口含人白细胞α干扰素对小鼠的免疫调节和抗病毒作用

目的研究人白细胞α干扰素口含使用对小鼠的免疫调节及抗病毒作用。方法将干扰素与辅料的混合粉喷洒于小鼠口腔 ,然后测定其腹腔巨噬细胞、脾脏NK细胞的活性及口腔唾液分泌型IgA(SIgA)的含量 ,观察滴鼻感染流感病毒后小鼠的生存率。结果干扰素口含使用能激活巨噬细胞、NK细胞活性 ,增加口腔唾液SIgA含量 ,并提高小鼠流感病毒感染后的存活率。

MyD88缺去突变基因转染降低病原菌感染的人呼吸道上皮细胞IL-8的分泌

白细胞介素-8(1L-8)是呼吸道炎症反应的重要介质。本实验通过构建突变M yD 88真核表达质粒(M yD 88 DN),转染人呼吸道上皮细胞株A 549及SPC-A-1,探讨其对病原菌感染上皮细胞IL-8表达的影响。结果显示:M yD 88 DN转染可降低结核杆菌、绿脓杆菌培养上清诱导的IL-8释放;对肺炎克雷伯杆菌和绿脓杆菌活菌侵袭细胞所刺激的IL-8分泌也有明显的阻断作用。提示突变M yD 88能够阻断细菌感染引起的呼吸道上皮细胞IL-8表达,可能成为呼吸道严重炎症反应基因治疗的新靶基因。

人胚胎成纤维细胞与小鼠胚胎成纤维细胞生物学特性比较

探讨人胚胎成纤维细胞用于人胚胎干细胞体外长期培养的可行性 ,以含 10 %胎牛血清的 DMEM(低糖 )溶液为培养基 ,对人胚胎成纤维细胞的生长形态、对胰酶的敏感性、生长曲线及细胞周期进行研究 ,并与小鼠胚胎成纤维细胞作比较。结果显示 ,人胚胎成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞在体外均为贴壁生长型细胞 ,与小鼠胚胎成纤维细胞相比 ,人胚胎成纤维细胞生长更旺盛 ,且细胞寿命更长 ;在室温条件下 ,对 0 .2 5 %胰酶更敏感 ,消化时间不宜超过 3min。提示人胚胎成纤维细胞不仅在生长状况上与小鼠胚胎成纤维细胞类似 ,而且作为人胚胎干细胞体外长期培养的饲养层 ,在使用期限上优于后者 。

新型小分子抗体scFv多聚体与肿瘤靶向

新型小分子抗体—单链可变区片段 (sc Fv)是由一弹性接头 (linker)将 VH和 VL 连接而成 ,是抗体具有抗原结合部位的最小功能结构单位。以分子量小、体内半衰期短、免疫原性低、可在原核细胞系统表达、易于基因工程操作等特点而倍受关注。依据接头的长度和 V区的方向 ,sc Fv分子可聚集形成二聚体 (Diabody)、三聚体 (tri-abody)和四聚体 (tetrabody)。我们就 sc Fv分子接头长度和 V区方向、sc Fv多聚体的表达和稳定性、sc Fv多聚体在体内的药代动力学、sc Fv多聚体的弹性和亲和力、鼠源性 sc Fv多聚体的体外应用、多特异性 Sc

苏林酸对大肠腺瘤细胞的生长抑制作用研究

目的 研究非甾体抗炎药苏林酸对大肠腺瘤细胞的生长抑制作用及其机制。方法 取人的散发性大肠腺瘤组织 ,分离培养腺瘤细胞 ,然后用苏林酸干预 ,通过 MTT比色法分析细胞生长活力 ,流式细胞仪分析 S期百分率 (SPF)和凋亡率。结果 用不同浓度苏林酸分别作用大肠腺瘤细胞 2 4、48和 72小时后 ,细胞生长活力明显降低 ,具有时间和剂量依赖性 ;作用 48小时后 ,SPF降低而细胞凋亡率则升高 ,除 0 .3mmol/ L 组外 ,其余各组的SPF和细胞凋亡率与对照比较均有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 上述结果提示苏林酸可抑制大肠腺瘤细胞的生长活力 。

Western Blot和流式细胞术检测磷酸化STAT3的比较

目的对Western Blot和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)这两种磷酸化STAT3的检测方法进行比较。方法用不同浓度的白细胞介素5(interleukin 5,IL-5)刺激人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60,活化细胞内的STAT3,然后分别用Western Blot和流式细胞术进行检测。结果 Western Blot与流式细胞术的检测结果一致。结论 Western Blot与流式细胞术用于磷酸化STAT3的检测各有优势,可以互为补充。

