β1可以诱导NRK52E细胞ROS和p47phox水平的升高,刺激细胞外基质成分Col-Ⅰ和FN的形成。G-Rb1呈剂量依赖性地抑制了TGF-β1刺激的NRK52E细胞内的ROS水平的升高和细胞外基质的增加。其作用机制可能与降低p47phox的表达有关。

高氧水耐缺氧、抗疲劳作用机制初探

目的 观察高氧水耐缺氧、抗疲劳的功能 ,初步研究其作用机制。方法 通过对小鼠体质量值、血清尿素氮、肝糖原、乳酸含量、小鼠负重游泳时间、缺氧生存时间、亚硝酸钠中毒存活时间的测定 ,了解小鼠体能变化情况。结果 小鼠运动后血清尿素氮含量降低 (P<0 .0 5 ) ;肝糖原储备量增加 (P<0 .0 5 ) ;常压耐缺氧生存时间、急性脑缺血性缺氧生存时间均延长 (P<0 .0 5 )。游泳时间虽无明显差异 ,但有延长的趋势。结论 高氧水能增加能量储备 ,提高小鼠的应激生存能力 ,具有耐缺氧。

德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的非融合表达

目的在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶,为构建能高效表达β-半乳糖苷酶的食品级益生菌株奠定基础。方法选择德氏乳杆菌保加利亚亚种(1.1480和wch9901)β-半乳糖苷酶基因(lacZ)起始密码ATG上游-18bp到ATG下游1bp的一段包含SD位点和ATGA位点的序列为上游引物,PCR扩增lacZ,插入表达质粒pMG36e构建重组表达质粒。转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,提取重组质粒进行酶切鉴定和测序,并测定转化菌β-半乳糖苷酶活性。结果重组质粒酶切鉴定合格;其中插入的外源片段序列与德氏乳杆菌保加利亚亚种lacZ标准序列符合率达99%以上;携带重组质粒pMG36e-lacZ1.1480的大肠杆菌DH5α酶活性为3.074U/mL,酶比活性为6.939U/mgpro;携带重组质粒pMG36e-lacZwch9901的大肠杆菌DH5α酶活性为4.755U/mL,酶比活性为8.537U/mgpro。结论成功在大肠杆菌中非融合表达了德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶;本研究选择的SD位点和ATGA位点能在大肠杆菌中有效地引导蛋白的非融合表达。

五种生物恐怖细菌基因悬浮芯片多重检测方法的建立

目的建立5种生物恐怖细菌的快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法,即炭疽芽胞杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、土拉弗朗西斯菌和类鼻疽伯克霍尔德菌的多重检测。方法针对炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌、土拉弗朗西菌、类鼻疽伯克霍尔德菌的特异性基因序列设计6对引物和相应的特异性探针,经多重PCR扩增并用生物素标记相应的基因片段,标记的PCR产物与包被在不同编码微球上的相应探针杂交,用悬浮芯片扫描仪检测。结果多重PCR悬浮芯片检测体系能够正确的检测和鉴定5种生物恐怖细菌,特异性好,灵敏度高,可用于恐怖样本的高通量筛查。结论建立了多重PCR基因悬浮芯片快速检测几种生物恐怖细菌的方法。

攀枝花地区野生番石榴叶水提取物降血糖作用研究

目的:研究攀枝花地区野生番石榴叶水提取物降血糖作用。方法:雄性昆明种小鼠,诱导葡萄糖性、肾上腺素性和链脲佐菌素性高血糖,受试物灌胃处理。测定处理后小鼠尾静脉血血糖,比较给予受试物前后血糖水平的变化。结果:番石榴叶水提取物不同程度降低外源性高血糖、拮抗应激性葡萄糖升高,明显降低糖尿病小鼠血糖水平,改善糖尿病小鼠糖耐量。结论:攀枝花地区野生番石榴叶水提取物能够抑制多种因素导致的血糖升高,具有明显的降血糖作用。

非融合表达β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌的构建和性能研究

目的构建能非融合表达高活性β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌,并对其酶活性和分泌性能进行研究。方法提取能在大肠杆菌中非融合表达德氏乳杆菌保加利亚亚种β-半乳糖苷酶的重组质粒pMG36e-lacZ1.1480和pMG36e-lacZwch9901,电转化乳酸乳球菌乳酸亚种MG1363。测定重组菌在不同培养时间和乳糖浓度下的β-半乳糖苷酶活性,及在不同培养条件下的酶分泌率。结果携带pMG36e-lacZwch9901的重组乳酸乳球菌(MG1363/pMG36e-lacZ wch9901)具最高酶活性,其β-半乳糖苷酶活性达(16.95±0.09)U/mgpro,为基因初始菌的2.75倍;重组乳酸乳球菌培养24h产酶达高峰;培养基含乳糖时,重组菌酶活测定结果表现为降低;重组乳酸乳球菌表达的β-半乳糖苷酶可分泌到培养基中,当培养基不含红霉素,而含20g/L乳糖时,分泌率最高,达(27.09±0.05)%。结论获得了能非融合表达和分泌高活性β-半乳糖苷酶的重组乳酸乳球菌,可在此基础上进一步研制β-半乳糖苷酶活菌释放体。

