成都市社区慢性阻塞性肺疾病患者卫生服务利用及其影响因素分析

目的了解成都市社区慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者卫生服务利用情况及其影响因素。方法随机整群抽取成都市6个社区卫生服务试点社区的所有COPD患者作为调查对象,采用逐户走访填写问卷并结合查阅病案的方法对446名患者进行调查,调查内容涉及患者的一般社会人口学特征,疾病相关内容,对待疾病的态度,卫生服务利用信息以及相关卫生费用等。结果成都市社区COPD患者门诊利用率为53.04%,年均门诊次数为6.04±4.05。COPD患者住院就诊率为18.22%,年均住院次数为6.10±2.61,年均住院时间为(51.65±15.91)d。COPD患者对综合性医院和较大的医院的利用率为45.33%,对社区卫生服务中心利用率为18.22%。影响COPD患者门诊就诊的主要因素为年龄、患者种类、对疾病的态度、病情严重程度和医疗负担形式。影响COPD患者住院与否的主要因素有职业、患者种类、病情严重程度、医疗费用负担形式与家人态度。文化水平、收入、职业、对疾病的态度以及医疗费用负担形式则是影响COPD患者到社区卫生服务中心就诊的主要因素。结论成都市社区COPD患者对卫生服务特别是社区卫生服务的利用较低;有较多的因素影响患者对卫生服务的利用。

分子信标荧光定量PCR快速检测结核分枝杆菌方法的初步研究

目的建立分子信标荧光定量PCR快速检测结核杆菌方法,为临床结核病的诊断提供特异性强、灵敏度高、可标准化、自动化的检测方法。方法根据GenBank数据库公布的结核分枝杆菌IS6110基因的保守序列,设计引物与分子信标探针,建立结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法;以10种细菌作对照分析该方法的特异性与灵敏度;应用已建立的方法检测结核分枝杆菌,评价其应用价值。结果所建立的分子信标荧光定量PCR检测10种细菌,只有结核分枝杆菌有荧光信号,与其他细菌无交叉反应,4拷贝/PCR反应体系的结核分枝杆菌都能有效检出。对100株结核分枝杆菌的检测结果为阳性,单一检测时间仅需2h。结论分子信标荧光定量PCR检测方法快速、灵敏度高、特异性强,可用于快速诊断结核病,为结核病的诊断与治疗提供新的检测手段。

攀枝花地区野生番石榴叶不同提取物降血糖作用研究

目的研究攀枝花地区野生番石榴叶的水提取物、650 m l/L和950 m l/L食用乙醇提取物的降血糖作用。方法雄性昆明种小鼠,诱导葡萄糖性、肾上腺素性和链脲佐菌素性高血糖小鼠模型,比较三种提取物对血糖水平的影响;观察脏器变化,比较体重及肝脏、肾脏、脾脏和胰腺的脏器指数的变化。结果三种提取物能不同程度降低小鼠外源性高血糖、拮抗应激性血糖升高;三种提取物可明显降低糖尿病小鼠血糖水平,水提物、650 m l/L和950m l/L食用乙醇提取物,降糖效率分别为36.3%、33.5%和31.3%。三种提取物中,水提物对小鼠的生长影响较小。结论攀枝花地区野生番石榴叶的水提取物、650 m l/L和950 m l/L食用乙醇提取物具有不同程度的降血糖作用。

T4、φχ174D和f2三种噬菌体对戊二醛消毒剂抵抗力的比较研究

目的筛选出消毒实验中评价消毒因子对病毒灭活效果的指示噬菌体。方法比较研究噬菌体T4、φχ174D和f2对戊二醛消毒剂的抵抗力。消毒剂对噬菌体的灭活效果采用悬液定量灭活试验、中和剂鉴定试验、噬菌体的检测采用双层琼脂法。结果13000mg/L的戊二醛对噬菌体T4作用20min,或6000mg/L的戊二醛对噬菌体T4作用5min即可达到消毒水平(对噬菌体T4的灭活对数值(LIV)或噬菌体T4的对数减少值〔LRV)(log10No-log10Nt)≥4.00log10〕;22500mg/L的戊二醛对噬菌体φχ174D作用20min,或5000mg/L的戊二醛对噬菌体φχ174D作用5min达到消毒水平;34000mg/L的戊二醛对噬菌体f2作用40min,或8000mg/L的戊二醛对噬菌体f2作用10min达到消毒水平。结论上述三种噬菌体对戊二醛的抵抗力由强到弱为:噬菌体f2>噬菌体T4>噬菌体φχ174D。