B细胞表位预测

从原理、方法及应用等多方面对B细胞表位预测研究的既往成果、当前现状及存在问题进行了回顾与分析 。

血小板源生长因子-α受体结构域切除对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨从血小板源生长因子 - α(PDGF- α)受体水平阻断对肺血管平滑肌增殖的影响。方法 将组织贴块法培养的肺动脉平滑肌细胞 (VSMC)分别施加小、中、大剂量的受体结构域切除的 PDGF- α受体腺病毒重组体 Ad5 CMV- Pa Rtr(ACP) ,通过四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察细胞不同时相的增殖曲线 ;采用流式细胞学技术观察不同干预条件下 VSMC细胞周期的变化。结果 中、大浓度 ACP对细胞增殖有明显抑制作用。中、大剂量 ACP干预后 ,VSMC生长明显受抑 ,波峰减弱或消失 ,第 7～ 9天生长曲线才呈现上升趋势。在中浓度的 ACP作用下 ,加入 PDGF- BB不能促进 VSMC的增殖。 ACP干预前后 ,VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化 ,以 G0 +G1 期细胞增多、S+G2 +M期细胞减少为特征。与对照组相比 ,各组的 G0 +G1 期细胞均有显著升高 (P<0 .0 5 )。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间 G0 +G1 期细胞有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 ACP作为细胞增殖抑制剂 ,能在中、大剂量下明显抑制肺 VSMC的增殖 ,可使 G0 /G1 期细胞数明显增多 ,且与

流式细胞术检测外周血白细胞内的磷酸化STAT3

目的将流式细胞术测定酪氨酸磷酸化STAT3的方法用于外周血白细胞内酪氨酸磷酸化STAT3的检测，为JAK—STAT途径以及其他细胞内信号转导分子的研究和临床检测提供新的实验手段。方法建立酪氨酸磷酸化STAT3的流式细胞检潮方法，收集正常人及白血病患者的外周血标本，经磷酸化STAT3FITC标记后，用流式细胞术进行检测。结果在11例白血病患者的外周血标本中，检测出2倒标本有STAT3酪氨酸（Y705）磷酸化活化。结论部分白血病患者外周血白细胞中有酪氨酸（Y705）磷酸化STAT3表达。FCM检测方法可用于外周血标本STAT3的检测。

DNA疫苗的作用机理以及抗肿瘤的临床应用进展

DNA疫苗诱发机体产生持久而强烈的免疫反应 ,随着分子生物技术的迅速发展 ,DNA疫苗的研究从理论的提出到技术的成熟 ,许多学者在DNA疫苗的作用机理、在抗肿瘤方面的应用以及DNA疫苗的安全性等方面做了大量卓有成效的探索 ,本文就此进行综述。

辅助性T细胞表位预测

辅助性T细胞表位是由十几个连续的氨基酸残基构成的特殊肽段 ,在体液与细胞免疫中有重大作用。本文回顾了辅助性T细胞表位预测的原理与方法 ;

STAT3在HL-60细胞内的表达

目的 :探讨人早幼粒细胞白血病细胞内STAT3的表达及酪氨酸磷酸化活化情况。方法 :培养人早幼粒细胞白血病细胞株HL 60 ,利用特异性抗体 ,用免疫沉淀法、聚丙烯酰胺凝胶 (SDS PAGE)电泳及WesternBlot方法进行检测。结果 :实验结果表明HL 60细胞内有STAT3α和STAT3 β的表达和酪氨酸 (Y70 5 )磷酸化活化。 结论 :本研究结果提示STAT3的异常表达和活化可能与人早幼粒细胞白血病的发生有关。

C-末端缺陷JAK3逆转录病毒载体的构建及在真核细胞中的表达

目的 以逆转录病毒 PL XSN为载体 ,构建重组逆转录病毒 C-末端缺陷的 JAK3[c- term defi-cient JAK3,JAK3(ΔC) ]载体 PL JAK3(Δ C) ,以 BAL B/ c3T3为靶细胞 ,转染 JAK3(ΔC) c DNA,检测 JAK3(Δ C)蛋白在真核细胞中的表达情况。为利用 JAK3(ΔC)对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法 用限制性内切酶法从质粒 Pc DNA3- JAK3(Δ C)中分离目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体 PL XSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体 PL JAK3(Δ C) ,通过转化感受态细菌扩增并检测 DNA序列及限制性内切酶酶切鉴定 ;用脂质体L IPOFECTAMINE介导法将 PL JAK3(Δ C)转染包装细胞 PA317细胞 ,并用 G4 18筛选抗性细胞克隆 ,收集病毒 ;用该病毒感染靶细胞 BAL B/ c3T3,G4 18筛选抗性克隆并测定病毒滴度 ;抗性细胞扩增培养 ,细胞溶解后经免疫沉淀 (IP)、Western blotting检测 BAL B/ c3T3细胞中 JAK3(Δ C)的表达情况。结果 1重组逆转录病毒载体 PL -JAK3(Δ C)酶切和 DNA测序均表明含有 2 796 bp的 JAK3(ΔC)基因 ;2病毒滴度为 1.2× 10 4 CFU/ ml;3PL JAK3(Δ C)转染 BAL B/ C3T3细胞中表达出了 JAK3(Δ C)蛋白 ,其相对分子质量为 10 7× 10 3。结论 该研究构建的 C-末端缺陷 JAK3重组逆转录病毒载体 PL JAK3(