分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的初步应用

目的探讨分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的应用价值。方法采集2010年3—7月间在彭州市CDC结核病防治所门诊就诊患者的痰标本382份,其中初诊疑似肺结核患者的痰标本305份,肺结核患者随访痰标本77份,用分子信标荧光定量PCR法和抗酸染色法检测Mtb。结果382份痰标本抗酸染色法、分子信标荧光定量PCR法检测总阳性率分别为12.6%(48/382)、42.4%(162/382),分子信标荧光定量PCR法阳性率显著高于抗酸染色法,差异有统计学意义(χ2=74.5,P<0.001)。结论分子信标荧光定量PCR较抗酸染色法具有更高的灵敏度,不仅提高了肺结核早期诊断的检出率,还能间接反映药物疗效,在肺结核防治工作中具有重要意义。

裸磁珠对高菌量细菌吸附性能的初步研究

目的:研究不同实验条件下自制裸磁珠对细菌吸附效率,优化吸附条件,为后续裸磁珠的应用研究奠定基础。方法:考察不同的磁珠用量、菌量、孵育温度、孵育时间下磁珠对细菌吸附效率,比较磁珠的保存方法对其吸附率的影响。用磁珠吸附定量细菌后计数残留菌数,计算其吸附率。结果:磁珠用量与吸附率近似正相关,吸附容量与原始菌量存在对数线性相关。温度影响吸附效率。孵育时间40 m in后吸附率无明显差异,达到平衡。此外,干式和湿式保存的磁珠,对试验细菌的吸附率无明显差异。结论:自制裸磁珠以50 mg(干式)37℃孵育40 m in对高菌量试验菌(>106cfu/m l)有较高的吸附效率(>80%),可望用于样品中细菌的分离富集。

人参皂苷Rg_1对转化生长因子-β_1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(TEMT)的作用及对细胞外基质(ECM)的影响。方法:将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组,10 mg.L-1TGF-β1刺激组及不同剂量的Rg1干预组(10,20,40 mg.L-1)。应用形态学、免疫组化技术、酶联免疫吸附法、荧光定量PCR,Western蛋白印迹等观察Rg1对TGF-β1诱导的NRK52E细胞转分化的作用及对ECM主要成分胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的影响。结果:与空白对照组相比,NRK52E培养3 d后,TGF-β1刺激组细胞形态学发生明显改变。免疫组织化学和Western蛋白印迹结果显示α-SMA的表达显著增加而E-cadherin的表达明显减少(P<0.05);RT-PCR结果示α-SMA,Col-Ⅰ和FN的mRNA表达明显增高(P<0.05);细胞培养上清液Col-Ⅰ和FN的含量也显著增加(P<0.05);与TGF-β1刺激组相比,各Rg1干预组均不同程度的改善了TGF-β1刺激的细胞形态学改变;有效抑制了α-SMA的表达,部分恢复了E-cadherin的下调(P<0.05);Col-Ⅰ和FN的含量亦明显减少(P<0.05)。结论:TGF-β1可以诱导大鼠TEMT,刺激ECM成分Col-Ⅰ和FN的升高。Rg1呈剂量依赖性地明显地抑制TGF-β1刺激的NRK52E细胞的转分化和ECM的增加。

食品中大肠埃希菌耐药性与整合子的关系研究

目的 研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法 PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因,确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区,分析插入基因盒的序列。结果 5 0株大肠埃希菌中19株携带1类整合子,2株携带2类整合子,集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aad A类基因盒,各种基因盒组合中最常见的是dfr17- aad A 5。结论 细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致,但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。

泸州市农村健康中小学生流脑带菌状况的调查

[目的]了解泸州市农村健康中小学生脑膜炎奈瑟菌的带菌状况,为分析泸州市流脑病的发展趋势提供依据。[方法]采用横断面调查,按整群抽样的方法,在泸州市某地农村小学和中学采集230份咽拭子标本,常规分离培养鉴定及PCR鉴定和分型。[结果]230份咽拭子标本中,分离出13株脑膜炎奈瑟菌,带菌率为5.65%,A群1株,B群10株,C群2株。中、小学生带菌率无统计学差异(χ=0.467,P﹥0.05),性别带菌率的差异亦无统计学意义2(χ=0.530,P﹥0.05)。[结论]泸州市农村健康中小学生流脑带菌以B群为主(10/13),其次为C群(2/13),A群2最低(1/13)。