成都地区肥胖人群UCP2基因多态性研究及其与肠道菌群关系的初探

目的研究成都地区单纯性肥胖和正常体质量成人解偶联蛋白2基因(UCP2)Ala55Val多态性,初步探讨UCP2基因Ala55Val不同基因型与肠道菌群关系。方法采用PCR-RFLP检测86例成都地区成人(单纯性肥胖组43例,正常体质量组43例)的UCP2基因ALa55Val多态性,并分别比较不同基因型间6种肠道菌群数量的差异。结果单纯性肥胖组和正常体质量组均存在UCP2基因Ala/Ala、Ala/Val、Val/Val多态,两者表型分布差异有统计学意义(χ2=11.97,P<0.05);单纯性肥胖组UCP2等位基因突变频率高于正常体质量组,差异有统计学意义(χ2=10.06,P<0.05);单纯性肥胖组、正常体质量组和研究总体中不同基因型人群的6种肠道菌群数量差异无统计学意义(P>0.05)。结论UCP2基因ALa55Val变异可能是成都地区人群单纯性肥胖的危险因素,但该基因ALa55Val变异与肥胖的关联可能与肠道菌群数量改变无关。

耐辐射奇球菌超氧化物歧化酶基因的克隆和表达

目的 构建耐辐射奇球菌 (D.radiodurans)锰超氧化物歧化酶 (Mn- SOD)基因的原核表达重组子 ,并在 E.coli BL 2 1(DE3)中表达。方法 用 PCR方法自 D. radiodurans基因组中扩增 Mn- SOD目的片段。将该基因与原核表达质粒载体 p ET- 30 a(+)连接 ,构建重组质粒 p ET- SOD,并转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)。用异丙基硫代 -β- D-半乳糖苷 (IPTG)诱导重组 SOD蛋白表达 ,SDS- PAGE分析表达产物。结果 获得了 D . radioduransMn- SOD基因的 p ET原核表达重组质粒 ,该质粒经 IPTG诱导能在 E.coli BL 2 1(DE3)中高效表达目的蛋白 ,蛋白活性可达 5 180 0 U / g湿菌体。结论 成功构建了原核表达重组质粒 p ET- SOD,实现了 SOD在原核细胞中的高效表达 ,表达产物活性较高 ,为重组 D. radiodurans Mn- SOD的进一步研究和应用奠定了基础。

淋球菌外膜蛋白NspA基因重组子的构建与表达

目的构建淋球菌标准株外膜蛋白NspA基因重组子,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达外膜蛋白NspA。方法提取淋球菌标准株基因组DNA,PCR扩增其NspA基因,插入表达质粒载体pET-30c(+)中,构建pET-NspA重组子,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和WesternBlot检测表达蛋白。结果成功构建了淋球菌标准株的pET-NspA大肠杆菌表达重组子,经IPTG诱导表达后,该蛋白在大肠杆菌中高效表达。结论淋球菌外膜蛋白NspA在大肠杆菌中的成功表达,为研究该蛋白的免疫学性能、制备抗体和研制预防淋病的疫苗奠定了基础。

致感染大肠埃希菌临床分离株耐药性研究

目的 了解临床分离的致感染大肠埃希菌的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶 (ESBL s)情况 ,指导临床合理使用抗生素控制感染性疾病。方法 采用 Miroscan Walk Away4 0全自动细菌分析仪 ,对临床分离的 10 0株致感染大肠埃希菌进行细菌鉴定、抗生素敏感性测定和产 ESBL s判定。结果 所测抗生素大肠埃希菌耐药率在 5 0 %以上的占 14种 ,耐药率最高的为氨苄青霉素 ,亚胺硫霉素最为敏感 ,耐药菌株耐受抗生素种类从 1到 19种 ,多重耐药菌株占 93% ,产 ESBL s菌株为 4 9% ,产 ESBL s株对绝大部分抗生素的耐药率高于非产 ESBL s株。结论 致感染大肠埃希菌普遍耐药 ,尤其多重耐药广泛流行 ,临床医师须高度重视本医院和本地区大肠埃希菌的药物敏感模式与流行分布 ,合理使用各种抗生素以减缓细菌耐药对其的筛选压力 。

两株耐酸耐胆盐人肠源菌株的鉴定及系统发育分析

目的对两株来源于健康人肠道的耐酸耐胆盐菌株R92-2和R111进行鉴定和系统发育分析,以筛选优良的宿主菌株为最终构建能高效表达和分泌β-半乳糖苷酶的工程菌奠定基础。方法表型特征分析后,利用16SrDNA两端的保守序列作为PCR引物,扩增两株菌的16S rDNA序列并测序,测序结果于GenBank中Blastn并构建系统发育树。结果表型特征分析初步鉴定两株菌为乳酸菌。R92-2的16S rDNA序列与Weissella cibaria的16SrDNA序列同源性为100%;R111的16S rDNA序列与Enterococcus faecium的16S rDNA序列同源性为100%。结论R92-2为Weissella cibaria;R111为Enterococcus faecium。两株菌有望用于构建能高效表达和分泌β-半乳糖苷酶的工程菌。

