2种纯化流感病毒方法的比较研究

目的比较2种纯化浓缩鸡胚尿囊液中流感病毒方法。方法将流感病毒鸡胚尿囊液分别采用蔗糖密度梯度离心法(sucrose density gradient centrifugation,SDGC)和红细胞吸附释放法(absorptionandrelease RBC,AR RBC)进行纯化,收集纯化病毒测定血凝效价,比较2种纯化方法。结果SDGC法纯化病毒可在30%和45%蔗糖层面交界处的区带中检测到流感病毒,血凝效价为1∶2560;用AR RBC法纯化病毒过程中用新鲜鸡红细胞出现了溶血现象,而用甲醛处理过的鸡红细胞则无此现象,血凝效价均为1∶2560。结论与SDGC法纯化病毒比较,AR RBC法是一种经济实用、操作简便并有较高纯化效率的方法,尤以甲醛处理过的鸡红细胞纯化效果最好。

端粒酶相关的抗肿瘤疗法

端粒、端粒酶与肿瘤发生的关系是近年来肿瘤研究领域的热点之一。端粒酶在 85 %以上的恶性肿瘤组织中阳性表达 ,在癌旁正常组织或良性肿瘤中仅为 4 2 % ,而在正常体细胞则一般为阴性。因此 ,有两种端粒酶相关的方式治疗端粒酶阳性的肿瘤细胞 ,一种是直接抑制端粒酶活性 ,另一种是靶向端粒酶表达的肿瘤细胞。把端粒酶作为肿瘤治疗的靶点为恶性肿瘤的早期诊断。

RNA干扰及其抗病毒作用

RNA干扰 (RNAi)是一种新发现的通过 ds RNA介导的特异同源靶基因沉默途径。 RNAi主要包括两个步骤 :RNase 样核酸酶切割 ds RNA而生成 2 1- 2 3nt的 si RNA和 si RNA引导 RNA诱导的沉默复合体 (RISC)降解同源性靶基因 m RNA。在某些生物体中 RNAi具有放大效应。通过将 - 2 1nt si RNA导入哺乳动物细胞的 RNAi技术不仅可避免非特异干扰素反应 ,更重要的是还可介导序列特异的基因沉默。最近将 RNAi应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果 ,预示 RNAi有望成为一种预防、治疗病毒性疾病的新手段。

甲型流感病毒M2基因真核表达载体的构建及初步表达

目的:构建含有甲型流感病毒M2基因的真核表达载体。体外转染真核细胞株HEK293细胞并检测目的蛋白的表达。方法:从接种人流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增M2基因。通过分子克隆技术将所扩增片段插入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+)。经酶切及PCR鉴定后用PolyFect脂质体将其转染到HEK293细胞中,通过免疫荧光技术鉴定其表达。结果:经双酶切、PCR及测序鉴定证实M2基因的真核表达载体构建成功。免疫荧光技术证实流感病毒M2基因的表达。结论:甲型流感病毒M2蛋白是一种具有高保守性,可形成离子通道并影响流感病毒表面蛋白血凝素(HA)天然构象的形成,被认为是具有交叉免疫保护性的结构蛋白。甲型流感病毒M2基因真核表达质粒的构建及成功表达将为甲型流感病毒基因工程疫苗,通用疫苗和核酸疫苗的研究打下基础。

RNA干扰及抗病毒研究进展

RNAi是一种高度特异化的mRNA降解过程,能在哺乳动物细胞中诱导特异的基因沉默。这一发现为人类某些疾病的治疗研究开辟了新的途径。随着研究的不断深入,RNA i在抗病毒研究中受到越来越多的关注。本文拟就RNA i的机制、siRNA靶系列的选择及制备和抗病毒研究现状作一综述。

小鼠β-防御素3的原核表达、表达条件优化及其抗菌活性

目的运用基因工程方法获得重组小鼠β-防御素3(MBD3),优化表达条件,并研究其抗菌活性。方法通过反转录PCR方法从小鼠肺组织中扩增Mbd3基因,构建其原核表达质粒,将该质粒转入大肠埃希菌表达菌株Rosetta-gami(2)。优化融合蛋白的表达条件。通过亲和层析、凝血酶酶切、超滤浓缩得到MBD3的重组成熟肽(rMBD3),并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和Western blot鉴定其正确性。采用微量液体抗菌实验检测rMBD3对多种常见病原性细菌和真菌的抗菌活性。结果获得表达MBD3融合蛋白(fMBD3)的工程菌,fMBD3的表达量可达菌体总蛋白的62.9%,可溶性fMBD3约为1.15g/L。纯化的rMBD3对单细胞真菌和革兰阳性菌显示出较好的抑菌活性。结论 rMBD3具有一定的抗菌活性,为进一步研究该多肽的其他生物学活性及其应用提供参考依据。