不同破壁方法提取结核分枝杆菌总RNA的比较

目的建立简便有效的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)总RNA提取方法。方法采用5种方法,分别为160、240和400W超声波联合Trizol法(简称"160W超声法"、"240W超声法"和"400W超声法")、玻璃珠(简称"玻珠")联合Trizol法(简称"玻珠法")和Trizol法(简称"不加玻珠法"),对结核分枝杆菌标准株H37Rv进行破壁,提取总RNA。通过荧光定量逆转录PCR评价不同破壁方法对Mtb总RNA提取效果的影响,以灭菌超纯水代替模板为阴性对照。每种方法分别提取3份样本进行检测。最后结果为3份标本的平均值。结果玻珠法检测组Ct值为20.67,△Rn值为0.644;400W超声法检测组Ct值为22.09,△Rn值为0.571;240W超声法检测组Ct值为21.86,△Rn值为0.503;160W超声法检测组Ct值为25.21,△Rn值为0.411;不加玻珠法检测组Ct值为28.40,△Rn值为0.299;阴性对照Ct值为40.00,△Rn值为0.000。结论直观地从试验结果来看,玻珠法对结核分枝杆菌破壁效果好于超声法。

正常人肠道肠球菌耐药谱研究

[目的]了解正常人肠道肠球菌对临床常用抗生素的耐药水平。[方法]用K-B法(纸片扩散法)测定正常人肠道肠球菌对10种抗生素的敏感性。[结果]正常人肠道肠球菌对头孢唑啉、林可霉素和庆大霉素耐药性最高(100.00%),其次是四环素和红霉素(90.00%),对环丙沙星和利福平呈现一定程度的耐受,对青霉素、氨苄西林和万古霉素则敏感,所有菌株均存在多重耐药性。[结论]正常人肠道肠球菌对临床常用抗生素的耐药水平较高,并存在严重的多重耐药性。

洗必泰MIC作用下大肠杆菌和金黄色葡萄球菌SDS-PAGE图谱的变化

〔目的〕探讨在洗必泰MIC(最小抑菌浓度 )状态下大肠杆菌 ( 80 99株 )、金黄色葡萄球菌 (ATCC 65 3 8株 )菌体蛋白质SDS -PAGE(十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 )图谱的改变 ,为消毒剂抑菌机理的研究和从蛋白质组角度寻找抑菌靶蛋白提供参考。〔方法〕以消毒试验常用的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌标准菌株为例 ,收集在洗必泰作用下的菌体 ,SDS溶解菌体蛋白 ,SDS—PAGE后 ,对比研究洗必泰MIC、低于MIC以及无洗必泰作用下的菌体蛋白质在SDS—PAGE图谱中所表现出来的差异 ,并对试验的有关影响因素进行了摸索。〔结果〕在洗必泰MIC下 ,金黄色葡萄球菌的四条蛋白带 (分别位于 3 1KD左右、3 1KD和 43KD之间、43KD左右处和大于 97.4KD处 )发生明显变化 ;大肠杆菌的一条蛋白带 (位于 66.2KD与 97.4KD之间 )发生明显变化。〔结论〕菌体蛋白条带在SDS -PAGE图谱中所表现出的变深或变浅的现象 ,提示在洗必泰MIC下菌体蛋白正常表达量的增多或减少。

正常人肠道乳酸杆菌耐药性及质粒图谱分析

目的了解正常人肠道乳酸杆菌对临床常用抗生素的耐药水平,研究质粒在乳酸杆菌中的存在频率,分析细菌质粒与耐药谱之间的关系。方法用微量肉汤稀释法测定正常人肠道乳酸杆菌对抗生素的敏感性;分析细菌的质粒图谱,进行质粒消除实验和稳定性实验。结果正常人肠道乳酸杆菌对万古霉素的耐受性最强,其次是环丙沙星和左氟沙星;对庆大霉素、四环素、头孢呋辛和头孢唑啉表现出不同程度的耐受,对青霉素、氨苄西林、利福平、红霉素和罗红霉素较敏感。所有试验菌株均存在多重耐药情况,且有随宿主年龄增加而增加的趋势。93%的菌株含有质粒。经连续传代,4株菌的质粒丢失,致使菌株对庆大霉素和头孢菌素敏感性增加,与其消除质粒后的药敏结果一致。结论正常人肠道乳酸杆菌具有较强的耐药性,多重耐药性较严重,且和年龄有一定相关。大多数菌株都含有质粒,其中5.8kb大小的质粒可能与乳酸杆菌对庆大霉素和头孢菌素的耐受性相关。

健康人肠道大肠埃希菌耐药性与质粒图谱的研究

目的研究深圳市健康人肠道大肠埃希菌携带的质粒与其耐药性之间的关系。方法分离健康人肠道大肠埃希菌,K-B法测定细菌对16种抗菌素的耐药性,分析细菌的质粒图谱,对耐药菌株进行质粒分子分型。结果健康人肠道大肠埃希菌对四环素、萘啶酸、磺胺甲基异恶唑、氨苄西林、复方新诺明和链霉素的耐药率分别为63.33%、49.33%、40.67%、38.67%、35.33%、35.33%,全部菌株对头孢美唑和氨曲南敏感。122株菌(81.33%)耐一种以上抗菌素,88株菌(58.67%)耐2种以上抗菌素,44株菌(29.33%)耐5种以上抗菌素,2株菌耐10种抗菌素。结论深圳市健康人肠道大肠埃希菌耐药性较严重,其耐药性与所携带质粒的数量和大小并无直接联系。