重组沙门菌侵袭蛋白A的原核表达与纯化

目的在大肠杆菌中表达重组沙门菌侵袭蛋白A,并对表达产物进行分离和纯化。方法提取沙门菌基因组模板,PCR扩增侵袭因子invA基因目的片段,插入表达质粒载体pET-30c(+)中,构建pET-invA重组子,经双酶切和测序证实后,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导重组蛋白表达,镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Westernblot检测鉴定表达蛋白。结果成功构建了沙门菌pET-invA大肠杆菌表达重组子,实现了该蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分离纯化的表达产物纯度达到电泳纯。结论沙门菌侵袭蛋白A的成功表达和分离纯化,为该蛋白的免疫学性能研究、相应抗体的制备以及沙门菌快速检测方法的建立奠定了基础。

-半乳糖苷酶基因工程乳酸菌对乳糖细胞毒性的缓解作用

目的体外评价Β-半乳糖苷酶基因工程乳酸菌缓解乳糖对细胞毒性作用的效果。方法建立乳糖细胞毒性作用CACO-2细胞模型,采用形态学观察及细胞增殖活性等指标检测该菌对乳糖细胞毒性的作用效果。结果成功建立乳糖细胞毒性作用CACO-2体外模型,所构建的Β-半乳糖苷酶基因工程乳酸菌能够保护细胞耐受乳糖毒性而呈现正常形态,并能提高乳糖作用下的细胞活性(P<0.01)。结论Β-半乳糖苷酶基因工程乳酸菌在体外可显著的降低乳糖的细胞毒性作用,为进行其食品级改造奠定了基础。

脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NspA基因重组的构建和表达

目的构建脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NspA基因重组子,实现其在大肠杆菌的高效表达。方法提取脑膜炎奈瑟菌标准株基因组DNA,PCR扩增NspA基因,插入表达质粒载体pET-30c中,构建pET-NspA重组子,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白,镍琼脂糖凝胶纯化NspA融合蛋白。结果获得了脑膜炎奈瑟菌NspA基因的表达重组子,得到NspA诱导表达蛋白并进行了初步纯化。结论成功构建了脑膜炎奈瑟菌NspA基因的表达重组子,实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达,为研究该蛋白的免疫学性能、制备抗体和研制预防脑膜炎的疫苗奠定了基础。

淋球菌外膜蛋白PI基因重组子的构建和表达

目的 扩增四株淋球菌外膜蛋白 PI基因 ,构建 p ET30 b- PI- NG重组子 ,在大肠杆菌中诱导表达外膜蛋白 PI。方法 采集临床淋球菌四株 ,提取细菌基因组 DNA,PCR扩增外膜蛋白 PI基因 ,与克隆载体 p BS- T连接 ,构建 p BS- T- PI- NG重组子 ,测序 ,目的基因插入表达质粒载体 p ET30 b中 ,构建 p ET30 b- PI NG重组子 ,转化表达宿主大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,IPTG诱导蛋白质表达 ,SDS- PAGE初步分析。结果 成功构建了四株淋球菌的p ET30 b- PI大肠杆菌表达重组子 ,经 IPTG诱导表达后 ,其中三株获得表达的目的蛋白 PI。结论 本研究为 PI蛋白免疫学特性的研究、抗体制备、以及预防淋病疫苗的研制奠定了基础。

绵竹地震灾民集中安置点健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率调查

目的了解汶川大地震后绵竹灾民集中安置点流行性脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)带菌状况,为预测疫情和制定防治措施提供依据。方法对绵竹灾区二号桥灾民集中安置点和体育场灾民集中安置点进行单纯随机抽样,采取咽拭子样品887份,采用TaqMan-MGB探针RT-PCR技术以及试剂盒RT-PCR法进行检测。结果887份咽拭子检出3例阳性。结论灾区与四川省及全国其它地区往年带菌率相比流脑带菌率较低,发生流脑疫情的可能性不大,说明灾后卫生防疫等相关部实施的防御措施积极有效,但针对灾区实际环境,进一步的卫生防疫工作不可懈怠。