人IL-5诱导的STAT3酪氨酸磷酸化

目的分析人早幼粒细胞白血病细胞内STAT3的酪氨酸磷酸化活化情况。方法培养人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60,分别用浓度为0,1.0,10,100 ng/ml的人白细胞介素(hIL)-5刺激,然后利用特异性抗体,用免疫沉淀法、聚丙烯酰胺凝胶(SDS PAGE)电泳及Western Blot方法进行检测。结果检测到HL-60细胞内不同浓度的STAT3表达。结论一定浓度的人IL-5能同时诱导HL-60细胞内STAT3α和STAT3α的酪氨酸(Y705)磷酸化,且在一定范围内这种诱导作用与IL-5的浓度呈正相关。

去C末端JAK3逆转录病毒载体对白血病细胞株NALM-6的影响

目的 :了解去C末端JAK3[JAK3(△C) ]基因对白血病细胞株NALM 6增殖和凋亡情况的影响 ,探索白血病基因治疗的新途径。方法 :用逆转录病毒作为载体 ,将JAK3(△C)基因导入NALM 6细胞 ,G4 18筛选阳性细胞株 ;用免疫沉淀 (IP)、SDS PAGE电泳、Westen blot检测JAK3(△C)对NALM 6细胞本身JAK3表达和磷酸化情况的影响 ;用MTT法检测NALM 6细胞和NALM 6 /JAK3(△C)细胞的增殖情况 ,了解JAK3(△C)对NALM 6细胞增殖的影响 ;用流式细胞术 (FCM )检测JAK3(△C)对NALM 6细胞凋亡的影响。结果 :JAK3(△C)能抑制NALM 6细胞本身JAK3的磷酸化活化 ;从生长曲线上可以看出 ,稳定表达JAK3(△C)的NALM 6 /JAK3(△C)细胞的增殖速率明显比NALM 6细胞阴性对照组低 ;从FCM图中可以看出NALM 6 /JAK3(△C)细胞出现了亚G1峰 (即凋亡峰 ) ,而NALM 6细胞未出现G1峰 ,同时NALM 6 /JAK3(△C)G0 /G1期细胞明显增多 ,而S、G2 /M期细胞相对减少 ,而根据其相应的软件计算出的这两组细胞的增殖指数和凋亡率也存在显著差异 (P<0 .0 5 ) ,说明导入了JAK3(△C)基因的NALM 6 /JAK3(△C)细胞凋亡增加、增殖能力明显降低。结论 :JAK3(△C)作为一种显性阴性分子 。

去C末端JAK3基因重组逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

目的 :构建去C末端Jak3重组逆转录病毒载体 ,获得能稳定产生去C末端Jak3基因的重组逆转录病毒的细胞株 ,为利用去C 末端Jak3对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法 :用限制性内切酶从质粒PcJak3(ΔC)中切出目的基因并从凝胶中回收该目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC) ,通过转化感受态细菌后氨卞青霉素筛选、酶切及DNA测序鉴定 ;用脂质体LIPOFECTAMINE转染包装细胞PA317细胞并用G4 18筛选抗性细胞 ,转染的包装细胞包装出病毒粒子 ,同时用PCR方法检测PA317阳性细胞中是否插入目的基因片段 ;用该病毒感染靶细胞NIH3T3,G4 18筛选抗性克隆 ,检测出病毒滴度 ;经免疫沉淀 (IP)、SDS PAGE电泳、Westernblotting检测NIH3T3细胞中Jak3(ΔC)的表达情况。结果 :①重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC)酶切和DNA检序均表明已含有 2 796bp的Jak3(ΔC)基因 ;②转染的PA317阳性细胞经PCR扩增后得到与目的基因一致的片段 ;③病毒滴度为 1.2～ 2 .0× 10 4CFU/ml;④转染的NIH3T3细胞中表达出了Jak3(ΔC)蛋白 ,其分子量为 10 7KD。结论 :我们已成功构建了去C 末端Jak3重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC) ,并得到稳定产生病毒粒子的PA317细胞克隆 ,为利用Jak3(ΔC)

浅谈结合多种教学模式在生理学教学中的运用

生理学是一门重要的基础医学理论课程,在生理学教学过程中运用恰当的教学方法,使抽象枯燥的概念和现象变得形象、生动、易懂,从而提高学习兴趣,启发学生思维。结合实际教学体会,探讨了多种教学方法在实际教学中的应用。

用GM-CSF和IL-4在体外诱导高纯度CD14^+树突状细胞

本研究改进传统的树突状细胞 (DC)诱导方法 ,用 GM- CSF(15 0 ng/ml)和 IL- 4 (80 0 U/ml) ,在体外经7d从健康人外周血中诱导出了大量高纯度 DC,其高表达 HL A- 、HL A- 类分子 ,共刺激分子和黏附分子 ,同时还高表达其前体单核细胞的特异性标志 CD14分子 ,显示出成熟 DC的特征。这些 CD14 + DC能强烈诱导同种异体淋巴细胞的增埴 ,其内吞能力在第 3天达最高 ,之后明显下降。此结果丰富了 DC的类型 ,并为 CD14 +