基于流动注射光度法的吸光度/留存时间比自动测定过氧化物酶活性方法

本研究给出了流动注射分光光度系统（FI-SP）测定酶活性浓度（Ec）的通用公式Ec=kΔA/Δt;Δt是在酶促反应线性响应区域内试样塞的平均留存时间;ΔA为平均留存时间处对应的吸光度;k=n V/（εv L）,V为样品注入点到流通池入口之间的管路总容积,n为酶底物与产物的反应摩尔比,ε为产物的摩尔吸收系数,v为注入的酶液体积,L为流通池光程;FI-SP系统确定后k为常数。在此基础上,将H2O2/过氧化物酶（POD）/愈创木酚（GA）反应体系导入FI-SP系统,建立了一种无需标准曲线的POD活性快速准确测定的新方法。此方法优化后的条件：载流磷酸盐缓冲液浓度为0.05 mol/L（p H 5.5）,进样体积为40μL,反应盘管长度200 cm,1.5 mmol/L H2O2,3.5 mmol/L GA,0.4 mol/L HCl（清洗液）,检测波长470 nm,产物的摩尔吸光系数为0.0125 L（μmol·cm）。本方法的重现性RSD〈0.38%（n=11）,分析速度为40样/h,测定范围为450~7260 U/L,检出限为89 U/L。在优化条件及60℃下,用本方法测定了多种白萝卜中POD活性,结果与动力学曲线法完全相同。