大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力与其质粒pO157、染色体DNA关系的研究

目的研究连续消毒中大肠杆菌O 157∶H 7对消毒剂抗力的变化及抗力与质粒pO 157、染色体DNA的关系。方法用四种消毒剂连续消毒5株大肠杆菌O 157∶H 7 50代,对比消毒前后试验菌对四种消毒剂的抗力、pO 157酶切图谱和染色体DNA酶切图谱。结果连续消毒50代后,试验菌对二氯异氢尿酸钠、碘伏、季铵盐的抗力增加,对洗必泰的抗力不变。经二氯异氢尿酸钠、季铵盐消毒后的pO 157酶切图谱和原始菌不同,经碘伏、洗必泰消毒后的pO 157酶切图谱与原始菌相同;经二氯异氢尿酸钠、碘伏、季铵盐消毒后细菌染色体DNA X baⅠPFGE酶切图谱均发生条带数目和位置的改变;经洗必泰消毒后细菌染色体DNA X baⅠPFGE酶切图谱不变。结论连续消毒会使试验菌对二氯异氢尿酸钠、碘伏、季铵盐的抗力增加。对二氯异氢尿酸钠、季铵盐抵抗力增加的原因可能与质粒pO 157和染色体DNA的结构改变有关;抵抗碘伏的基因则位于染色体DNA上,对碘伏抗力增加与染色体DNA结构改变有关而与质粒pO 157无直接关系。

四川地区儿童呼吸道感染人博卡病毒的流行特征与基因变异分析

目的分析四川地区儿童呼吸道感染人博卡病毒(HBoV)的流行概况和临床特征,探讨HBoV四川分离株衣壳蛋白基因(VP1)变异特征。方法收集787例呼吸道感染儿童鼻咽分泌物标本,PCR方法检测HBoV,扩增VP1基因序列全长并测序,分析核苷酸和氨基酸变异特征。结果 HBoV的检出率为8.26%(65/787),50.77%(33/65)混合感染其它呼吸道病毒。全年均有检出,主要感染<3岁的儿童,其中男童检出率高于女童。引起的呼吸道症状主要有咳嗽、发热及咳痰。系统进化树分析表明8株四川分离株均为HBoV1基因型。碱基变异以GA+AG转换为主,非同义突变大于同义突变。结论 HBoV是四川地区儿童呼吸道感染的重要病原之一;VP1基因核苷酸序列变异以碱基转换为主;氨基酸突变位点可能与免疫逃避有关。

成都地区婴幼儿腹泻轮状病毒的基因分型研究

目的了解成都市婴幼儿轮状病毒的基因分型特点,以及流行优势毒株VP4基因核酸序列变异情况。方法收集2010年3月华西第二医院75份门诊婴幼儿腹泻标本,RT-PCR检测轮状病毒并进行G、P基因分型。据检测结果确定流行优势株,对两株优势株VP4基因进行T-A克隆和测序比对。结果 A组轮状病毒检出率为17.3%(13/75),其中G1型7株,G3型2株,4株未分型;P基因分型结果为P[8]型6株,P[4]型2株,P[10]型、P[6]型、P[9]型各1株,2株未分型;G/P组合结果以G1P[8]型为主,共5株;G1P[4]型,G3P[6]型各1株。VP4测序结果显示,两株优势株均为P[8]基因型,且毒株之间具有高度同源性(97%),与标准株之间同源性也达90%以上。结论 A组轮状病毒是成都地区2010年春季婴幼儿腹泻的重要病原之一,其血清型主要为G1型,流行优势株G/P组合为G1P[8]型。

对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的肺炎克雷伯菌耐药机理探讨

目的研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机制。方法对临床分离的1株肺炎克雷伯菌,通过纸片扩散法(K-B法)检测其对抗生素的敏感性;利用改良Hodge试验、乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验对此菌株进行碳青霉烯酶表型确证;利用PCR及DNA序列分析,确定其基因型;通过质粒提取、质粒接合试验,对耐药基因进行定位。结果药敏纸片法显示该菌株对碳青霉烯类抗生素敏感,其抑菌圈直径16～17cm,提示分离的菌株可能产碳青霉烯酶,改良Hodge试验、EDTA协同试验确证产金属β-内酰胺酶(MBLs),PCR扩增和序列分析发现该菌携带MBLs基因blaIMP,药敏纸片法证实接合子对美罗培南的敏感性降低,IMP-4基因位于接合子约73 000bp质粒上。结论肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机理是携带MBLs基因的blaIMP。

正常人肠道肠球菌esp基因与生物膜形成关系的初探

目的了解正常人肠道肠球菌生物膜形成情况,探讨肠球菌esp基因与生物膜形成的关系。方法用PCR法检测肠球菌esp基因,用96孔聚苯乙烯板进行生物膜形成试验。结果 84株正常人肠道肠球菌esp基因的检出率为14.3%,生物膜形成阳性率为25.0%,其中esp基因阳性株的生物膜形成率为83.3%,esp基因阴性株的生物膜形成率仅为15.3%。结论正常人肠道肠球菌形成生物膜的能力较弱,esp基因是肠球菌形成生物膜的重要因素,生物膜的形成不局限于esp阳性菌株。