酶受体分析法测定3AO细胞LH/hCG受体结合特性

建立培养细胞的酶受体分析法(enzyme receptor assay, ERA),应用ERA研究卵巢癌细胞株3AO的LH/hCG受体特性。采用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP) 人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, hCG)的酶标配体交联物, 与培养包被的3AO细胞在适当的条件下建立 ERA,并以人卵巢癌细胞株SKOV 3作为阴性对照, 测定3AO细胞膜上LH/hCG受体的竞争结合、特异性结合、饱和结合特性并计算受体的最大结合容量(Bmax)和解离常数(Kd)。ERA测得 3AO细胞 LH/hCG受体的 Bmax为 3.65mmol/g蛋白, Kd 为0.41nmol/L,未标记配体 hCG抑制 LH/hCG受体对酶标配体(HRP hCG)特异结合的IC50为0.92μmol/L。结论: 竞争结合实验、特异性结合实验、饱和结合实验表明 3AO细胞膜上存在高亲和力的LH/hCG受体。